噬神经元的腺病毒载体的构建
实验概要腺病毒载体，广泛用于外源基因转移到神经胶质细胞，具有细胞毒性。利用腺病毒载体转染神经细胞已经盛行，因为腺病毒载体除了感染细胞后有限的细胞毒性，还利于长期表达转基因。主要试剂人类胚胎肾（HEK）293T细胞腺病毒转移载体质粒腺病毒包装载体PLP1，pLP2（之前），PLP / VSVGDMEM培养基青霉素，链霉素-谷氨酰胺（100X）磷酸盐缓冲液PBS（-）胎牛血清凝聚胺主要设备 10-cm的细胞培养皿50毫升锥形离心管Steriflip-GP过滤器（0.22微米） 超离心管17.0mL5％二氧化碳培养箱荧光显微镜生物安全柜离心机 实验材料2.5M氯化钙溶液：36.75克氯化钙，70毫升双蒸H 2 O，通过0.22μm滤膜过滤，体积调制100毫升2X HEPES缓冲：氯化钠280 mM，50mM肝素钠，1.5mM的Na2HPO4 (pH值7.05）实验步骤腺病毒载体的构建和浓度第1天： HEK细胞的培......阅读全文
蠕虫自噬肠道致衰老
在土壤和研究人员的实验室中扭动的微小线虫以内脏为食——它们自己的内脏。一项最新研究显示，消化自身肠道的习惯能帮助其繁殖，但也加速了它们的衰老。这些结果支撑了一种非正统的假设：人类和其他生物体随着年龄增长会分解，因为在它们年轻时使其受益的特征会变得有害。 时间给线虫带来了巨大伤害。和很多人一样，
请问细胞自噬是什么？
自噬（autophagy）一词来自希腊单词auto-，意思是“自己的”，以及phagein，意思是“吃”。所以，细胞自噬的意思就是“吃掉自己”。 虽然人们早就知道自噬存在，但是只有在 大隅良典的精巧实验之后，人们才意识到它的机制、懂得了它的重要性。 细胞自噬是什么？ 今年的诺贝尔生理学或医
自噬信号通路相关MYCN
这个基因是myc家族的一员，编码一个具有基本螺旋-环-螺旋（bhlh）结构域的蛋白质。这种蛋白位于细胞核内，必须与另一种bhlh蛋白二聚以结合DNA。这种基因的扩增与多种肿瘤有关，尤其是神经母细胞瘤。该基因有多种编码不同亚型的选择性剪接转录变体。This gene is a member of th
自噬信号通路研究背景
2016年诺贝尔生理学或医学奖的自噬是一种动态细胞循环系统，导致大量细胞质内容物的自噬溶酶体降解、异常蛋白质聚集以及过量或受损的细胞器。自噬诱导的关键调节因子是mTOR激酶，它激活了抑制自噬的mTOR（Akt和MAPK信号），而mTOR的负调节（AMPK和p53信号）促进了自噬。ULK与酵母Atg1
细胞自噬的研究方法
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有： 一、自噬诱导剂 (1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模拟内质网应激(2) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Ch
细胞自噬的研究方法
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：一、自噬诱导剂(1) Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模拟内质网应激(2) Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chlor
蠕虫自噬肠道致衰老
在土壤和研究人员的实验室中扭动的微小线虫以内脏为食——它们自己的内脏。一项最新研究显示，消化自身肠道的习惯能帮助其繁殖，但也加速了它们的衰老。这些结果支撑了一种非正统的假设：人类和其他生物体随着年龄增长会分解，因为在它们年轻时使其受益的特征会变得有害。 【《科学》相关文章】 时间给线虫带来
细胞自噬的功能作用
营养不足自噬在各种细胞功能中都发挥作用。营养不足会导致高水平的自噬，降解不需要的蛋白质，并且回收氨基酸，以合成对细胞生存至关重要的蛋白质。在高等真核生物中，自噬作用因动物在出生后切断了来自胎盘的食物供应而被响应。自噬能力降低的突变酵母细胞会在营养缺乏的情况下迅速消失。对APG突变体的研究表明，在饥饿
细胞自噬研究详解（二）
4、自噬流检测方法细胞经自噬诱导或抑制后，需对自噬流的水平进行观察和检测，常用的技术手段见表1： 表1 自噬体计数及自噬流检测方法汇总（Mizushima et al, Cell, 2010）其中，电镜观察法由于受到实验条件和设备的限制应用范围有限；而由于自噬过程发生快速，通过IB/WB检测LC3-
细胞自噬研究详解（一）
一、自噬简介1、大自噬（macroautophagy），也就是通常说的自噬（autophagy），是真核细胞蛋白降解的途径之一。自噬可以被描述为细胞质内的成分（细胞器、蛋白等）被双层膜的囊泡包裹，形成自噬体（autophagosome），进而传递到溶酶体进行降解的过程。详细来说，自噬过程与内涵体途径
自噬流的检测方法
自噬是真核细胞降解长寿蛋白、错误折叠蛋白和受损细胞器的重要生物学过程。细胞自噬由多个步骤组成, 其中包括: ① 吞噬泡的形成； ② 自噬体的形成； ③ 自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体； ④ 自噬溶酶体的降解。自噬流是这些步骤在细胞内连续出现的动态过程, 自噬流中的任一环节出现障碍自噬将无法完成
全身敲除或兴奋神经元条件敲除L2A/LAMP2a的表达
首先，作者在小鼠中进行全身敲除或兴奋神经元条件敲除L2A/LAMP2a的表达。两种小鼠均出现了行为症状，全身敲除和条件敲除的小鼠症状类似。在到达六月龄时，兴奋神经元条件敲除小鼠出现脂褐质和K63泛素化蛋白累积，进一步提示蛋白降解清除出现了问题。 进一步，作者对小鼠的不可溶组份蛋白进行了数量蛋白
巨－噬－细－胞－吞－噬－功－能－和－杀－伤－功－能－的－检－测
实验步骤基本方案1 巨噬细胞吞噬功能的检测材 料单核/巨噬细胞：如巨噬细胞株、小鼠腹腔巨噬细胞[单元6.1，需 用 1 0 %豚蛋白胨或4 % (m /V ) 硫基乙酸盐肉汤]，或 人 P B M C (单 元 8.1)平衡盐溶液（balanced salt solution， BSS)细菌（如单核
科学证实:吗啡上瘾分子机制被破译
毒品成瘾的治疗尚缺乏完全有效的方式，强制戒断后复吸率很高。近日，中国科学院昆明动物研究所首次阐明，吗啡可诱导多巴胺能神经元特异性自噬，从而导致毒品成瘾。该研究为阐明阿片类毒品成瘾的分子机制以及临床治疗提供了新思路和理论依据。该研究成果近日在线发表在《自噬》期刊上。 毒品成瘾困扰人类健康，呈
认识睡眠神经元
《自然—通讯》3月6日发表的一篇论文报告了睡眠对活斑马鱼体内个体神经元的影响。研究发现，睡眠会增加染色体的运动（染色体动力学），从而改变染色体结构并减少DNA损伤。结果显示，染色体动力学可能是定义个体睡眠神经元的潜在标志物。 长期剥夺睡眠可以致命，睡眠障碍也与各种大脑功能缺陷有关。虽然研究人员
原代神经元培养
Protocol for the Primary Culture of Cortical and Hippocampal neurons Solutions and media required:Poly D-lysine/laminin solution - pdfDM/KY - pdfOptim
上海有机所等发现延缓受损神经退化新机制
2月13日，国际学术期刊《科学进展》（Science Advances）发表了由中国科学院上海有机化学研究所生物与化学交叉研究中心方燕姗课题组联合香港科技大学、暨南大学研究团队的最新研究成果“Rapid depletion of ESCRT protein Vps4 underlies inju
追随诺奖的脚步：细胞自噬基因缺陷引发疾病
2016诺贝尔生理/医学奖颁给了细胞自噬这种重要的生物进程，近期来自北京大学医学部，中科院生物物理所的研究人员报道了细胞自噬基因Epg5缺陷导致小鼠视网膜色素样变的重要研究成果。 这一研究成果公布在Autophagy 杂志，文章的通讯作者是中科院生物物理所研究员张宏和北京大学医学部基础医学院免
美研究发现自闭症患者比正常人大脑存在过多“突触”
美国哥伦比亚大学一项新研究发现，与正常人相比，自闭症儿童及青少年的大脑内存在过多“突触”，一旦用药物消除这些多余突触，实验动物自闭症行为便可有所改善。这一发现有助于探索治疗自闭症的新策略。 大脑中一个神经元与另一个神经元相接触的部位叫做突触。这项研究第一作者、哥伦比亚大学助理教授汤国梅对新
限制热量延长寿命？重点不在于吃什么－而是什么在“吃”你
在不挨饿的前提下，饮食限制（Dietary restriction，DR）被证实有能力延长包括灵长类在内的20多种动物的寿命。但是，为什么呢？ 最新一篇发表在《PLOS Genetics》期刊的文章揭示，重要的不是你吃了什么或者吃了多少，而是在于什么在“吃”你，或者消耗你的细胞。 这里的“吃
清华大学Cell－Res发表自噬研究新成果
来自清华大学、中科院生物物理所等处的研究人员，证实Dapper1通过促进Beclin1-Vps34-Atg14L复合物形成驱动了自噬。研究结果发表在7月1日的《细胞研究》（Cell Research）杂志上。 清华大学生命科学学院的陈晔光（Ye-Guang Chen）教授，其主要研究领域是利用
发现自噬基因的过程简介
大隅良典接着利用了他改造过的酵母菌株——在这些酵母挨饿时，它们的自噬体会积累起来。如果对自噬过程重要的基因被失活，那么自噬体积累就理应不会发生。大隅良典将酵母细胞暴露在一种能随机在多个基因里引起突变的药物中，然后诱导自噬过程。 他的策略奏效了！在他发现酵母自噬一年内，大隅良典就鉴定出了第一批对
自噬风云人物榜01
自噬风云人物榜 Daniel Klionsky 来自密歇根大学的Daniel Klionsky教授最为知名的可能是他的《Autophagy》杂志主编身份。在几番自噬研究指南的加持下，《Autophagy》的影响因子一路飙升。 其实，刨掉《Autophagy》主编身份，Daniel Klio
自噬风云人物榜02
Ana Maria Cuervo 来自爱因斯坦医学院的Ana Maria Cuervo教授则是自噬领域除Beth Levine教授之外另一位杰出的女科学家。 Ana Maria Cuervo教授最为人知的是发现分子伴侣介导的自噬。与通常意义上的自噬（也称巨自噬）不同，分子伴侣介导的自噬无需生
关于噬菌粒的特征介绍
1、双链DNA既稳定又高产，具有常规质粒的特征； 2、免除了将外缘DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体载体这一繁琐又费时的步骤； 3、由于载体足够小，故可得到长达10kb的外源DNA区段的单链。
一文了解自噬阶段
自噬是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程，借此实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。 自噬在机体的生理和病理过程中都能见到，其所起的作用是正面还是负面的尚未完全阐明，对肿瘤的研究尤其如此，值得关注。
检测自噬的方法有哪些
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：（一）自噬诱导剂1）bredeldina/thapsigargin/tunicamycin：模拟内质网应激2）carbamazepine/l-690，330/lithiumchloride（氯化锂）：imp
pⅧ噬菌粒库的构建
实验概要本实验构建了pⅧ噬菌粒库，主要包括：载体的准备，插入片段的准备，连接插入片段与BstⅪ消化的p8V5载体及扩增与储存。主要试剂p8V5噬菌粒载体(AHymaxlnc)LB氨苄青霉素培养基(1％蛋白胨，0，5％酵母提取物， 0.5％ NaCl，100ug/m1氨苄青霉素)BstⅪ限制性内切酶(
Nature：自噬与干细胞命运
骨骼肌的再生能力依赖于长寿的肌肉干细胞（称为卫星细胞）。这些细胞一般处于静息状态，在组织受损的时候激活，生成肌纤维或者进行自我更新。静息状态是维持骨骼肌干细胞群体的一种简单方式。 肌肉干细胞的再生功能在衰老过程中逐渐衰退，这种衰退在生命的最后阶段达到顶峰。正因如此，高龄老人容易患上肌肉衰减综合
Cancer－cell解析癌症与自噬
辛辛那提大学癌症中心(CCC)的研究人员发现，一种叫做瞬时受体电位离子通道蛋白3（TRPM3）的膜通道促进了肾癌的肿瘤生长，治疗性靶向这一通道有可能为这一疾病找到更多有效的治疗方法。他们的研究结果发布在11月10日的《癌细胞》（Cancer Cell）杂志上。 肾癌是泌尿系统肿瘤中致死率最高的