最全面的MTT相关技巧大汇总
（一）实验前应明确的问题1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。2.药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。3. 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。4.培养时间。200ul的......阅读全文
MTT（四唑盐）比色法
四唑盐（MTT）比色法可应用于：（1）检测细胞存活和生长；（2）大规模的抗肿瘤药物筛选；（3）细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定；（4）生物活性因子的活性检测。 实验方法原理活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DM
MTT（四唑盐）比色法
实验方法原理 MTT法是Mosmann 1983年报道的，以后此方法得到了迅速发展并广泛应用于临床与科研研究。其原理是活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅
杂交瘤技术基本程序与方法11
（A）免疫扩散法 这种方法简便、准确，最常用。被检的McAb样品通常为杂交瘤细胞培养上清液，由于其中单抗的浓度较低，应先将其浓缩10-20倍左右再检测。小鼠腹水中的单抗浓度虽很高，但也含有小鼠本身的各类Ig，它们也会与相应抗血清发生反应，使鉴定结果出现混乱，即使将腹水稀释10-20倍后再检测也不能完
染色质免疫共沉淀技术（ChIP）
真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在。因此，研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, CHIP）是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。它的基本原理是在活细
一步搞定Th细胞检测中的PMA和离子霉素的刺激浓度
1、 按照联科生物 “人Th1&Th2 检测方法”或“小鼠Th1&Th2 检测方法”制备样本；2、 准备6份样本，按以下浓度加入刺激剂和阻断剂，37 ℃ 5% CO2 培养4~6小时（不要超过6小时），中间混匀几次。1）PMA 25ng/mlIonomysin 1ug/ml2）PMA 125ng/m
室间孔囊性少突胶质细胞瘤病例分析
病例女，14岁。头痛、头晕伴视物模糊10余天，进行性加重伴呕吐4天。专科检查无特殊。 MRI检查：左侧室间孔区见类圆形长T1、长T2信号，大小2.2 cm×2.0 cm，FLAIR囊腔呈稍高信号，囊壁右后份见条状短T1、短T2信号，DWI囊腔呈低信号、右后份病变呈稍高信号，增强扫描囊壁右后份
免疫学细胞因子的定量检测，Elispot酶联斑点分析技术－五
ELISPOT 实验方案 对应BD的试剂盒 实验材料的准备 试剂盒中没有但是必须的 材料: • 已消毒的移液器 (Gilson)。单道20ul,100ul,200ul,1ml, 8/12道200ul • 无菌一次性聚苯乙烯吸量管 (1ml, 5ml, 10ml）(Axygen)。
间接血凝试验
实验原理若将可溶性的鼻疽抗原吸附在比其体积大千万倍的红细胞表面上，使红细胞产生一种新的血清学性质，制成所谓的致敏红细胞，即可用以诊断鼻疽。只要与少量相应抗体相遇，红细胞通过抗原抗体反应，即可被动地结合在一起，呈现肉眼可见的凝集现象，阴性者红细胞由于自然沉积于孔底，则呈圆点状。这样可以明显地提高反应的
细胞凋亡试验常用的方法
细胞凋亡试验常用的方法（MTT法、荧光法、DNA琼脂糖凝胶电泳法与流式细胞仪检测法）（一）药物对肿瘤细胞的抑制效应的MTT法：用培养基将肿瘤细胞调整至2 X108个/L，在96孔板中每孔加入100ul细胞悬液于37℃、5% CO2下培养过夜。次日每孔加入不同浓度的药物100mg/L作为试验组，设加完
细胞凋亡试验常用的方法（MTT法、荧光法、DNA琼脂糖凝胶...
（一）药物对肿瘤细胞的抑制效应的MTT法：用培养基将肿瘤细胞调整至2 X108个/L，在96孔板中每孔加入100ul细胞悬液于37℃、5% CO2下培养过夜。次日每孔加入不同浓度的药物100mg/L作为试验组，设加完全培养基不加药物的阴性对照，并用功能明确的药物为阳性对照和0.5%的乙醇溶剂对照，每
外显子捕获与扩增
实验材料 大肠杆菌菌株 HB101 质粒 pSPL3 COS-7 细胞 载体 pBluescriptⅡ 大肠杆菌 DH5α
MTT实验的一些细节问题
一、细胞： 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样
MTT实验的一些细节问题
一、细胞： 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。
MTT实验的一些细节问题
一、细胞：1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，
免疫复合物(immune－complexes)的几种测定方法（2）
2、C1q固相法测定免疫复合物基本原理 将待检血清加入包被有C1q的微量反应板中，待检血清中免疫复合物和C1q结合，再与酶标记抗人IgG反应，通过底物颜色的深浅判断免疫复合物的存在及含量。试剂与仪器 有成套试剂盒出售。实验步骤按试剂盒说明书进行，主要步骤如下：（1）将待检血清和参考血清（HAHG）分
猴白介素4（IL4）ELISA试剂盒操作步骤
猴白介素4（IL-4）操作步骤： 1.加入50ul标准品（Standards）、血清标本于相应反应板孔中。 2.每孔加入100ul酶联物（Conjugate），轻轻混匀30秒（重要），室温60分钟。 3.洗板：甩尽板内液体，用蒸馏水或者洗涤液（普通洗涤液，自配）洗涤反应板，并去
环氧合酶2－(COX2)－ELISA使用说明
环氧合酶-2 (COX-2)简介COX是一种膜结合酶，负责花生烯酸氧化生成前列腺素G2（PGG2）以及随后PGG2转变为PHG2。这是各种前列腺素生成的第一步。COX至少有两种不同的亚型，组成表达型COX-1，和诱导型COX-2。COX-1行使着看家功能，如血管止血，肾流血量，肾小球功能维护。COX
利用特异性多克隆抗体对磺胺类药物的免疫分析
实验概要 磺胺类药物是一类重要的具有广谱抗菌作用的药物，主要用于预防和治疗细菌感染性疾病，也常做为饲料添加剂促进动物生长，但不合理的使用造成在动物性食品中残留，可能对人类的健康造成潜在危害。本试验利用ELISA检测磺胺类药物，有一定的实用价值。 实验步骤 1. 蛋白螯合 根据UV吸光值测量
利用特异性多克隆抗体对磺胺类药物的免疫...
实验概要磺胺类药物是一类重要的具有广谱抗菌作用的药物，主要用于预防和治疗细菌感染性疾病，也常做为饲料添加剂促进动物生长，但不合理的使用造成在动物性食品中残留，可能对人类的健康造成潜在危害。本试验利用ELISA检测磺胺类药物，有一定的实用价值。实验步骤1. 蛋白螯合根据UV吸光值测量半抗原/蛋白的摩尔
谷胱甘肽的测定实验
双抗夹心ELISA法 免疫组织法 实验方法原理 先将康体包被于反应板上，加入待测抗原，然后再加入酶标康体，显色后即可测得抗原含量。
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至
免疫PCR技术
（一）材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备免疫球蛋白（如IgG、IgM）的Fc片段上有糖基存在，因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。（1） 将纯化的抗体（IgM或IgG， 0.1~1.0ml）在标记缓冲液（0.1Mol/L NaAc，pH值5.5， 0.1Mol
MTT分析实验
实验概要本实验介绍了一种检测细胞存活和生长的方法- MTT分析实验。实验原理MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二
免疫细胞化学染色操作规程
一、材料和试剂1、玻片：须用免疫组化专用玻片，或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液，用PBS配。3、3%牛血清白蛋白（BSA），用PBS配。4、0.01M PH7.4 PBS5、1% BSA-PBS（含0.05% Tween20）6、AEC底物（1）底物缓冲液（20X
菌体/细胞裂解法汇总
一、反复冻融法：1、将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。2、至少3次以上冻溶。3、IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-200C 冷
菌体/细胞裂解的常用方法和配方
、反复冻融法：1. 将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。2. 至少3次以上冻溶。3. IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-2
菌体/细胞裂解的常用方法和配方
一、反复冻融法：1. 将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。2. 至少3次以上冻溶。3. IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-
NP40以及菌体/细胞裂解法2
4、20毫升细胞裂解液配方:40 μL 0.5M EDTA (PH8.0)，4 ml 10% SDS，1 ml 1M Tris-cl(PH6.8)，14.96 ml 蒸馏水。5、我始终未明白楼主如果想收集全蛋白，而不考虑包涵体的话，为何要用超声呢？直接水煮不就可以了吗？6、将1ml菌离心弃上清，留大
间接血凝试验
实验概要本文以鼻疽为例介绍了间接血凝试验。实验原理若将可溶性的鼻疽抗原吸附在比其体积大千万倍的红细胞表面上，使红细胞产生一种新的血清学性质，制成所谓的致敏红细胞，即可用以诊断鼻疽。只要与少量相应抗体相遇，红细胞通过抗原抗体反应，即可被动地结合在一起，呈现肉眼可见的凝集现象，阴性者红细胞由于自然沉积于