最全面的MTT相关技巧大汇总
（一）实验前应明确的问题1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。2.药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。3. 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。4.培养时间。200ul的......阅读全文
细胞总乙酰化水平的快速测定方法
步骤一：亲和色谱分离提纯乙酰化蛋白 1. 用细胞裂解液裂解细胞，10000rpm 离心2 分钟，取上清备用。 2. 取20-40ul 抗乙酰化赖氨酸抗体填料(Anti-acetylated lysine Agarose,ICP0388，如右图所示)， 用PBS 洗2 次，每次1ml。
NP40以及菌体/细胞裂解法2
4、20毫升细胞裂解液配方:40 μL 0.5M EDTA (PH8.0)，4 ml 10% SDS，1 ml 1M Tris-cl(PH6.8)，14.96 ml 蒸馏水。5、我始终未明白楼主如果想收集全蛋白，而不考虑包涵体的话，为何要用超声呢？直接水煮不就可以了吗？6、将1ml菌离心弃上清，留大
菌体/细胞裂解的常用方法和配方
、反复冻融法：1. 将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。2. 至少3次以上冻溶。3. IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-2
菌体/细胞裂解的常用方法和配方
一、反复冻融法：1. 将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。2. 至少3次以上冻溶。3. IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-
菌体/细胞裂解法汇总
一、反复冻融法：1、将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。2、至少3次以上冻溶。3、IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-200C 冷
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至
活细胞间接免疫荧光法
一．实验器材：1． 器材：40孔塑料板、40孔板离心机、微量加样器、振荡器、盖玻片、荧光显微镜等2． 试剂：单抗隆抗体（单抗）、荧光标记抗鼠免疫球蛋白、PBS（pH7.2-7.4）、甘油、叠氮钠（NaN3）等二．方法（微量法）1． 将分离好的单个核细胞用PBS洗2次，1000rpm每次10分钟
大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA检测法
4. 即用，或放-20/-70℃保存3天。计算结果时乘以稀释倍数50。（注意：不同的标本cGMP的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度） 5. 细胞培养上清或组织匀浆10倍稀释(410ul的标本稀释液＋50ul样本＋20ul的1N HCI+20ul的1N NaO
细胞总乙酰化水平的快速测定方法
细胞总乙酰化水平的快速测定方法 -------免疫亲和色谱-ELISA 方法 步骤一：亲和色谱分离提纯乙酰化蛋白 1. 用细胞裂解液裂解细胞，10000rpm 离心2 分钟，取上清备用。 2. 取20-40ul 抗乙酰化赖氨酸抗体填料(Anti-acetylated
用－cDNA－芯片分析人类基因表达实验
实验材料 母板试剂、试剂盒 细菌细胞中的标记LB 培养基氨苄青霉素乙醇Super 肉汤培养基 甘油96孔碱裂液T low E 缓冲液10 X PCR 缓冲液 20 X SSC琥拍酸酐仪器、耗材 96深孔板和V 形塑料细胞培养皿水平微量培养板离心96孔多位点复制针1 加仑储存袋多微孔的带层带孔的振荡器
基本方案1－cDNA－合成与印迹
实验材料母板试剂、试剂盒细菌细胞中的标记LB 培养基氨苄青霉素乙醇Super 肉汤培养基甘油96孔碱裂液T low E 缓冲液10 X PCR 缓冲液20 X SSC琥拍酸酐仪器、耗材96深孔板和V 形塑料细胞培养皿水平微量培养板离心96孔多位点复制针1 加仑储存袋多微孔的带层带孔的振荡器用于深孔板
谷胱甘肽的测定实验
实验方法原理 先将康体包被于反应板上，加入待测抗原，然后再加入酶标康体，显色后即可测得抗原含量。实验材料 抗体试剂、试剂盒 碳酸盐缓冲液Na2CO3磷酸盐缓冲液NaClKClTMB二甲基亚砜牛血清蛋白仪器、耗材 酶标仪培养箱实验步骤 一、材料准备1. 包被液：0.05 mol/l（pH9.6）碳酸
酶联免疫吸附试验——抗体检测实验－(ELISA－试验)6
实验方法原理在测定单一细胞群体的抗原表达水平时，该检测过程（图1.1.5）与流式细胞分析 一样灵敏（单元4.1、单元4. 2）。但在检测混合细胞时，敏感性不及流式细胞分析。用生物素化的抗体替代酶标抗体，就可转化为间接方法，而后加入亲和素标记的碱性磷酸 酶再次孵育可增加敏感性。实验步骤一、附加材料（其
细胞转染：脂质体转染的几个实验方法
实验原理 脂质 体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转
脂质体转染的几个实验方法
实验原理 脂质 体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转
脂质体转染的几个实验方法
摘要： 本实验介绍了脂质体转染的几个方法。 实验原理 脂质 体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把 DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-
脂质体转染的几个实验方法
实验概要本实验介绍了脂质体转染的几个方法。实验原理脂质体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先
人淋巴细胞功能相关抗原(LFA1)ELISA试剂盒
人淋巴细胞功能相关抗原(LFA-1)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人LFA-1 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 LFA-1与单抗结合，加入生物素化的抗人LFA-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物
人可溶性白细胞抗原I(sHLAI)ELISA试剂盒
人可溶性白细胞抗原I(sHLA-I)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 sHLA-I 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 sHLA-I与单抗结合，加入生物素化的抗人sHLA-I，形成免疫复合物连接在板上，辣根
人白细胞三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒
人白细胞三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和尿液、唾液生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 LTD4 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 LTD4与单抗结合，加入生物素化的抗人LTD4，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记
人趋化因子(RANTES)ELISA试剂盒
人趋化因子(RANTES)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和尿液、唾液生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 RANTES/CCL5 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 RANTES与单抗结合，加入生物素化的抗人RANTES，形成免疫复合物连接在板上
人Elafin(Elafin)ELISA试剂盒
人Elafin(Elafin)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和尿液、唾液生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 Elafin/CCL5 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Elafin与单抗结合，加入生物素化的抗人Elafin，形成免疫复合物连接在
外显子捕获与扩增（三）
凝胶琼脂糖凝胶（1.5%m/V), 用 TBE 配制核酸与寡核苷酸寡核苷酸引物 [20 mmol/L,TE(pH8.0) 配制]分别提取自转染有对照载体和重组载体的 COS-7 细胞的 RNA(阶段 3)。培养基含 50ug/ml 氨苄青霉素的 LB 琼脂平板专用设备自动微量加样器所用的加样器尖头微
人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4－(CTLA4)ELISA试剂盒
人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 (CTLA-4)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 CTLA-4 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 CTLA-4与单抗结合，加入生物素化的抗人CTLA-4，形成免疫复合物连接
细胞培养板的选择和使用
一、细胞培养板细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具，形状、规格、用途多样。你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫？你是否正为如何方便、正确使用培养板而苦恼？你对如何处理培养板是否也有困惑？对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会？二、细胞培养板的选择1）细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底
大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测法
大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 SOD 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 SOD与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠SOD，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Stre
大鼠谷胱甘肽－(GSH)ELISA检测法
大鼠谷胱甘肽 (GSH)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 GSH 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 GSH与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠GSH，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptav
人超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒
人超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 SOD 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 SOD与单抗结合，加入生物素化的抗人SOD，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Strept
人谷胱甘肽－(GSH)ELISA试剂盒
人谷胱甘肽 (GSH)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 GSH 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 GSH与单抗结合，加入生物素化的抗人GSH，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavid
人胃泌素－(Gastrin)ELISA－试剂盒准备试剂收集及注意事项
人胃泌素 (Gastrin)ELISA 试剂盒准备试剂与收集血样收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20 ℃或 -70 ℃ ）保存，避免反复冻融。2. 标准品液配制：使用前加入1ml 蒸馏水 混