微生物的诱发突变实验_亚硝基胍法
实验方法原理亚硝基胍(NTG,N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍)是一种有效的化学诱变剂,在低致死率的情况下也有很强的诱变作用,故有超诱变剂之称。它的主要作用是引起 DNA 链中 GC→AT 的转换,亚硝基胍也是一种致癌因子,在操作中要特别小心,切勿与皮肤直接接触。凡有亚硝基胍的器皿,都要用 1 mol/L NaOH 溶液浸泡,使残余的亚硝基胍分解破坏。实验材料枯草芽孢杆菌 BF7658试剂、试剂盒淀粉培养基LB 液体培养基亚硝基胍碘液无菌生理盐水仪器、耗材玻璃涂棒血细胞计数板振荡混合器实验步骤1. 菌悬液制备1.1 将试验菌斜面菌种挑取一环接种到含 5 ml 淀粉培养液的试管中,置37℃ 振荡培养过夜。1.2 取 0.25 ml 过夜培养液至另一支含 5 ml 淀粉培养液的试管中,置 37℃ 振荡培养 6~7 h。2. 平板制作将淀粉琼脂培养基礅化,倒平板 10 套,凝固后待用。3. 涂平板取 0.2 ml 上述菌液放......阅读全文
关于亚计量沉淀法的介绍
取甲和乙两份等量放射性同位素溶液,各含待测元素。克,其放射性为Ao,放射性比度为w。将乙溶液加到含x克待测元素的试液中,进行同位素稀释后,其放射性比度为s1。如果从甲和乙(已与试液混合)溶液中分另l]等量沉淀出待测元素w0克,分别测得其放射性为Aa和Ab。 这样的方法就避免了用一般化学法定量,
硝基芳香污染物微生物降解新机制
硝基芳香化合物是一类重要的化工原料,广泛应用于医药、农药、染料、杀虫剂等化工产品的生产。该类化合物大多具有较高的毒性,在食物链中具有富积和放大效应,对人体具有致畸、致癌、致突变等性质,严重威胁人类健康。2,6-二溴-4-硝基酚(2,6-dibromo-4-nitrophenol,2,6-DBNP
免疫学实验二硝基氯苯(DNCB)介绍
二硝基氯苯(DNCB)介绍: 二硝基氯苯(DNCB)是一种化学制剂,属半抗原,能与上皮蛋白的可溶部分共价结合成为完全抗原。 DNCB是淡黄色结晶粒末,可溶于丙酮。用0.1 毫升(含1-2mgDNCB)滴于2cm直径的圆环内上臂内侧皮肤表面,使之均匀涂布,待丙酮挥发后取下圆环。14天后再将0.1
免疫学实验二硝基氯苯试验介绍
二硝基氯苯试验介绍: 二硝基氯苯试验主要用于干燥综合征、咽部麻风、麻风病等病的辅助诊断方法。 二硝基氯苯试验正常值: 正常为阳性。试验后24-72小时,可出现水肿性红斑、丘疹或水疱。 二硝基氯苯试验临床意义: 异常结果:(1)升高:①OT、PPD:结核病时强阳性为多
测定渗透压对微生物的影响实验——法二
实验方法原理在等渗溶液中,微生物正常生长繁殖;在高渗溶液(例如高盐、高糖溶液)中,细胞失水收缩,而水分为微生物生理生化反应所必需,失水会抑制其生长繁殖;在低渗溶液中,细胞吸水膨胀,细菌、放线茵霉菌及酵母菌等大多数微生物具有较为坚韧的细胞壁,而且个体较小,因而在低渗溶液中一般不会像无细胞壁的细胞那样容
微生物污染的排除实验——抗生素除菌法
实验方法原理细胞培养中用抗生素是杀灭微生物的主要手段;但迄今尚无对抗支原体特效抗生素。各种抗生素性的性质不同,联合应用比单用效果好;一般在已发生微生物污染后,再使用抗生素,常难以根除.预防性应用比污染后使用更好。有时抗生素仅对细菌有抑制作用,而无杀灭效应;反复使用抗生索还能使微生物产生抗药性,且对细
亚硝基R盐分光光度法测定合金钢中的钴
一、方法要点在硫磷混酸介质中,当有乙酸钠缓冲溶液存在下,钴与亚硝基R盐生成红色络合物,根据颜色的深浅而测得钴的含量,铁、镍、铜等元素也与亚硝基R盐形成有色络合物,但可采用硫酸来破坏其络合物的办法而消除干扰。本法适用于含钴量在1%~5%的测定。二、试剂与仪器(1)盐酸(密度为1.19g/mL)、硝酸(
异硫氰酸胍酚法植物组织总RNA的制备
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下:GIT与β-巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性;GIT与 十二烷基肌氨酸钠 (Sarcosyl)作用使蛋白质变性,从而释放RNA;酸性条件下DNA极少发生解离,同蛋白质一起变性被离心下来,RNA则溶于上清中。该法所提 RNA纯度高完整性好较适合纯化mR
植物组织总RNA的制备:异硫氰酸胍—酚法
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下:GIT与β-巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性;GIT与 十二烷基肌氨酸钠 (Sarcosyl)作用使蛋白质变性,从而释放RNA;酸性条件下DNA极少发生解离,同蛋白质一起变性被离心下来,RNA则溶于上清中。该法所提RNA纯度高完整性好较适合纯化mRNA,
关于遗传毒性试验—转基因小鼠基因突变试验的基本介绍
转基因小鼠基因突变试验可在整体状态下检测基因突变,比较不同组织(包括生殖腺)的突变率,确定靶器官,对诱发的遗传改变作精确分析等。1989年Gossen等报道了LacZ转基因小鼠突变测试系统。近年来,国外已陆续发展了多种用于突变检测的转基因动物,其中3种已投入商品化生产,MutaTM小鼠、Big-
酶联免疫法检测硝基呋喃类抗菌剂
硝基呋喃类(Nitrofurans)抗菌剂是一种广效性抗生素,因价格较低廉且疗效佳,广泛用于畜禽及水产养殖鱼类,用以治疗由大肠杆菌或沙门式杆菌所引起之肠炎,养殖鱼之疥疮、赤鳍病、溃疡病等,于饲料中添加或养殖药浴使用。 硝基呋喃类抗菌剂常见有以下四种药物———呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃
细胞转化的概念、方式和基本过程
体外培养的细胞,由于环境因子因素的影响,有时会发生自发转化,由原来的二倍体核型变成多倍体/异倍体核型,细胞的生长特性也随之发生改变而获得永生化,失去接触抑制,可无限繁殖传代。但之二中自发产生的转化不仅时间长,而且转化率极低,介于10-6-10-4之间,需要大量细胞,成功的把握不大,条件也难以控制。人
关于纤维素酶的菌种选育介绍
菌种选育是纤维素酶生产的基础性工作,国内外许多专家进行了大量研究,为了生产高质量的纤维素酶产品,王家林等(1996)在吸收国内外经验的基础上,先后引进了绿色木霉木10、绿色木霉Sn-91014、康氏木霉NT-15、黑曲霉XX-15A,在此基础上,采用了紫外线、特定电磁波辐射、线性加速器,亚硝基胍
微生物分离纯化实验——简易单孢子分离法
实验方法原理简易单孢子分离法是一种不需显微单孢操作器,直接在普通显微镜下利用低倍镜分离单孢子的方法。它采用很细的毛细管吸取较稀的萌发的孢子悬浮液滴在培养皿盖的内壁上,在低倍镜下逐个检查微滴。将只含有一个萌发孢子的微滴放一小块营养琼脂片,使其发育成微菌落。再将微菌落转移到培养基中,即可获得仅由单个孢子
测定微生物数量实验_显微镜直接计数法
实验方法原理利用血球计数板在显微镜下直接计数,是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液(或孢子悬液)放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中,在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的( 0.1 mm2),所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积
2,4二硝基苯肼法和荧光法的优缺点
1、优点:具有简便、快速、比较准确等优点,适用于许多不同类型样品的分析。2、缺点:是不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量,易受其他还原物质的干扰。草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸,丙酮酸能够与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙。
关于盐酸二甲双胍的鉴别测定介绍
1、取盐酸二甲双胍约10mg,加水10mL溶解后,加10%亚硝基铁氰化钠溶液-铁氰化钾试液-10%氢氧化钠溶液(等体积混合,放置20分钟使用)10mL,3分钟内溶液呈红色。 2、盐酸二甲双胍的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集631图)一致。 3、盐酸二甲双胍显氯化物的鉴别反应(通则030
硝基呋喃的应用
人类疾病治疗硝基呋喃类药物在人类疾病治疗上也有一定的应用,以下是常见硝基呋喃类药物的简单应用介绍。呋喃妥因(呋喃坦啶)为抑菌剂,多数大肠杆菌、肠球菌对其敏感。血药浓度很低,不适用于全身感染的治疗,临床主要用于敏感细菌所致的泌尿道感染。常见消化道反应如恶心、呕吐、腹泻。偶见药热、粒细胞减少等变态反应及
测定动物源性食品硝基呋喃代谢物残留量实验_HPLCMS/MS法
实验材料动物组织试剂、试剂盒聚四氟乙烯Na3PO4NaOH乙酸乙酯仪器、耗材离心管串联质谱实验步骤1. 提取 取2.000 g样品于50 mL聚四氟乙烯离心管中,依次加入100 uL混合内标工作液(10 ng/mL),5~20 mL 0.2 mol/L的HCl溶液(以样品完全浸润为准)和50 uL
亚细胞定位的GFP融合蛋白表达法
GFP是绿色荧光蛋白,在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光,从而可以精确地定位蛋白质的位置。绿色萤光蛋白(GFP)是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色荧光。通过基因工程技术,绿色萤光蛋白(GFP)基因能转进不同物种的基因组,在后代中持续表达,并且能根
基因突变的检测方法有哪些?
从基因突变的性质来看,检测方法分为显性突变法、隐性突变法和回复突变法三类。①显性致死突变法,用待测物质处理雄性小鼠,使处理的雄鼠和未处理的雌鼠交配,观察母鼠子宫中的死胎数,死胎数愈多则说明诱发的显性致死突变愈多。这一方法适用于慢性处理,其优点是可靠性较大,而且测试对象是哺乳动物。缺点是不能区别出药物
DNA定点突变实验
DNA定点突变实验 实验方法原理 定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方
DNA定点突变实验
DNA定点突变可用于:(1)研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的不同活性或者动力学特性;(2)改造启动子或者DNA作用元件;(3)提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性、研究蛋白的晶体结构,以及药物研发、基因治疗等等方面。实验方法原理定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以
DNA定点突变实验
实验方法原理 定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。单点突变的原理是从常规E.coli中经纯化试剂盒(Miniprep)或者氯化铯纯化抽提得到质粒。设计一对包含突变位点的
动物组织细胞总RNA的提取(异硫氰酸胍法和TRIzol法)1
一、实验原理RNA是基因表达的中间产物,存在于细胞质与核中。对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的,如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败,在很大程度上取决于RNA的质量。由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形
动物组织细胞总RNA的提取(异硫氰酸胍法和TRIzol法)2
(二)TRIzol试剂提取RNA1.取新鲜动物组织0.1~0.2g置于组织匀浆器中,加入预冷的Trizol液 1ml 于玻璃匀浆器中,在冰浴中迅速匀浆15~30s,以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一1.5ml Ep管中,于室温下静置5min。2.加入200μl氯仿,剧烈振摇15s混匀后,室温静
免疫学实验非二硝基氯苯(DNCB)介绍
二硝基氯苯(DNCB)介绍: 二硝基氯苯(DNCB)是一种化学制剂,属半抗原,能与上皮蛋白的可溶部分共价结合成为完全抗原。 DNCB是淡黄色结晶粒末,可溶于丙酮。用0.1 毫升(含1-2mgDNCB)滴于2cm直径的圆环内上臂内侧皮肤表面,使之均匀涂布,待丙酮挥发后取下圆环。14天后再将0.1
澳大利亚更新食品微生物标准纲要
2018年9月,澳大利亚更新了食品微生物标准纲要。纲要汇集了对食品安全具有重要意义的病原体、指示微生物、即食食品的微生物指导标准和为特定食品建立的加工卫生标准的信息。 更新的版本包含乳制品的工艺卫生标准,包括原料散装奶、加工液态奶、奶油和奶酪。此外,还增加了一个环境监测的部分,为单核细胞增生李
赖氨酸的生产现状介绍
L-赖氨酸最初是从蛋白质水解物中分离得到的,蛋白质水解法一般以动物血粉为原料,此法特点是工艺简单,但原料来源有限,仅适合小规模生产。后又出现了化学合成法、酶法,使用的合成法主要有荷兰的DMS法和日本的东丽法,此法最大缺点是使用剧毒原料光气,可能残留催化剂,产品安全性差,存在严重的环保问题。1960年
赖氨酸的生产现状介绍
L-赖氨酸最初是从蛋白质水解物中分离得到的,蛋白质水解法一般以动物血粉为原料,此法特点是工艺简单,但原料来源有限,仅适合小规模生产。后又出现了化学合成法、酶法,使用的合成法主要有荷兰的DMS法和日本的东丽法,此法最大缺点是使用剧毒原料光气,可能残留催化剂,产品安全性差,存在严重的环保问题。196