双缩脲法血清总蛋白测定实验
实验方法原理凡分子中含有两个甲酰胺基(-CONH2-)的化合物都能与碱性铜溶液作用,形成紫红色化合物这一反应称双缩脲反应蛋白质分子中有许多肽健(-CONH2-)都能起此反应,而且各种血浆蛋白显色程度基本相同.实验步骤一、实验操作:按表进行混匀,置25℃30min。(37℃10min)在波长540nm。 比色杯直径1.0cm以空白管调零、读取各管光密度。二、计算血清总蛋白g/L=测定管(或校正)吸光度/标准管吸光度×蛋白标准液浓度(g/L)展开 注意事项1、血清蛋白质含量一般用g/L表示,因各种蛋白质的分子量不同,不能用mol/L表示。2、酚酞、溴磺酞钠在碱性溶液中显色影响双缩脲测定结果,右旋糖酐可测定管浑浊亦影响结果,理论上这些干扰均可用相应的标准空白管来除,如标准空白管吸光度太高,可影响到定的准确度.3、含脂类极多的血清,显色应浑浊不清,可用乙酸3.l抽提后再进行比色。参考值:60-80g/L展......阅读全文
血清总蛋白测定原理
1.双缩脲法 蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成的紫红色的反应相似,故称之为双缩脲反应。这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比,与同样处理的蛋白质标准液比较,即可求得蛋白质含量。 2.微量凯氏定
双缩脲法和凯氏定氮法测定饲料中蛋白质含量的比较...
饲料蛋白质含量的测定通常采用国标规定的凯氏定氮法, 但用双缩脲比色法测定饲料中蛋白质含量也有报道( 陈革, 2003) 。本实验对多种饲料样品采用双缩脲比色法进行蛋白质含量测定,并将结果与凯氏定氮法进行对比和分析, 为实际工作中选择合理的方法进行饲料中蛋白质含量的测定提供科学依据。1 双缩脲法原理当
紫外吸收法与双缩脲法测蛋白质含量相比,有什么优缺点
1.蛋白质测定的Folin-酚比色法(即Lowry法)的定量范围为5~100μg蛋白质,灵敏度高;但操作要费较长时间,且Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用;不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度也稍有不同.紫外吸收法测
紫外吸收法与双缩脲法测蛋白质含量相比,有什么优缺点
1.蛋白质测定的Folin-酚比色法(即Lowry法)的定量范围为5~100μg蛋白质,灵敏度高;但操作要费较长时间,且Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用;不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度也稍有不同.紫外吸收法测
双缩脲反应的操作特点
由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律,而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关,故可用双缩脲法测定蛋白质的含量(借助分光光度计可减小误差)。双缩脲反应主要涉及肽键,因此受蛋白质特异性影响较小。且使
血清总蛋白测定的总结
大小 (一)血清总蛋白测定原理 1.双缩脲法 蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成的紫红色的反应相似,故称之为双缩脲反应。这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比,经与同样处理的蛋白质标准液比
三氯乙酸双缩脲比色法测定真蛋白的方法介绍
该方法的基本原理为:采用150g/L的三氯乙酸溶液(在混合物中的最终浓度约为120g/L )沉淀乳中的蛋白质,用过滤法分离沉淀和溶液,沉淀部分含蛋白态氮,非沉淀部分(溶液)含非蛋白态氮。将滤渣收集起来,再用双缩脲法进行定氮。即可得出样品中的真蛋白含量。三氯乙酸-双缩脲比色法可以较好地检测出乳中的真蛋
脂血标本总蛋白测定方法的探讨
目前,绝大多数医院的临床实验室总蛋白多采用单一试剂的双缩尿法来检测,当遇到脂血标本时,测定结果偏高。为排除干扰,有的文献介绍了模拟双试剂样本空白法,现将我院脂血标本血清总蛋白的样本空白法介绍如下。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 对象选取我院2008年8月~2008年12月门诊及住院病人样本中
脂血标本总蛋白测定方法的探讨
目前,绝大多数医院的临床实验室总蛋白多采用单一试剂的双缩尿法来检测,当遇到脂血标本时,测定结果偏高。为排除干扰,有的文献介绍了模拟双试剂样本空白法,现将我院脂血标本血清总蛋白的样本空白法介绍如下。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 对象选取我院2008年8月~2008年12月门诊及住院病
脂血标本总蛋白测定方法的探讨
目前,绝大多数医院的临床实验室总蛋白多采用单一试剂的双缩尿法来检测,当遇到脂血标本时,测定结果偏高。为排除干扰,有的文献介绍了模拟双试剂样本空白法,现将我院脂血标本血清总蛋白的样本空白法介绍如下。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 对象选取我院2008年8月~2008年12月门诊及住院病
双缩脲试剂是什么配制的
先将双缩脲试剂A加入组织样液,振荡均匀(必须营造碱性环境),再加入双缩脲试剂B,摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。 双缩脲(NH
凯氏定氮仪与双缩脲法的比较分析
蛋白质是生命的物质基础,是有机大分子,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者。虽然蛋白质在副食中含量较高,且并不是我们每天热量的主要来源,但是我们却离不开蛋白质。由于蛋白质是直接参与人体生理活动的物质,是人体必需的营养物质,所以无论是在粮食、乳制品还是饮料中人们对蛋白质的要求都是十分高的。因
血清总胆固醇测定实验
实验方法原理 采用异丙醇,抽提时用氧化铝吸附胆红素等于干扰物(也吸附磷脂与甘油,放此抽提液可用于化学法测TG)。离心后在上清液中加入高铁.硫酸试剂显紫红色,显色程度与TG浓度呈正比.实验步骤 一、实验试剂:1、异丙醇2、氧化铝(层析用中型氧化铝,用蒸馏水洗数次,倾去不易下沉的细颗粒,吸滤干后在110
血清总胆固醇测定实验
实验方法原理采用异丙醇,抽提时用氧化铝吸附胆红素等于干扰物(也吸附磷脂与甘油,放此抽提液可用于化学法测TG)。离心后在上清液中加入高铁.硫酸试剂显紫红色,显色程度与TG浓度呈正比.实验步骤一、实验试剂:1、异丙醇2、氧化铝(层析用中型氧化铝,用蒸馏水洗数次,倾去不易下沉的细颗粒,吸滤干后在110℃烘
血清总蛋白测定方法及临床意义
血清总蛋白测定有很多,最主要的有凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、比浊法、染料结合法和紫外分光光度法等,其中双缩脲法应用最广。它的原理主要是蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与二价铜离子(Cu2+)作用生成蓝紫色的化合物,这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比,因此反应与两分子尿素缩合后的产物
血清总蛋白测定方法及临床意义
血清总蛋白测定有很多,最主要的有凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、比浊法、染料结合法和紫外分光光度法等,其中双缩脲法应用最广。它的原理主要是蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与二价铜离子(Cu2+)作用生成蓝紫色的化合物,这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比,因此反应与两分子尿素缩合后的产物
血清总蛋白测定方法及临床意义
血清总蛋白测定有很多,最主要的有凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、比浊法、染料结合法和紫外分光光度法等,其中双缩脲法应用最广。它的原理主要是蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与二价铜离子(Cu2+)作用生成蓝紫色的化合物,这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比,因此反应与两分子尿素缩合后的产物
血清总蛋白测定值及意义
(1)参考值60~80g/L(2)临床意义血清总蛋白浓度受到血容量变化的影响,脱水时蛋白浓度相对增加,水潴留时则降低。在生理情况下,体位、运动等也可使血蛋白浓度发生轻微变化。1.血清总蛋白浓度升高(1)各种原因失水所致的血液浓缩:如呕吐、腹泻、烧伤、糖尿病酮症酸中毒、急性传染病、急腹症等。(2)网状
蛋白浓度测定的方法具体有哪些
蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
蛋白浓度测定的方法具体有哪些
蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
蛋白浓度测定的方法具体有哪些
蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
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蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
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蛋白浓度测定的方法:1. 紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法,不需要任何试剂,操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收,这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的,所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核
双缩脲反应的基本内容介绍
双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的,而为氨基酸所没有的一种颜色反应。一般分子中含有两个氨基甲酪基(即肽键:-CO-NH-)的化合物与碱性溶液作用,生成紫色或者蓝紫色的络合物。 在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)与铜离子(Cu2+)作用,形成紫红色络合物(该物质的分子结
双缩脲反应的定义和表现式
在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H₂NOC-NH-CONH₂)与铜离子(Cu²⁺)作用,形成紫红色络合物(该物质的分子结构式见图),该反应即双缩脲反应。铜溶液作用,就会形成紫色或蓝紫色络合物。注:除-CO-NH-有此反应外,酰胺基(-CO-NH₂)、亚甲基(-CH₂-)、亚氨基(-NH-)、(-C
关于血清总蛋白的测定的简介
双缩脲法测定血清总蛋白是临床测定血清总蛋白首选的最方便、最实用的常规方法。 (1)标本采集:采集受试者血清。 (2)检测方法:将受试者血清与蛋白标准液、蒸馏水、双缩脲空白试剂及双缩脲试剂混匀,置25℃环境中30min或37℃环境中10min,在波长540nm处比色,用蒸馏水调零,测各管吸光度
血清总胆固醇的测定实验
无水乙醇提取法 实验方法原理 用无水乙醇提取血清中的胆固醇,同时沉淀蛋白质,向提取液中加入硫磷铁显色剂,胆固醇与浓硫酸及三价铁作用,生成稳定的紫红色化合物。与
脑脊液总蛋白测定实验
实验方法原理 磺基水杨酸为生物碱试剂,能沉淀蛋白质,但对白Pr的沉淀能力比球Pr强,加入Na2SO4后,同样浓度的ALB和球Pr呈浊,趋于一致,与标准Pr浓度对比定量测定.试剂、试剂盒 磺基水杨酸-硫酸钠试剂Pr标准液实验步骤 1. 取4支试管,分别标明标本管,标本空白管标准管,试剂空白管,向标本管
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实验方法原理磺基水杨酸为生物碱试剂,能沉淀蛋白质,但对白Pr的沉淀能力比球Pr强,加入Na2SO4后,同样浓度的ALB和球Pr呈浊,趋于一致,与标准Pr浓度对比定量测定.试剂、试剂盒磺基水杨酸-硫酸钠试剂Pr标准液实验步骤1. 取4支试管,分别标明标本管,标本空白管标准管,试剂空白管,向标本管和标本