饱和氯化钠法提取外周血DNA

实验概要本实验用饱和氯化钠法从外周血中提取了基因组DNA 。实验原理以蛋白酶K 和SDS 裂解细胞释放DNA,而DNA 在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高,Na 与带负电的DNA 结合成DNA 钠盐,这时DNA 在溶液中呈溶解状态。以氯仿抽提DNA,去除溶液中蛋白杂质后以3M NaAc 沉淀DNA。主要试剂1. TE buffer(pH 8.0)2. 蛋白酶K3. SDS4. 饱和氯化钠5. 氯仿6. 3M NaAc(pH 5.2)7. 异丙醇8. 乙醇主要设备1. 电热恒温水槽2. 高速离心机实验材料抗凝外周全血实验步骤1. 取0.5 ml 抗凝外周全血,加入0.8 ml 生理盐水混匀后,室温离心10000rpm 1min。2. 弃上清,留0.1 ml 沉淀,加入0.4 ml TE,悬浮细胞后加入10 mg/ml 蛋白酶K 5 μl (终浓度100 μg/ml),10% SDS 50 μl (终浓度1%),并轻轻混匀。3. ......阅读全文

外周血干细胞移植的细胞采集方法

  外周血干细胞(PBSC)的采集方法与成分血的单采术类似,即用血细胞分离机分离采集外周血的单个核细胞组分。目前最常用的细胞分离机机型是FewnalCS—3000(或CS—3000Plus)。多采用分离淋巴细胞的程序分离。一般情况下行大静脉穿刺即可,外周静脉穿刺困难(尤其是小儿)时需中心静脉穿刺。 

从外周血淋巴细胞中提取RNA

实验概要本实验从外周血淋巴细胞(PBls)中分离得到RNA样品。主要试剂1. Ficoll(Amersham Biosciences)2. 冰冷磷酸盐缓冲液(PBS),pH 7.43. 裂解缓冲液:5mol/L单巯基氰酸胍,10mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA),50mmol/L Tris—HCl

外周血单个核细胞的基本内容

  周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同,红细胞和多核白细胞的比重在1.092左右,单个核细胞的比重为1.075-1.090,血小板为1.030-1.035。因此利用一种介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心,使一定密度的细胞按

简述外周血干细胞移植的应用优势

  动员的外周血移植较骨髓移植可获得更快的造血和免疫重建,还可以使大剂量化疗更安全,现已成为自体移植的主要细胞来源。动员的异基因外周血移植在快速重建造血的  同时,伴有较高慢性GVND,因此尚不能判断从Allo-PBSCT是否能得到广泛应用。所以今后的发展趋势:  1) 细胞因子和化疗方案进一步优化

外周血涂片:典型恶性疟原虫-1-例

 疟疾在世界上分布广泛,是严重危害人体健康的寄生虫病之一,亦是非洲广大地区所面临的重要公共卫生问题。近期 Blood 杂志上,来自美国 Racsa 教授等介绍了 1 例通过外周血涂片诊断恶性疟原虫的患者,现介绍如下。基本病史     17 岁冈比亚裔青少年,因发热和黄疸 1 周,腹痛及身体不适

外周血单个核细胞的基本信息

外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是 mononuclear cell 单个核细胞,而不是 Monocyte 单核细胞。外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaqu

外周血自然杀伤细胞(NK)细胞的检测

外周血自然杀伤细胞(NK)细胞的检测             实验步骤

简述外周血干细胞移植的临床问题

  1)外周血干细胞数量采集困难,不能满足移植所需数量。  2)收集的外周血干细胞会混杂有肿瘤细胞。  3)异基因外周血移植物中存在大量T细胞,可能诱发严重GVHD,初步的结果表明Allo-PBSCT急性GVHD的发生率与骨髓移植相似,但慢性GVHD显著高于Allo-BMT。  4)PBSCT后肿瘤

外周血单个核细胞样本的制备

实验方法原理血液是天然的单个细胞分散的细胞悬液,血细胞在生理状态下呈分散的游离状态。它是流式细胞分析的理想样品。血液中的主要细胞成分为白细胞、红细胞和血小板;而其中白细胞主要成分又分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。但在血细胞中一般检测单个核细胞较为多见。实验材料外周血试剂、试剂盒肝素生理盐水实验步骤一

关于小儿支气管肺炎的外周血检查

  1.外周血白细胞计数和分类计数  对判断细菌或病毒有一定价值。细菌性肺炎白细胞计数升高,中性粒细胞增多,并有核左移现象,胞浆可有中毒颗粒。病毒性肺炎的白细胞计数大多正常或偏低,亦有少数升高者,时有淋巴细胞增高或出现变异型淋巴细胞。支原体感染者外周血白细胞计数大多正常或偏高,分类以中性粒细胞为主,

外周血自然杀伤细胞(NK)细胞的检测

实验步骤             展开

外周血单个核细胞分离的操作步骤

1、取外周静脉血,用肝素抗凝,加等量的Hank’s液并混匀。2、将分层液加入试管中,用量约为血量的1/2。用吸管沿管壁缓缓将血加入分层液面上。3、置于水平离心机离心,1500r/min,10min。可见绝大多数单个核细胞悬浮于血浆和分层液的界面,呈白膜状。4、用尖吸管吸取界面的细胞层,置于另一试管中

外周血白细胞HLAB27的表达

            实验材料 CD3 单抗 HLA-B27 单抗 全血 试剂、试剂盒 溶血剂 多聚甲

人外周血淋巴细胞分离液怎么用

分离方法说明:取新鲜抗凝血1ml,与生理盐水1:1 混匀后,小心加于2ml细胞分离液之液面上;以400g(约1500转/分,半径15cm水平转子)离心20分钟,此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层:为血浆层。第二层:为环状乳白色淋巴细胞层。第三层:为透明分离液层。第四层:为红细胞层。收集第二层细胞

什么是外周血淋巴细胞微核率

病情分析:你好,淋巴细胞微核是游离于胞浆内的圆形或椭圆形小体,结构和染色与主核相似,大小为主核的1/3以下,其来源可能是染色体的断片。测定方法与染色体畸变率相似,观察分析比染色体畸变率容易。在0.2~5gy剂量范围内,微核率与剂量呈线性关系。,意见建议:

如何巧妙提高外周血培养成功率?

人体外周血淋巴细胞培养搭配染色体核型分析技术是诊断染色体变异的重要手段。淋巴细胞的培养是染色体标本制备的关键。培养基的选择、秋水仙素的用量及时间、温度、pH,固定、滴片等其中任何一点处理不当,就极有可能导致实验失败。本期专题,我们就聊聊 “外周血淋巴细胞培养,如何简化操作、做好细节、提高细胞培养

外周血白细胞HLAB27的表达

            实验材料 CD3 单抗 HLA-B27 单抗 全血 试剂、试剂盒 溶血剂 多聚甲

外周血中嗜碱性粒细胞(BASO)分离方法

Percoll密度梯度离心分离法:1、Pcrcoll混悬液的配制:Percoll 90ml,HBSS 9ml, HEPES(0.25mol/l)1ml(PH 7.3),HCL(1mol/l)0.4ml 调节至PH7.42、制备Percoll密度梯度管密度 Percoll/HBSS(ml/ml)1.0

怎么看外周血细胞形态化验什么

看外周血细胞形态,需要制作血涂片病染色,计数分类有核细胞并观察其形态,还要关注无核的红细胞和血小板。具体内容如下图一般而言,现如今的血常规使用血液分析仪进行初筛,如果结果无异常,就不太需要涂片;如果结果异常并满足一定条件,才需要进行血涂片检查。

密度阻滞法纯化人外周血单核细胞

试剂和器材: 1. 抗凝血剂:100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L柠檬酸钠;2. Hepes缓冲生理盐水(HBS):8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;3. 淋巴细胞分离液(例如LymphoprepTM或NycoPrepTM1.077)或OptiPre

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法一、采集血样,室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可;血量一般为1ml;一般地,1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞(PBMC,即淋巴细胞核单核细胞)。二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的离心管,为管1,先加

从外周血淋巴细胞(PBls)中分离RNA

[器材和试剂]● 30m1Corex管,酸洗并硅化● 预冷离心机和吊桶式转头● Ficoll(Amersham Biosciences)● 冰冷磷酸盐缓冲液(PBS),pH 7.4● 裂解缓冲液:5mol/L单巯基氰酸胍,10mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA),50mmol/L Tris—HCl,

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

  人外周血淋巴细胞RNA的提取方法   一、采集血样,室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可;血量一般为1ml;一般地,1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞(PBMC,即淋巴细胞核单核细胞)。   二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的

外周血单个核细胞分离实验的操作步骤

  1、取外周静脉血,用肝素抗凝,加等量的Hank’s液并混匀。  2、将分层液加入试管中,用量约为血量的1/2。用吸管沿管壁缓缓将血加入分层液面上。  3、置于水平离心机离心,1500r/min,10min。可见绝大多数单个核细胞悬浮于血浆和分层液的界面,呈白膜状。  4、用尖吸管吸取界面的细胞层

外周血出现异形淋巴细胞怎么回事

获悉病情,引起儿童外周血异型淋巴细胞增多的病原除EB病毒,巨细胞病毒,支原体,腺病毒外,其他感染亦会引起其增多,其中以EB病毒所占比例最多,不同的疾病中出现的异型淋巴细胞数量有很大的差异性,并随病程的发展而发生动态变化.目前EB检。

外周血细胞形态学检验及技巧

 一. 血液学及血细胞形态学临床应用:    ● 是临床血液病诊断与治疗及临床医学检验学的基础工作。    ● 血细胞形态学适用于临床血液病诊断快速简捷的要求。    ● 近年来由于血细胞学及超微结构、免疫学、细胞遗传学、融合基因、造血干细胞及其细胞因子、骨髓造血微环境、基质细胞、树突状细胞、淋巴系

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法

人外周血淋巴细胞RNA的提取方法一、采集血样,室温保存。使用一次性的抗凝的真空抽血管进行采血。一般使用EDTA或肝素抗凝均可;血量一般为1ml;一般地,1ml外周血中含有大约1-2*10^6个单个核细胞(PBMC,即淋巴细胞核单核细胞)。二、提取淋巴细胞。取1.5ml 无菌无酶的离心管,为管1,先加

关于外周血干细胞移植的细胞动员介绍

  正常情况下,外周血中的干/祖细胞的含量占单个核细胞的 0.01%—0.1%相当于骨髓的1%—10%,动员后外周血MNC中CD34+细胞数及CFU—删数均明显高于骨髓。迄今已发现多聚阴离子化合物(如硫酸葡聚糖)、糖皮质激素、细菌内毒素、抗肿瘤药物、四氢叶酸以及造血生长因子等均能有效地动员骨髓和其它