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生物大分子样品的保存

生物大分子制成品的正确保存极为重要,一旦保存不当,辛辛苦苦制成的样品失活、变性、变质,使前面的全部制备工作化为乌有,损失惨重,全功尽弃。影响生物大分子样品保存的主要因素有:⑴空气:空气的影响主要是潮解、微生物污染和自动氧化。空气中微生物的污染可使样品腐败变质,样品吸湿后会引起潮解变性,同时也为微生物污染提供了有利的条件。某些样品与空气中的氧接触会自发引起游离基链式反应,还原性强的样品易氧化变质和失活,如维生素C、巯基酶等。⑵温度:每种生物大分子都有其稳定的温度范围,温度升高10℃,氧化反应约加快数倍,酶促反应增加1~3倍。因此通常绝大多数样品都是低温保存,以抑制氧化、水解等化学反应和微生物的生成。⑶水份:包括样品本身所带的水份和由空气中吸收的水份。水可以参加水解、酶解、水合和加合。加速氧化、聚合、离解和霉变。⑷光线:某些生物大分子可以吸收一定波长的光,使分子活化不利于样品保存,尤其日光中的紫外线能量大,对生物大分子制品影响最大,......阅读全文

生物样品的低温保存

生命科学研究中组学技术的发展以及临床医疗领域新一代检测技术的进步,促进了对生物样品的需求,也促进了生物样品的采集、保存等环节的正规化、规模化。生物样品的保存,不外常温和低温两种方式。常温保存能耗少、环保,有时也非常方便,是一种有潜力的保存方式。一些机构正在积极探索不同的常温保存技术。上海伯豪生物也推

生物样品的常温保存

摘要: 高质量的生物样品是组学研究和个性化医疗过程中临床检验顺利实施的前提。生物样品的保存方式关系到待检样品的质量和检测的结果。样品的适当的处理、保存方式是最终获取准确测定结果必不可少的一环。常温保存能耗少,环保,效费比较高,是一种有潜力的生物样品保存方式。 正文: 生命科学领域高通量技术的发展促进

蛋白质提取与制备(Protein Extraction and Preparation)-6

PH 值:与沉淀蛋白质或酶原理相同,结晶的溶液PH 值一般选择在被结晶的蛋白质或酶的等电点附近,以利于晶体的析出。温度:除少数情况外,通常选择低温条件进行。低温条件对蛋白质和酶不仅溶解度低且不易变性。在中性盐溶液中结晶时,温度可在0℃至室温范围内选择,在有机溶剂中结晶一般要求温度较低。晶种:不易结晶

蛋白质提取与纯化技术(二)

2、等电点沉淀法 蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小,因而溶解度也最小,各种蛋白质的等电点有差别,可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀,但此法很少单独使用,可与盐析法结合用。3、低温有机溶剂沉淀法 用与水可混溶的有机溶剂,甲醇,乙醇或丙酮,可使多数蛋白质溶解度降低并析出,此法分辨

蛋白质提取与纯化技术

 选择材料及预处理  以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到

蛋白质提取与纯化技术(三)

一、样品的浓缩生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀,为了保存和鉴定的目的,往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的:1、减压加温蒸发浓缩通过降低液面压力使液体沸点降低,减压的真空度愈高,液体沸点降得愈低,蒸发愈快,此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。2、空气流动蒸发浓缩 空气的流动可使液体

蛋白质浓缩、干燥及贮存

一、样品的浓缩生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀,为了保存和鉴定的目的,往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的: 减压加温蒸发浓缩 通过降低液面压力使液体沸点降低,减压的真空度愈高,液体沸点降得愈低,蒸发愈快,此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。 空气流动蒸发浓缩 空

抗原的制备-2

 2.核酸的分离纯化  从细胞中提取核酸后,仍混杂着蛋白质、多糖和各种大小分子核酸同类物。除去这些“杂质”的过程,也就是核酸提纯过程。在核酸的分离纯化时,为防止核酸大分子的变性降解,必须在0~4℃的低温条件下操作。核酸酶的水解作用,是过去制备具有活性核酸大分子的严重障碍,现普遍采用加入去污剂或加入E

抗原的制备方法-2

表2-1 室温下由S1提高到S2时每升加固体硫酸铵的克数  0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.00 0 55 113 114 175 209 242

神器——冷冻电镜“乱入”材料圈?

  说起冷冻电镜,小编想不管是研究生还是教授大咖,可能和科研有那么一丁点联系的人对这个名字都不会陌生,因为它实在太出名了!基于冷冻电镜产出的科研成果很多都发表在Nature、Science、Cell等顶刊上(羡慕脸),堪称NSC神器。冷冻电镜技术的发展直接带动了生命科学领域,特别是结构生物学的飞速发

生物样本冷冻储存技术有哪些?

  1 储存温度  生物样本的长期储存通常使用尽可能低的温度来降低样本内的生化反应提高样本内各种成分的稳定性。生物大分子、细胞、组织和器官的常用储存温度有-80℃(超低温冰箱), -140℃(液氮气相或深冷冰箱)以及-196℃(液氮液相),温度越低样本的稳定保存时间越长。0~-60℃是水的结晶温度,

生物样本冷冻储存技术(一)

1 储存温度    生物样本的长期储存通常使用尽可能低的温度来降低样本内的生化反应提高样本内各种成分的稳定性。生物大分子、细胞、组织和器官的常用储存温度有-800C(超低温冰箱), -1400C(液氮气相或深冷冰箱)以及-1960C(液氮液相),温度越低样本的稳定保存时

生物大分子浓缩、干燥及保存

一、样品的浓缩    生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀,为了保存和鉴定的目的,往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的:        1、减压加温蒸发浓缩  通过降低液面压力使液体沸点降低,减压的真

生物大分子的浓缩、干燥和保存方法

一、样品的浓缩  生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀,为了保存和鉴定的目的,往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的:1、减压加温蒸发浓缩  通过降低液面压力使液体沸点降低,减压的真空度愈高,液体沸点降得愈低,蒸发愈快,此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。2、空气流动蒸发浓缩 空气的流动

蛋白质提取与纯化技术-3

1、减压加温蒸发浓缩   通过降低液面压力使液体沸点降低,减压的真空度愈高,液体沸点降得愈低,蒸发愈快,此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。 2、空气流动蒸发浓缩 空气的流动可使液体加速蒸发,铺成薄层的溶液,表面不断通过空气流;或将生物大分子溶液装入透析袋内置于冷室,用电扇对准吹风

质谱沙龙第十七期活动报道

      色谱质谱界著名专家为您揭示:我们还需做出什么努力,来迎接痕量分析的挑战?AB总部Qtrap产品线经理现场介绍5500新看点……       2009年3月28日下午,质谱沙龙第十七期活动

快速了解冷冻含水超薄切片

  冷冻超薄切片技术是在光学显微冷冻切片和电镜超薄切片的基础上发展起来的。由于常规超薄切片技术中应用化学固定、有机溶剂脱水、树脂包埋等一系列处理,均可使生物样品受到物理和化学性损伤,引起组织和细胞内蛋白质分子变性,大部分可溶性成分及某些生物大分子物质被抽提或发生移位。为了弥补这些缺陷,人们创造了冷冻

低温保存对生物样本及其生物大分子的影响

引言生物样本库主要是指收集和应用健康及疾病生物体的生物分子、细胞、组织和器官等,包括人体器官、组织、体液或处理过的样本(DNA、RNA、蛋白等),以及与这些样本相关的临床资料、质控、管理等生物应用系统。在医学研究中,生物样本是联系分子信息与疾病的桥梁。根据使用目的的区别,样本的保存要求也会有所差别。

生物大分子的离心分离实验(一)

一、引言在八十年代以前,生物大分子(特别是核酸、蛋白)用离心方法分离纯化占有很重要的地位。用分析超离心方法测定生物大分子的分子量、沉降系数、扩散系数、微分比容等在生物化学实验中也占有一席之地。八十年代以后,由于离心技术的快速发展(微处理器的引入,变频驱动的完善、转速的提高等等),先进的制备用超速离心

聚丙烯酰胺凝胶电泳仪分析技术

        聚丙烯酰胺凝胶电泳仪(PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的电泳技术,于1959年建立,1964年进一步从理论和实验技术上得到改进并推广应用。由于分辨率高,目前已广泛用于蛋白质等生物大分子的分析。一、PAGE工作原理:   

生化实验讲义(理论部分)——层析技术(八)

离子交换剂的总交换容量通常以每毫克或每毫升交换剂含有可解离基团的毫克当量数(meq / mg或meq / ml)来表示。通常可以由滴定法测定。阳离子交换剂首先用HCl处理,使其平衡离子为H?。再用水洗至中性,对于强酸型离子交换剂,用NaCl充分置换出H?,再用标准浓度的NaOH滴定生成的HCl,

生物大分子制备的前处理

生物大分子制备的前处理 生物大分子制备的前处理(生物材料的选择、细胞破碎、生物大分子的提取) 1 生物材料的选择  制备生物大分子,首先要选择适当的生物材料。材料的来源无非是动物、植物和微生物及其代谢产物。从工业生产角度选择材料,应选择含量高、来源丰

冷冻电镜的发展

  细胞里面的生命活动井然有序,每一个部分都有其特定的结构,承担不同的功能。生物大分子则是一切生命活动的最终执行者,它们主要是核酸和蛋白。核酸携带了生命体的遗传信息,而蛋白是生命活动的主要执行者。自现代分子生物学诞生以来的半个世纪里,解析和分析生物大分子的结构、进而阐释其功能机制一直都是现代生命科学

透析袋的选择和使用方法

 透析技术自Thomas Graham 于1861年发明到现在已有一百多年的历史,它已成为生物化学实验室简便,常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,去除盐、少量有机溶剂、小分子杂质、样品浓缩和改变微量样品的缓冲系统等都要用到透析技术。    &nb

蛋白保存条件受那些因素影响?

生物大分子的贮藏保存可分为干态和液态贮藏两种。所以蛋白保存也有干态保存和液态保存两种。但是蛋白保存条件却受多种因素的影响,今天分析的就是影响蛋白保存条件的因素。 蛋白质失活受多种理化因素的影响,主要有空气、温度、水分、光线、酸碱度、样品状态、微生物活动、保存时间和容器等。这些因素可单独起作

亲和层析(Affinity Chromatography)(3)

⑥元素分析:如果配体中含有某种特别的元素,通过元素分析就可以确定配体结合量。⑦放射性分析法:偶联中加入一定量带有同位素的配体,通过放射性分析确定配体结合量,这是一种非常灵敏的方法。影响配体结合量的因素很多,包括基质和配体的性质、基质的活化方法及条件、基质和配体偶联反应的条件等等。例如通常溴化氰活化的

生化实验讲义(理论部分)——层析技术(十)

配体与基质偶联后,通常要测定配体的结合量以了解其与基质的偶联情况,同时也可以推断亲和层析过程中对待分离的生物大分子吸附容量。配体结合量通常是用每毫升或每克基质结合的配体的量来表示。测定配体结合量的方法很多,下面简单介绍几种:1) 差量分析:根据加入配体的总量减去配体与基质偶联后洗涤出来的量即可大致推

食品、生物、药物分析中的样品前处理方法汇总

  为什么要进行样品前处理   1、富集浓缩被测痕量组分(ppm,ppb, ppt 级)的作用,提高方法的灵敏度,降低最小检测限。   2、消除基体对测定的干扰,提高方法的选择性   3、使被测组分从复杂的样品中分离出来,制成便于测定的溶液形式   4、通过衍生化的前处理方

分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作

  【实验目的】   (1)了解实验的常规仪器、设备、耗材。   (2)掌握本实验所用仪器的功能和使用方法。   【实验内容】   一、验室的常规仪器、设备   (一) 温度控制系统:   1. 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要,必须具备不同控温级别的

蛋白质提取与纯化技术-2

2、等电点沉淀法 蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小,因而溶解度也最小,各种蛋白质的等电点有差别,可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀,但此法很少单独使用,可与盐析法结合用。 3、低温有机溶剂沉淀法 用与水可混溶的有机溶剂,甲醇,乙醇或丙酮,可使多数蛋白质溶解度降低并析出,此法分