报告基因实验——利用冷型CCD像机进行LUC的活体检测

实验材料LUC试剂、试剂盒D- 萤光素水溶液仪器、耗材液氮冷却相机实验步骤对于萤光素酶的检测来说,需要解决荧光素渗透进入活体组织这一问题 [7]。多数情况下,用荧光素溶液简单地喷洒植物就可以解决,但是一些组织,如发育后期的种子不能吸收荧光素,需要产生伤口(见 注 27 ) 以利于底物进入 [52, 53 ]。通过组织提取或者原位杂交的方法,植物中 LUC 活性的明显缺失应该很容易得到确定 [7, 54]。因为伤口会影响荧光素-O2 的动态平衡,即使是重复喷洒荧光素之后达到了平衡,也难于利用 LUC 来研究受创伤影响的基因表达。尽管O2和Mg2+ 一般不会限制萤光素酶的活性,但是在特殊情况下,如植物组织被淹没时,O2 含量会成为限制因素,随之导致产光量的降低 [7]。生长在不同氧合水平下的细胞悬浮培养物被检测到不同水平的 LUC 活性。1. 材料的准备(1) 用喷雾器将 1~......阅读全文

转基因植物Gus报告基因的检测

一、原理Gus (b-glucuronidase)基因作为一种报告基因,在植物遗传转化研究中有广泛的用途。Gus基因来自于大肠杆菌,编码b-葡聚糖苷酶(一种水解酶),可催化底物5-溴-4-氯-3-吲哚葡聚糖醛酸苷(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide,缩写为

荧光素酶报告基因检测的操作步骤

荧光素酶检测系统,可用裂解液来温和而快速地提取真核细胞中的荧光素酶,用其底物来检测荧光素酶活性。检测步骤如下:1. 加裂解缓冲液裂解转染的细胞。2. 将上述裂解物转移入微孔板或者试管中(根据检测的需要选择所用器材类型)。3. 加入含有所有酶反应成分(必须包括底物荧光素),使化学发光反应开始。4. 使

标记基因的分类

选择基因和报告基因都可以看做是标记基因,都起着标记目的基因是否成功转化的作用,但是它们又有着各自的特点。选择基因(又称选择标记基因),主要是一类编码可使抗生素或除草剂失活的蛋白酶基因,这种基因在执行其选择功能时,通常存在检测慢(蛋白酶作用需要时间)、依赖外界筛选压力(如抗生素、除草剂)等缺陷。而报告

制备型蒸发光散射检测器进行高精度检测

  安捷伦气相色谱可选配多种检测器及填充柱、分流/不分流毛细管柱进样系统;全兼容气相色谱仪检测器及相关检测器控制板、色谱工作站和自动进样器。性价比,性能优良,运行稳定可靠。   安捷伦气相色谱的产品特性:   ●载气选件:氦气节省模块、氢气传感器和替代载气解决方案可以显著降低氦气的使用量,提高实

制备型蒸发光散射检测器进行高精度检测

  制备型蒸发光散射检测器是通用型检测器,可以检测没有紫外吸收的有机物质,如人参皂苷、黄芪甲苷等。制备型蒸发光散射检测器是一种通用型的检测器,可检测挥发性低于流动相的任何样品,而不需要样品含有发色基团。蒸发光散射检测器灵敏度比示差折光检测器高,对温度变化不敏感,基线稳定,适合与梯度洗脱液相色谱联用。

HORIBA推出新一代SynapsePlus-CCD深冷高速科学光谱相机

  分析测试百科网讯 近日,HORIBA推出新一代SynapsePlus CCD用于高速和低光应用。  SynapsePlus提供超快速电子元件,同时保持低噪声和优异的信号线性,所有这些都为诸如拉曼和光致发光等应用中低光和快速动力学研究带来无与伦比的灵敏度。  可以使用多个传感器,Synapse C

美国将利用国际空间站进行医学实验

美国宇航局9月12日与美国国家卫生研究院签署谅解备忘录,双方未来将进行长期合作,让美国科学家以国际空间站为平台,在太空进行医学实验。 国际空间站美国舱段的科学实验目前基本还局限于美国宇航局范围内,主要目的是为宇航员重返月球乃至登上火星进行相关科研。而国际空间站在2010年真正建成后,科研能力将大大提

利用智能种子发芽室进行发芽实验需要注意什么?

    利用智能种子发芽室进行种子的发芽试验,主要是为了帮助科研人员更好的对不同批次的种子质量进行准确评估,让科研人员能够准确的了解种子的最大发芽潜力,从而帮助提高种子发芽 试验的准确度,保苗增产和节约用种子,保护使用者利益和经营单位信誉。而在使用智能种子发芽室进行种子发芽实验的过程中,为了最大限度

利用微型生物反应器系统进行实验设计

高效的生物工艺开发与优化实验设计(DOE)是对实验进行组织、计划、执行和统计分析的最具价值的高效方法之一。虽然可以通 过在单一生物反应器内重复实验获得DoE结果,但设计开发并行实验的微型生物反应器系统(如 ambr15 或ambr250系统)为完成DoE提供了更优异经济的条件。由于工艺开发过

利用微型生物反应器系统进行实验设计

   实验设计(DOE)是对实验进行组织、计划、执行和统计分析的zui具价值的方法之一。虽然可以通 过在单一生物反应器内重复实验获得DoE 结果,但设计开发并行实验的微型生物反应器系统(如 ambr15 或ambr250 系统)为完成 DoE 提供了更优异经济的条件。由于工艺开发过程中涉及到众多互相

活体GFP绿色荧光成像系统

  系统提供动物活体绿色荧光蛋白的实时观察与成像等一系列的荧光检测。能够应用在像深度肿瘤,大动物等活体肿瘤追踪观察成像研究。    该设备是一个高灵敏度的图像成像工作系统,主要利用特定波长的激光进行激发后,通过高灵敏度的致冷CCD进行实时检测后,获得所需的各类 特性的图像,有利于进一步的分析作用 。

可携带报告基因的甲型流感病毒“人造”成功

  中国科学院广州生物医药与健康研究院近日宣布,该所成功研制出可以携带报告基因的甲型流感病毒。该病毒可模拟各种类型的野生流感病毒,不但为流感病毒的基础研究提供了重要支撑,也为流感疫苗、抗流感病毒药物和抗体的研发提供了思路。该研究成果日前发表在《病毒学期刊》上。  近年来,

双荧光素酶报告基因检测(一)

双荧光素酶实验是广大科研工作者经常会遇到的实验。双荧光素酶报告基因通常以萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)为报告基因,以海肾荧光素酶(Renilla luciferase)为内参基因。这样构建的报告系统具备很多优势,包括检测灵敏度高、动态范围广、应用灵活等。同时双荧光素酶实验也有

双荧光素酶报告基因检测(三)

双荧光素酶报告基因检测(三)萤火虫荧光素酶片段互补成像(LCI)技术是一种新兴的蛋白质相互作用研究方法,其中两个被研究的目标蛋白质分别与萤火虫荧光素酶的N端和C端相连。当这两个蛋白质发生相互作用时,荧光素酶的两个段落会接近并组合成一个活性酶。结合烟草瞬时表达系统的LCI技术,能够在植物细胞内进行实时

双荧光素酶报告基因检测(二)

双荧光素酶报告基因检测(二)双荧光素酶实验通常被用来评估miRNA是否与其潜在的靶基因发生相互作用。实验中,预测的miRNA靶标基因的3’-UTR序列被克隆到含有萤火虫荧光素酶的报告基因载体的3’-UTR位置。如果miRNA与插入到质粒中的目标序列发生结合,miRNA将通过抑制该序列的翻译来降低萤火

如何利用XRF卤素检测仪器进行定量分析?

 如何利用XRF卤素检测仪器进行定量分析?  在包含某种元素1的样品中,照射一次X射线,就会产生元素1的荧光X射线,不过这个时候的荧光X射线的强度会随着样品中元素1的含量的变化而改变。元素1的含量多,荧光X射线的强度就会变强。注意到这一点,如果预先知道已知浓度样品的荧光X射线强度,就可以推算出样品中

利用SpectraMax-Paradigm多功能检测平台同时进行细胞凋亡和..

利用SpectraMax Paradigm多功能检测平台同时进行细胞凋亡和细胞坏死的筛选工作简介   细胞凋亡和细胞坏死的本质均为细胞死亡,但我们可以通过其发生机制和病理形态学方面所表现出的特征加以区别。细胞凋亡指的是细胞程序性的死亡,不会发生细胞膜损伤;细胞坏死则被认为是因病理而产生的被动死亡,会

影响小动物活体可见光成像的因素(一)

小动物活体成像,是分子影像学的一种,主要通过生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术来进行。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cyt及dyes等)进行标记。自从1999年,美国

IVScope系列小动物活体成像系统在生命科学研究中的应用2

3、活体成像的三个优点①可以在完整的生物体内进行,具有足够的空间和时间分辨率,用于研究生物体内的生物过程。②对同一个研究个体进行长时间反复跟踪成像,避免个体差异,提高数据的可比性,又不需要杀死模型动物,节省了大笔科研费用,保证结果的准确性。③非侵入式地检测活体内特异的生物学行为,最大限度地模拟人体内

销钉冷喂料挤出机

  在对挤出技术的不断探索中, 美国的 E n i r o ya l 公司作出了一大贡献, 即 2 0世纪 6 0年代后期和9 0年代初开始了销钉技术的研究, 将销钉从机筒圆周方向径向插入螺杆螺纹槽中, 将流动的胶料进行剪切和搅拌。胶料变成熔体以低剪切速率在螺杆螺纹中流动, 逐渐形成连续的粘流体,

深冷式粉碎机

整套深冷式粉碎机由料仓,机械粉碎机,引风机,深冷式粉碎机旋风器,振动筛,液氮罐等组成:一、工作原理该深冷式粉碎机系统以液氮为冷源,被粉碎物料通过冷却在低温下实现脆化易粉碎状态后,进入机械粉碎机腔体内通过叶轮高速旋转,物料与叶片,齿盘,物料与物料之间的相互反复冲击,碰撞,剪切,摩擦等综合作用下,达到粉

基因工程中标记基因的作用

标记基因,原本是基因工程的专属名词,但是现在它已经成为一种基本的实验工具,那么标记基因的作用有哪些呢?和报告基因的差别又是什么?据基因学资料显示,标记基因是一种已知功能或已知序列的基因,能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说,它是重组DNA载体的重要标记,通常用来检验转化成功与否;在基因定位

分子影像学与干细胞移植活体示踪的研究进展

【摘要】  近年来,干细胞在神经系统疾病、血液病和心脏疾病治疗中获得广泛应用。干细胞移植后,活体示踪干细胞的存活和迁徙具有重要意义。分子影像学技术的发展使干细胞活体示踪成为可能,光学成像、磁共振成像、单光子发射计算机断层显像、正电子发射计算机断层显像是临床和实验中常用的分子影像学方法,具有各自的

要不要动物活体实验

  我在带学生做动物实验.每个纲都有一种代表动物.虽然是老师,但我的心中很沉重.由于人类自身的需要,有时候不得不利用动物做活体实验或活体解剖.从某个角度来说,这是残忍的,但是为了人类自身,不得不做.一番悲天悯人后,不得不承认,人类的医学、药物学和生物学等诸多学科的发展离不开活体实验.这个残酷的现实似

实验型喷雾干燥机的特性

  1、喷雾、干燥室及收集装置采用透明优质耐高温高硼硅玻璃制造,使得喷雾干燥过程在无污染及稳定的环境下进行。整个喷雾干燥实验进程可视,便于掌控实验进程并能及时发现和调整问题。所有玻璃元件易拆卸,易清洗。  2、内置进口全无油空压机,喷粉的颗径呈正态分布,流动性好,而且噪音非常低,小于60db, 符合

实验型喷雾干燥机的属性

  最大水份蒸发率:1500-2000ML/H  蠕动泵进料范围:50-2000ML/H  干燥空气流量:0-5.5MMin.最大风压 686pa  喷雾气体流量:0-4.2 M/H,喷雾压力 2-8Bar  喷雾系统:带有(0.5--2.5MM) 的两流体喷嘴  射流器(通针):0-20S之间可自

小动物体内可见光三维成像技术研究进展(二)

Key Words: animal imaging; in vivo optical imaging; 3-Dimentional bioluminescence; fluorescence; tumormetastasis活体动物体内光学成像(optical in vivo imaging)主

应用MD微孔板读板机和双报告系统检测NFκB活性(一)

前言报告基因对于基因表达的研究来说是非常有用的工具,它可以代替要研究的目的基因,从而帮助我们了解目的基因的信号通路和相关的疾病。荧光素酶是最常用的报告基因,使用光度计和化学发光功能的微孔板读板机我们可以很容易的检测到荧光素酶,另一方面,由于在细胞实验中其背景较低,因此具有很高的灵敏度。我们通常用萤火

荧光素酶基因标记肿瘤细胞的实验步骤

哺乳动物生物发光,一般是将Firefly luciferase基因(由554个氨基酸构成,约50KD)即荧光素酶基因整合到预期观察的细胞染色体DNA上以表达荧光素酶,培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株,当细胞分裂、转移、分化时, 荧光素酶也会得到持续稳定的表达。将标记好的细胞接种到实验动物

如何利用微孔读板机进行微量DNA和蛋白的高通量检测?

介绍在遗传学和分子生物学中,对核酸和蛋白进行定量是许多复杂实验必要的上游检测。虽然已有多种检测方法,但是最常用的仍然是紫外分光光度法。紫外分光光度法的原理是利用分子在固定波长范围吸收光和散射光,在朗伯比尔定律(方程式1)的基础上计算待测物质的浓度。这种方法还需要提前知道样品的摩尔消光系数和通路长度。