双向电泳前去垢剂和离液剂对蛋白质的增溶作用实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒十二烷基麦芽糖苷阳离子去垢剂尿素贮存液尿素-硫脲贮存液仪器、耗材超速离心机IPGphor 装置实验步骤3.1 用于 IEF 的蛋白质样品在尿素中的溶解1. 固体样品溶解（如组织或细胞颗粒）在这种情况下，在终端溶解体积中往往忽略样品的体积。样品溶液含有尿素（终浓度 9~9.5 mol/L；见注释 1 ) ，所选取的去垢剂（依照 2.3.1 中列表）终浓度为 2% ~4% ( m/V )，两性电解质 [ IPG：0.4% (w/v )； [CA] - IEF：2% (w/v) ] ，还原剂 ( 50 mmol/L DTT 或 5 mmol/L TBP 或 5 mmol/L TCEP)，将样品溶液加入固体样品中进行溶解，在水溶条件下进行超声波 30 min 会有助于蛋白质的溶解，通过高速离心 20000 g，30 min 去除不溶物质。2. 蛋白样品从悬浮液或溶液中溶解在这种情况下，必须考虑样品的体积。因此，......阅读全文
蛋白质双向电泳过程与体会
蛋白质双向电泳过程与体会 双向电泳IEF (sigma) IEF（not IPG）/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做“热”的所谓蛋白质组的，嘻嘻！ IEF用Biorad的圆盘电泳槽（不行用国产的吧，不推荐），SDS-PAGE用六一厂的就可以了（ft，六一厂应
植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验（四）
3.3 第二向：多重垂直 SDS-PAGESDS-PAGE 可以在水平或垂直系统上进行 [29] 。水平设备适用于预制胶（ExcelGel SDS；Amersham Biosciences/ GE Healthcare) 。而垂直系统则应用于多块胶平行进行的电泳中，尤其是大规模的蛋白质组分析
植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验（一）
试剂、试剂盒 尿素裂解溶液IPG 干胶条水化液IPG 胶条平衡液SDS 凝胶缓冲液电极缓冲液储液丙烯酰胺 甲叉双丙烯酰胺溶液过硫酸铵溶液琼脂糖溶液仪器、耗材 等电聚焦仪 IPGphor多重垂直 SDS 电泳仪实验步骤 3.1 第一向：在 IPG 胶条中进行等电聚焦（ IPG-IEF)采用 IPG (
植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验（三）
使用 IPGphor 进行 IEF 的典型工作条件见表13-2和 表 13-3 。正如前文指出的那样 ，为了使高分子质量的蛋白质更好地进入聚丙烯酰胺胶内，水化时应在胶条两端加低电压（30~50 V ) ，否则将给水化上样造成困难[ 15，28] 。然后电压逐步升高至 8000 V。如果 IP
植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验（二）
2. 在平板仪器上进行 IPG-IEF ( Multiphor ll Unit)满足下列条件时，水化后的 IPG 胶条可以直接放在 IEF 仪器的冷却板上：① 如果运行时间不超过 12 h ( 经常发生在宽的或中等 pH 范 围 IPG，如 IPG 3~10 或 4~7 ) 。② 如果 pH 梯
双向电泳操作步骤——组织来源的蛋白质样品的溶解和制备
实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDS尿素仪器、耗材离心管转子实验步骤1. 称重后将样品加入Dounch匀浆器。每100 mg 组织加入1.5~2.0 ml SDS/或尿素/溶解缓冲液，用B号研棒冲击50次，然后以A号研棒冲击50次。2. 放置几分钟后，取一小份样品于200 ul 离心管100 000
溶解包涵体蛋白质的方法—去垢剂的介绍
去垢剂是一种最经济的溶解包涵体蛋白质的方法，一个最大的优点是溶解的蛋白质有可能保持全部的生物活性，说明在此条件下保持了蛋白质的四级结构。最重要的是稀释以后蛋白质的聚集比其它溶剂生成的很少。阳离子型、阴离子型的和非离子型的去垢剂都可以使用，使用时的浓度一般高于去垢剂的临界胶束浓度（CMC），通常是
双向电泳的原理和特点
双向电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电聚焦电泳（按照pH分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心。双向电泳由
细胞分裂素对离体子叶的保绿效应实验
使用恒温培养箱、恒温水浴锅、了解细胞分裂素对离体子叶的保绿作用及基本原理和方法。二、原理 细胞分裂素可阻碍核酸水解酶和蛋白水解酶的产生，因此能延缓器官衰老，使离体叶片保绿，保绿作用的强弱可通过测定叶绿素含量的变化来衡量，也可由叶色变黄枯死的时间来衡量。 三、材料、仪器设备及试剂 1. 材料：黄
细胞分裂素对离体子叶的保绿效应实验
实验方法原理 细胞分裂素可阻碍核酸水解酶和蛋白水解酶的产生，因此能延缓器官衰老，使离体叶片保绿，保绿作用的强弱可通过测定叶绿素含量的变化来衡量，也可由叶色变黄枯死的时间来衡量。实验材料 黄瓜子叶萝卜子叶试剂、试剂盒 16－BA溶液95﹪乙醇CaCO3粉末仪器、耗材 电子分析天平分光光度计恒温培养箱恒
细胞分裂素对离体子叶的保绿效应实验
实验方法原理细胞分裂素可阻碍核酸水解酶和蛋白水解酶的产生，因此能延缓器官衰老，使离体叶片保绿，保绿作用的强弱可通过测定叶绿素含量的变化来衡量，也可由叶色变黄枯死的时间来衡量。实验材料黄瓜子叶萝卜子叶试剂、试剂盒16－BA溶液95﹪乙醇CaCO3粉末仪器、耗材电子分析天平分光光度计恒温培养箱恒温水浴锅
细胞分裂素对离体子叶的保绿效应实验
实验方法原理细胞分裂素可阻碍核酸水解酶和蛋白水解酶的产生，因此能延缓器官衰老，使离体叶片保绿，保绿作用的强弱可通过测定叶绿素含量的变化来衡量，也可由叶色变黄枯死的时间来衡量。实验材料黄瓜子叶
安瓿剂与输液剂的制备
实验方法原理 1. 安瓿的处理 将纯化水灌入安瓿内, 经100 ℃加热30分钟,趁热甩水,再用滤清的纯化水、注射用水灌满安瓿，甩水，如此反复三次,以除去安瓿表面微量游离碱、金属离子、灰尘和附着的砂粒等杂质。洗净的安瓿，立即以120～140 ℃温度烘干,备用。2. 垂熔玻璃滤器的处理 将垂熔玻
双向电泳的实验相关试剂配制
1． Bradford 工作液95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250，溶解完后再加磷85%磷酸 52ml 酸，最后超纯水定容至500ml。过滤后置于棕色瓶考马斯亮兰G250 0.035g
溶解膜蛋白用的去垢剂的筛选实验
虽然 TriumX-100 是从鼠肝质膜溶解胰岛素受体的一种良好的去垢剂，但它未必适合其他膜蛋白的溶解。这里，介绍一种筛选去垢剂的策略以确定它是否适于溶解某一待分离的膜蛋白。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。实验步骤操作程序1) 将膜制备物悬浮于所选的缓冲系统（如，磷酸缓冲液或 H
溶解膜蛋白用的去垢剂的筛选实验
虽然 TriumX-100 是从鼠肝质膜溶解胰岛素受体的一种良好的去垢剂，但它未必适合其他膜蛋白的溶解。这里，介绍一种筛选去垢剂的策略以确定它是否适于溶解某一待分离的膜蛋白。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。实验步骤操作程序1) 将膜制备物悬浮于所选的缓冲系统（如，磷酸缓冲液或 H
溶解膜蛋白用的去垢剂的筛选实验
溶解膜蛋白用的去垢剂的筛选实验 实验步骤 操作程序1) 将膜制备物悬浮于所选的缓冲系统（如，磷酸缓冲液或 HE
真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验
基本方案 附加方案：去垢剂提取物中RNA的分离 附加方案：用镁沉淀微管蛋白和微管结合蛋白 实验方法原理 差异去垢剂分离法（differen
真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验
实验方法原理 差异去垢剂分离法（differentialdetergentfract10nat10n,DDF)包括使用一系列含不同去垢剂的PIPES缓冲液对细胞进行连续抽提，首先是毛地黄皂苷，其次是Triton,最后是Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生4种在生化和电泳上相异的组分(见图3.3和表3
木本植物蛋白质提取实验
实验材料 树皮试剂、试剂盒 沉淀缓冲液漂洗缓冲液溶解缓冲液仪器、耗材 离心管实验步骤 3.1 提取总蛋白质 （见注释 5)( 1 ) 将去塞的 10 ml 空离心管称重。我们选用韧性好的聚碳酸酯旋盖圆底高速离心管。( 2 ) 细胞碎裂：500 mg 新鲜组织（保存在 -80°C ) 在液氮中用研钵和
木本植物蛋白质提取实验
实验材料树皮试剂、试剂盒沉淀缓冲液漂洗缓冲液溶解缓冲液仪器、耗材离心管实验步骤3.1 提取总蛋白质 （见注释 5)( 1 ) 将去塞的 10 ml 空离心管称重。我们选用韧性好的聚碳酸酯旋盖圆底高速离心管。( 2 ) 细胞碎裂：500 mg 新鲜组织（保存在 -80°C ) 在液氮中用研钵和杵捣成粉
木本植物蛋白质提取实验
实验材料树皮 试剂、试剂盒沉淀缓冲液 漂洗缓冲液
离焦量对焊接质量的影响
激光焊接通常需要一定的离焦量，因为激光焦点处光斑中心的功率密度过高，容易蒸发成孔。离开激光焦点的各平面上，功率密度分布相对均匀。离焦方式有两种：正离焦与负离焦。焦平面位于工件上方为正离焦，反之为负离焦。按几何光学理论，当正负离焦平面与焊接平面距离相等时，所对应平面上功率密度近似相同，但实际上所
双向电泳实验——ISODALT－方法
实验方法原理双向电泳（two-dimensional electrophoresis）是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电聚焦电泳（按照pI分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒尿素去污剂仪器、耗材
双向电泳仪的研究方向
随着技术的飞速发展，已能分离出10 000个斑点（spot）。 当双向电泳斑点的全面分析成为现实的时候，蛋白质组的分析变得可行。样品制备（sample prepareation）和溶解同样事关2-DE的成效，目标是尽可能扩大其溶解度和解聚，以提高分辨率。用化学法和机械裂解法破碎以尽可能溶解和解聚蛋白
肌松药对胫前肌的作用实验
实验方法原理 骨骼肌松弛药分为去极化肌松药和非去极化肌松药两大类，去极化肌松药是N2 受体激动药，非去极化肌松药是N2 受体阻断药，两类药均可产生神经肌肉接头阻滞作用，但阻滞方式不同，因此作用特点也不相同。临床以非去极化肌松药更常用。观察阿曲库铵和琥珀胆碱对在体家兔胫前肌的作用特点及二者的相
细菌对糖和蛋白质的分解
1.细菌对糖的分解 细菌一般不能直接利用多糖，必须经胞外酶分解成单糖后才能利用。细菌分解葡萄糖可经多途径产生丙酮酸。丙酮酸再进一步分解时需氧菌和厌氧菌则有所不同，需氧菌将丙酮酸通过三羟酸循环分解为CO2和H2O，并产生ATP及其他代谢产物；厌氧菌则发酵丙酮酸产生各种酸、醛、醇、酮等多种产物。
双向电泳
蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心. 双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个E.coli蛋白，并表明蛋白质谱不是稳定的，而是随环境而变化. 双向电泳原理简明，第一向进行等电聚焦，蛋白质沿pH梯度分离，至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量
双向电泳实验——IPGDALT－方法
试剂、试剂盒尿素去污剂还原剂载体两性电解质仪器、耗材IPG 凝胶实验步骤一、第一向1. 固相 pH 梯度凝胶或凝胶条的准备固相 pH 梯度凝胶的灌注及聚合方法请参阅 固相 pH 梯度等电聚焦 有关章节，如需要可切成 3~5 mm 宽的胶条在 -20℃ 保存一年。为避免繁琐和复杂的灌胶和切胶条程序和保
梨离体叶片再生实验
实验概要试验研究了基本培养基、激素配比、细胞分裂素、生长素、培养基添加物、蔗糖浓度、pH值及叶龄与接种方式对梨离体叶片不定芽再生的影响，优化了再生条件，建立起了高效、稳定的离体叶片再生体系。实验材料金花和丰产两种梨树的离体叶片。实验步骤1. 培养基的配制 试验所用的培养基为MS (Murashige