蛋白质印迹的实验原理、方法与步骤
实验概要本实验介绍了蛋白质印迹与探测(Western Blot)实验原理、方法与步骤。实验原理Western Blot（蛋白质印迹或免疫印迹）技术，以蛋白质为检测对象，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将样品蛋白质分离，再转移到固相载体（PVDF尼龙膜或NC膜）上；固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变；然后以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与其对应的抗体（一抗）发生免疫反应，特异性一抗再与和酶耦联的第二抗体反应，最后在酶的作用下，导致底物显色或化学发光显影，来检测电泳分离的特异性目的靶蛋白。蛋白质印迹技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免疫测定特异性高、敏感等诸多优点，能从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定量检测。 主要试剂1. SDS-PAGE试剂。2. 匀浆缓冲液：1.0mol/L Tris-HCl(pH6.8)1.0ml；......阅读全文
蛋白质芯片技术简介
由于利用了DNA与互补的DNA或RNA结合的典型性质, DNA 芯片在短时间内就取得了成功. 然而, 已经有关于mRNA 和蛋白质之间数量关系上的争论, 而且实际上在细胞中参与各种不同反应的都是蛋白质. 因此, 如果能制造出蛋白质芯片而不是DNA芯片, 而且如果蛋白质表达强度和键合物能被发现, 就有
什么是蛋白质易位？
由于核糖体将mRNA翻译成蛋白质是在胞质溶胶中进行的，因此必须转移用于分泌或特定细胞器的蛋白质。这个过程可以在翻译过程中发生，称为共翻译易位，也可以在翻译完成后发生，称为翻译后易位。
蛋白质纯化方法总结
分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级、细分级三步。1.前处理：分离纯化某种蛋白质，首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态（如果做不到呢？比如蛋白以包涵体形式存在），不丢失生物活性。为此，动物材料应先提出结缔组织和脂肪组织，种子材料应先去壳甚至去种
什么是蛋白质剪接？
蛋白质剪接是特定蛋白质的分子内反应，其中从前体蛋白质中去除内部蛋白质片段（称为内含肽），并在两侧连接C端和N端外部蛋白质（称为内含肽）。前体蛋白的剪接点主要是半胱氨酸或丝氨酸，它们是含有亲核侧链的氨基酸。现在已知的蛋白质剪接反应不需要外源性辅助因子或能源，如三磷酸腺苷(ATP)或三磷酸鸟苷(GTP)
蛋白质印迹实验
试剂、试剂盒 甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤 1. 溶液配置(1) 连续缓冲系统甘氨酸 39 mmol/L；Tris 48 mmol/L；SDS 0.0375% ( W/V)；甲醇 20% (V/V)。溶液均需用双蒸水配置。这个缓冲系统可用作阳极缓冲液，也可用作阴极缓冲液。(2) 不连续缓冲系统阳
蛋白质PEG化介绍
蛋白质PEG化键凯科技提供高质量的聚乙二醇化服务。键凯科技可以根据客户的需要设计聚乙二醇化，提供包含聚乙二醇化键合、分离提纯等全面服务。键凯科技成熟的键合和分离技术，可有效控制键合比率和取代率，已经逐步得到客户认同。Y 型聚乙二醇NHS酯和蛋白质的连接示意图：Y 型聚乙二醇马来酰亚胺和蛋白质的连接示
蛋白质沉淀技术（二）
(4) 小心倒出上清液，并测量其体积。依据表 20.1 所示的以百分饱和度从低到高的顺序加入 AS 以确定所需 AS 的质量。继续伴以快速的搅拌并缓慢加入 AS，以避免局部形成较高盐浓度，之后静置 30 min, 使其形成沉淀。(5) 如步骤 (3) 中所示进行离心。尽量去除上清液, 若之前已经仔细
蛋白质浓度计算
1ml蛋白质，你稀释到了100ml, 说明现在里面有1%的蛋白质。然后取0.6毫升，对考马斯和蒸馏水，里面现在有（0.6/6.0）×0.01毫升的蛋白质。测完光，对完标准曲线后，得到的12.777ug/ml 是0.001毫升的蛋白质的浓度哦。所以， 总的蛋白质浓度，也就是一开始的那1毫升里的蛋白质浓
跑胶蛋白质弥散
estern Blot（WB）可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了，然而好看的 WB 总是别人的，自己的 WB 总是杂带丛生，尤其是新课题、新抗体，总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子，咱们一起研究一下。 案例一：啥也
蛋白质水解的测定
水解程度测定的常用方法是茚三酮法，利用待测蛋白样品完全水解液做为茚三酮比色的标准样品测定蛋白质的水解度。 水解度（ Degree of hydrolysis，DH）代表水解过程中蛋白质肽键被裂解的程度，常用百分数来表示： DH =h/htot× 100% 式中，h是水解后每克蛋白质被裂解的
蛋白质的分离纯化
蛋白质的分离纯化方法如下：一、根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析法：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。2、等电点沉淀法：蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电
怎样储存纯化蛋白质
一般来说蛋白都放在-20℃冰箱里，有必要的话甚至要放到-80摄氏度，因为你在提纯的过程中没法做到无菌，因此提纯的蛋白液里肯定共有细菌的存在。而细菌在4°C中仍然是会活动的，这样它就会去水解蛋白质，辛辛苦苦提的蛋白也就质量下降。不信你可以把蛋白放在4度里过一个星期，拿出来绝对臭了，臭了就说明降解了。蛋
蛋白质盐析的原理
蛋白质盐析是一种分离蛋白质的方法，适用于纯化、分离和富集蛋白质。其原理是利用离子对蛋白质分子的溶解能力和电荷之间的相互作用，通过添加适量盐类，使蛋白质分子从水相中沉淀出来。该方法的基本原理是控制蛋白质饱和度，从而将蛋白质溶解并沉淀出来。实验过程中，首先要确定盐的类型和浓度，以及蛋白质的饱和度。盐类中
跑胶蛋白质弥散
estern Blot（WB）可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了，然而好看的 WB 总是别人的，自己的 WB 总是杂带丛生，尤其是新课题、新抗体，总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子，咱们一起研究一下。 案例一：啥也没有 原因：比较多
蛋白质DIA检测原理
数据非依赖性的扫描模式(Data-independent acquisition, DIA)是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式。可以对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂，采集所有母离子的碎片离子信息进行蛋白定性和定量。目前流行的蛋白质组学研究手段，如iTRAQ\TMT、 Label-fr
揭秘蛋白质盐析盐溶
盐析盐溶的原理 从表面的现象看来，『盐溶』是加盐使蛋白质融入水中，『盐析』是加盐使蛋白质沉淀出来。两者所加的盐类不同，其作用机制也毫无关系。但这两者是最简单的蛋白质分离方法，不但经济而且方便，可以应用在很多实验。 与盐溶刚好相反，在蛋白质溶液中加入硫酸铵，会使得蛋白质的溶解度下降，因而沉淀
蛋白质印迹实验——从琼脂糖凝胶上转移蛋白质
试剂、试剂盒甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤1. 溶液配置不连续缓冲系统阳极缓冲液Ⅰ：0.3 mol/L Tris，pH 10.4。阳极缓冲液Ⅱ：25 mmol/L Tris，pH 10.4。阴极缓冲液：40 mmol/L 6-氨基-n-己酸，pH 7.6。2. 转移单元的组成SDS 凝胶转移单元的
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪氨酸激酶
试剂、试剂盒烯醇化酶酪氨酸激酶分析缓冲液实验步骤1. 制备酸变性的烯醇化酶从兔肌肉中纯化的烯醇化酶通常以硫酸铵沉淀或者悬液的形式存在。(1) 含 100 μg 的烯醇化酶，于 4℃ 全速离心 5 分钟。(2) 去上清，加入含有 1 mmol/L DTT 的 10 μl 50 mmol/L HEPES
一个蛋白质引发的惨案－|－蛋白质促进癌细胞转移
最近，挪威卑尔根大学(UiB)的研究人员分离出了一种蛋白质，可使癌细胞能够进行扩散。相关研究结果发表在4月14日的《Cancer Cell》。 在一个肿瘤内的细胞差异很大。尽管一些仍然是“好”细胞，不制造麻烦，但是其他一些细胞会变得具有侵袭性，并开始扩散到其他器官部位。我们很难预测哪些细胞会变
蛋白质截短试验_非放射性蛋白质截短试验
实验材料患者和正常人的保存于乙醇中的 RNA 或 DNA 样品试剂、试剂盒乙酸钠随机引物反转录试剂盒二硫苏糖醇4dNTP 混合液RNase 抑制剂特异性的 PCR 引物RNase H10 X PCR 缓冲液Taq 酶丙烯酰胺 双丙烯酰胺SDSTris • Cl过硫酸铵运行缓冲液电转缓冲液（冰预冷）甲
蛋白质测定仪分析土壤环境对于小麦蛋白质影响
蛋白质是小麦籽粒中zui重要的营养成分，其含量是衡量小麦营养品质的重要指标。蛋白质含量的测定可以使用蛋白质测定仪进行简单的测定分析，实验表明小麦籽粒蛋白质含量不仅受基因型控制，同时还受环境的影响。土壤是影响小麦品质的重要因素之一，土壤类型、质地、营养元素以及盐分含量、pH值对小麦籽粒蛋白含量都有影响
预测蛋白质3D结构，单条蛋白质序列就能实现
7月22日，华深智药对外宣布，公司在蛋白质结构预测方面开发出一项新技术OmegaFold，突破了已有计算机预测三维结构的模式，是人工智能（AI）和生命科学领域结合实现的一个突破。华深智药是由清华大学人工智能产业研究院孵化，是一家致力于使用AI重构药物开发流程来提高新药研发速度和效率的企业。日前，华深
蛋白质定量实验_考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法
实验方法原理蛋白质分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基，其化学结构中的共轭双键，具有吸收紫外光的特性，吸收高峰在280 nm处，蛋白质溶液的吸光度(A280)与蛋白质含量成正比关系，可作为样品中蛋白质定量测定。该方法简便、灵敏、快速，且样品用量少且可回收，低浓度的盐类也不干扰测定，但测定
Porviar－P3蛋白质沉淀板独特的蛋白质沉淀技术
Porvair Sciences蛋白质沉淀板（P3），也称为蛋白质碰撞板。专-利设计，样品制备之前有效去除不需要的蛋白质。 P3微孔板具有良好的流速、低非特异性结合和出色的去除效率。此外，孔板的清洁系统可确保工作流程中无泄漏。 P3蛋白质沉淀技术如何工作？P3板通过添加诸如甲醇或乙腈之类的溶剂来使溶
aktapure层析系统检测蛋白质时，怎样判定为纯蛋白质
蛋白质分离鉴定的常用方法： 沉淀法 沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质，进而导致有效成分的溶解度发生变化。 1、盐析法 盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使
蛋白质测定仪测定食品蛋白质含量的注意事项
蛋白质含量的测定是评价食品质量的重要指标。由于食品中含氮化合物以蛋白质占优势,所以测定食品中蛋白质含量时往往是先测定总氮量,然后乘以蛋白质换算系数即得到蛋白质含量。在我国现行的国家标准中,蛋白质的测定采用蛋白质测定仪,它是由样品消化成按盐、蒸馏、用硼酸液吸收,再由标准酸液滴定来测定的.此法准确、简明
内脏蛋白质含量检测人体内脏蛋白质含量怎样检测
蛋白质测定是指通过物理或化学方法对蛋白质含量进行测定。蛋白质是构成人体细胞和组织的重要成分，蛋白质测定是生物化学和分子生物学研究中最常用、最基本的分析方法之一。人体正常值一般是 60～80 g/L。人的身体是由水分、蛋白质、无机盐、脂肪等成分构成，身体成分的不均衡将会导致肥胖、营养不良、骨质疏松、水
细胞膜蛋白质提取方法——蛋白质沉淀法（二）
第二节 有机溶剂沉淀法有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。该法优点在于：1）分辨能力比盐析法高，即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀；2）沉淀不用脱盐，过滤较为容易；3）在生化制备中应用比盐析法广泛。其缺点是对具有生物活性的大分
细胞膜蛋白质提取方法——蛋白质沉淀法（一）
1．热变性及酸碱变性沉淀法 用于选择性的除去某些不耐热及在一定PH值下易变性的杂蛋白。 2．有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。3．等电点沉淀法 用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。4．非离子多聚体沉淀法
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪蛋白激酶
试剂、试剂盒酪蛋白激酶分析缓冲液β-酪蛋白β-酪蛋白储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物：5X 酪蛋白激酶分析缓冲液 4 μl β-酪蛋白