跑胶蛋白质弥散

estern Blot(WB)可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了,然而好看的 WB 总是别人的,自己的 WB 总是杂带丛生,尤其是新课题、新抗体,总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子,咱们一起研究一下。 案例一:啥也没有 原因:比较多,如果单纯一张没有任何显色的X光片,最可能是一抗加成其他抗体,或者二抗种属加错了,比如兔的加成鼠的。 解决办法:仔细检查抗体是否加错,确认转膜没有问题。 经验:上面的图片展示的是一点信号都没有,如果是这样大部分情况是抗体加错了。如果中间出现了细微的条带,可能原因是蛋白上样量太少,一抗浓度过低,ECL发光液失效。另外如果转膜出现了问题,比如膜放反了,自然是一个白片。 案例二:高背景 原因:封闭不够好,一抗浓度高,洗膜时间和次数不够 解决办法:降低一抗浓度,增加洗膜时间和次数。 经验:高背景可能是WB中最常见出现的问题,目的条......阅读全文

跑胶蛋白质弥散

estern Blot(WB)可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了,然而好看的 WB 总是别人的,自己的 WB 总是杂带丛生,尤其是新课题、新抗体,总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子,咱们一起研究一下。   案例一:啥也

跑胶蛋白质弥散

  estern Blot(WB)可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了,然而好看的 WB 总是别人的,自己的 WB 总是杂带丛生,尤其是新课题、新抗体,总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子,咱们一起研究一下。  案例一:啥也没有  原因:比较多

跑胶蛋白质弥散

  estern Blot(WB)可以说是生物学方向的同学最...最基本的实验技能了,然而好看的 WB 总是别人的,自己的 WB 总是杂带丛生,尤其是新课题、新抗体,总在目的条带附近出现非特异性条带。产生这种状况的原因是什么呢、用下面的几个例子,咱们一起研究一下。  案例一:啥也没有  原因:比较多

电泳后跑胶跑多久

  2%的琼脂糖凝胶电泳跑多少时间合适  看染料的位置就好了,  怕时间太短你可以放回去继续跑嘛

什么是cDNA跑胶

  生物实验中的“跑胶”是指跑电泳。  跑电泳就是用琼脂糖凝胶制作胶板从而让样品在胶板上产生电泳,所以简称“跑胶”  分子生物学中的跑胶会出现条带,是因为带电荷的生物大分子在电泳池里的运动速度决定于该分子的分子量,所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成条带,进而实现了分离纯化生物大分子的目的。 

电泳跑胶电压和时间

sds-page跑电泳时,跑到浓缩胶和分离胶分界处时一般是要换电压的。具体是40变60还是80变120要根据实际试验的时间来确定,而且这个时间的要求不会很严格,也就是说对电压的要求不严。我做这个试验时,师姐给我讲的是由80变到120~140即可

如何理解PCR跑胶图

图分为两部分:最左边亮度阶梯分布,不同高度代表PCR片段长度的不同,片段越短,跑的越快,为最下方的条带。片段越长,跑的越慢,为最上方的条带。最左边为一个参考条带;右边是实际PCR出的片段分布,跑胶(以肉眼可见的方式显示PCR片段长短的分布)的作用主要有两个:作用一: 质控,如果出现明显的拖尾,代表P

DNA跑胶具体步骤

制胶、设置电泳系统(缓冲液、电源、电泳槽等)、DNA样品准备(DNA及DNA Marker+上样缓冲液)、加样、电泳、染色、UV检测分析等。

DNA跑胶具体步骤

制胶、设置电泳系统(缓冲液、电源、电泳槽等)、DNA样品准备(DNA及DNA Marker+上样缓冲液)、加样、电泳、染色、UV检测分析等。

跑蛋白胶胶的浓度根据什么定的

这个要看你蛋白大小的,个人习惯:蛋白如果100kD以上的话用8%,100-60用10%,60-40用12%,40-10用15%,分子克隆上面有的,每个浓度大概跑什么大小的蛋白质。

质粒pcr跑胶如何看结果

一般空载扩出片段较小,插入片段的质粒扩增片段较大,具体看载体及插入片段大小来判断是否为阳性克隆,及是否为目标片段。

WB上层胶怎么算跑好了

检测器检测。理论上,从普通培养基中收集分泌蛋白,此时对细胞生长条件的影响最小,是最佳的实验条件:但是这存在隐忧。因为含血清的培养基中含有非常丰富的BSA(牛血清白蛋白)之类的蛋白质,除非你进一步分离纯化,否则直接用这种样品去WB会有非常大的麻烦,尤其当你的蛋白在60-46kDa之间的时候:用“任何”

质粒pcr跑胶如何看结果

一般空载扩出片段较小,插入片段的质粒扩增片段较大,具体看载体及插入片段大小来判断是否为阳性克隆,及是否为目标片段。

pcr跑胶结果出现拖尾、弥散说明什么

可能是产物降解,也可能引物、模版的量上的比较大。适当减少循环,调整引物、模版的量

为什么PCR跑不出来,都弥散了

弥散的原因比较多:1、PCR产物是否在扩增结束后立即进行电泳,电泳液是否是新鲜的,如果不是很可能导致扩增产物降解。2、PCR体系没摸索出来,用正交试验找出正确的PCR体系,不要单纯根据别人的试验资料去做,不要太相信文章中的数据,谁都会保护自己的试验结果和数据的。3、扩增所用的引物设计的不好,找别人帮

跑western时不同浓度的分离胶对跑蛋白的影响

如果胶浓度不同,蛋白在其中迁移的速率就不一样,所以如果采用裁膜的方式,对于蛋白迁移的位置要事先有个预判。10%的胶,浓度高,迁移慢一些,如果都在相同位置裁,这里看到条带,6,8%的胶,膜需要裁得更靠下缘。或者把之前裁掉的膜的下半部分再拿来做做实验试试。当然,电泳时的各种因素也会有影响,但是如果其他配

跑western时不同浓度的分离胶对跑蛋白的影响

如果胶浓度不同,蛋白在其中迁移的速率就不一样,所以如果采用裁膜的方式,对于蛋白迁移的位置要事先有个预判。10%的胶,浓度高,迁移慢一些,如果都在相同位置裁,这里看到条带,6,8%的胶,膜需要裁得更靠下缘。或者把之前裁掉的膜的下半部分再拿来做做实验试试。当然,电泳时的各种因素也会有影响,但是如果其他配

电泳跑胶SDSPAGE的定义

聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构,具有分子筛效应,它有两种形式,一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶,蛋白质在电泳中保持完整的状态,蛋白在其中依三种因素分开:蛋白大小,形状和电荷。而SDS-PAGE仅根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。这个技术首先是1967年由shapiro建立,他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶

电泳跑胶SDSPAGE的定义

SDS-PAGE即聚丙烯酰氨凝胶电泳详细资料如下:聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构,具有分子筛效应,它有两种形式,一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶,蛋白质在电泳中保持完整的状态,蛋白在其中依三种因素分开:蛋白大小,形状和电荷。而SDS-PAGE仅根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。这个技术首先是1967年由s

蛋白质电泳所加样品在浓缩胶中跑的不成一条直线

首先得确认你配置胶的浓度以及配胶的试剂没问题,如果浓度没问题的话,应该是胶板下面(原先圈着的胶条位置)存有气泡没有赶跑,把气泡用吸管赶走后就OK了之前我也碰到过类似情况

跑胶的maker最少可以加多少

跑胶的maker最少可以加5微升。琼脂糖凝胶制作胶板从而让样品在胶板上产生电泳,简称“跑胶”。分子生物学中的跑胶会出现条带,是因为带电荷的生物大分子在电泳池里的运动速度决定于该分子的分子量,所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成条带,进而实现了分离纯化生物大分子的目的。Maker跑出来的每条条带

跑胶时二聚体为什么很亮

在我印象里我们实验室PCR没出现过这种情况,也没有人专门研究这种情况,文章估计就更没有了=.=我提一点我自己的看法吧.你们做过没做过对照试验?如果没有的话建议做两个对照试验:一是PCR体系里加模板和酶,不加引物;二是PCR体系里加引物和酶,不加模板.这两个和正常实验组一起P一起跑胶,然后对照着看一下

生物实验中的”跑胶”是什么意思

琼脂糖凝胶制作胶板从而让样品在胶板上产生电泳,简称“跑胶”。分子生物学中的跑胶会出现条带,是因为带电荷的生物大分子在电泳池里的运动速度决定于该分子的分子量,所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成条带,进而实现了分离纯化生物大分子的目的。

生物实验中的”跑胶”是什么意思

琼脂糖凝胶制作胶板从而让样品在胶板上产生电泳,简称“跑胶”。分子生物学中的跑胶会出现条带,是因为带电荷的生物大分子在电泳池里的运动速度决定于该分子的分子量,所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成条带,进而实现了分离纯化生物大分子的目的。

蛋白样品在跑胶前要如何处理

  一.蛋白样品制备  之前和大家介绍过细胞和组织蛋白质的提取,当我们做WB的时候,需要对提取好的蛋白样品进行处理:在蛋白样品中加入SDS loading buffer 6X(蛋白上样缓冲液)稀释至1X(如蛋白样品有120ul,则加入SDS loading buffer 6X 600ul),混匀,7

WB跑胶后没有条带是什么原因

提取细胞蛋白加1ml裂解液实在是有点多,你可以减少到200-300ul试试,提取蛋白后做个BCA蛋白定量,在做后续的考蓝染色,确定蛋白没有问题再电泳转膜

PCR纯化,跑胶没有出现条带,是什么原因

你要确定你PCR有没有扩增出条带,先用检测胶点了看一下。如果检测胶可以看到条带,回收胶看不到的话,可能是你PCR的产物的量太少了,回收胶胶孔宽,PCR结果不好的条带可能就看不到了。如果你确定你的PCR的产物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,跑胶用的TAE/TBE是不是1X的,你点胶的时候PCR

PCR纯化,跑胶没有出现条带,是什么原因

你要确定你PCR有没有扩增出条带,先用检测胶点了看一下。如果检测胶可以看到条带,回收胶看不到的话,可能是你PCR的产物的量太少了,回收胶胶孔宽,PCR结果不好的条带可能就看不到了。如果你确定你的PCR的产物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,1.跑胶用的TAE/TBE是不是1X的,你点胶的时候P

RNA电泳跑胶为什么没有5S条带

生物体内一般含有核糖体rna(rrna)、信使rna(mrna)、转运rna(trna)三种主要的rna,其中rrna含量最多,提取组织总rna所得最多的就是rrna。真核生物中含有5s、5.8s、18s、28s,原核生物中有5s、16s、23s;而植物组织中一般较多的为5s、18s、28ss代表沉

PCR纯化,跑胶没有出现条带,是什么原因

你要确定你PCR有没有扩增出条带,先用检测胶点了看一下。如果检测胶可以看到条带,回收胶看不到的话,可能是你PCR的产物的量太少了,回收胶胶孔宽,PCR结果不好的条带可能就看不到了。如果你确定你的PCR的产物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,跑胶用的TAE/TBE是不是1X的,你点胶的时候PCR