最全面的MTT相关技巧大汇总
（一）实验前应明确的问题1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。2.药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。3. 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。4.培养时间。200ul的......阅读全文
PBS缓冲液的配方
PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结：母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配
铺96孔板一般细胞每孔铺多少个细胞
6孔板相对还是挺容易把细胞铺匀的，弄不好的话细胞主要在边上。 所以，你加2ml混匀的细胞悬液，加在中间位置，让他自动往两边扩散，当然新板子有时候它扩散不了。你就稍微动一下就行。铺完板子后，要趁细胞没有沉底的时候
杂交瘤技术基本程序与方法6
③全菌抗原的ELISAS a、新鲜培养的细菌用蒸馏水或PBS悬浮，并调整细菌浓度至1×108个/ml。必须指出，对于人畜共患病病原体需注意安全操作，最好是灭活处理。 b、每孔中加100ul 5%戊二醛溶液（0.1mol/L NaHCO3 95ml+25%戊二醛溶液5ml），37℃作用2小时，蒸馏水洗
MTT法实验步骤
贴壁细胞1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。2.、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板
染色质免疫共沉淀技术（ChIP）－实验
实验概要染色体免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于体内分析发展起来的方法，也称结合位点分析法，在过去十年已经成为表观遗传信息研究的主要方法。这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。ChIP不仅可以检测体内反
pbs缓冲液的配制配方
pbs缓冲液的配制配方是10X的PBS母液，然后再对其母液进行1:10稀释即可获得PBS缓冲液。PBS是磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer Saline），是生物学实验室最常用的缓冲液之一。其主要成分包括：氯化钠（NaCl）、氯化钾（KCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）和磷酸二氢钾（KH
Western－Blot实验步骤
实验步骤： 1.分别配制 5%浓缩胶和12%分离胶 12%分离胶10mL 5%积层胶6mL H2O 3.3mL H2O 4.20mL 30% Acrylamide 4mL 30% Acrylamide 1mL pH8.8 Tris HCl（1.5M） 2.5mL PH6.8Tris
淋巴细胞转化试验（MTT）
（一）原理：四甲基偶氯唑盐（MTT）可作为线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成紫兰色的甲臢，将结晶的甲臢溶解释放后，可根据所测的OD值反映活细胞的数量和活性，从而推知待测样品的水平。 （二）材料： MTT、电子天平、PBS液、二甲基亚砜、
有什么方法可以确定细胞记数板每孔含多少细胞
孔里面的是靠数的 总细胞数是根据孔里面的分布来算出来的
六孔板铺板加多少ul
六孔板铺板加多少ul，这个问题取决于您要使用的六孔板的类型和尺寸。如果您使用的是标准的六孔板，那么您需要加入200ul的液体。如果您使用的是大型六孔板，则需要加入更多的液体，最多可以加入500ul的液体。此外，您还需要考虑六孔板的材料，如果您使用的是塑料六孔板，那么可以加入更多的液体，最多可以加入1
免疫PCR试验方法全解析
*、材料与方法【生物素标记特异性抗体的制备】 免疫球蛋白的Fc片段上有糖基存在，因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。 ① 将纯化的抗体(IgM或IgG，0.1~1.0ml)在标记缓冲液(0.1Mol/L NaAc，pH值5.5，0.1Mol/L NaCl)中4℃透
酶免疫细胞化学染色操作指南2
2、加3% H2O2，细胞片20ul/孔，培养板100ul/孔，使充分覆盖住细胞。3、室温10分钟后，甩掉 H2O2，用PBS轻轻淋洗2分钟。用滤纸吸干细胞周围水份，96孔在滤水纸上扣干，但注意保持细胞湿润。三、封闭细胞片用5-10%正常山羊血清（20ml/孔），细胞板用2-5%BSA（PBS配制）
酶联免疫斑点实验(ELIspot)_PVDF－Elispot法
实验方法原理细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后， 被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF孔板出现"紫色"的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过ELISPOT酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出
无菌检验用洗脱液（含PBS）配方
中文名无菌检验用洗脱液（含PBS）英文名ELUENT FOR STERILE TEST用途用于无菌检验样品的制备。标准配方（g/L)配方（每升） 含量 蛋白胨 10.0g 氯化钠 8.5
ICC用细胞抗原的制备
一、材料和试剂1、0.01M PBS(pH7.4)： NaCl 8.0g； KCl 0.2g； Na2HPO4 1.44g； KH2PO4 0.24g； ddH2O至1000ml ； 高压灭菌,分装。2、0.25%胰酶：称取EDTA 0.02g NaCl 0.8g KCl 0.04g
淋巴细胞转化试验（MTT）原理=材料和方法
（一）原理：四甲基偶氯唑盐（MTT）可作为线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成紫兰色的甲臢，将结晶的甲臢溶解释放后，可根据所测的OD值反映活细胞的数量和活性，从而推知待测样品的水平。（二）材料：MTT、电子天平、PBS液、二甲基亚砜、无菌针头过滤
MTT法细胞活性检测实验步骤
MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。MTT主要有两个用途：
MTT指南（配制、原理、操作步骤、结果分析与注意事项）2
(3)从第一步准备的3ml细胞悬液中取1ml, 加入上管，混匀后细胞计数，此时一般为或小于5-10×104/ml，该浓度相当于细胞计数板4个大格内每大格平均5-10个细胞（见下图）；如果不够该浓度，再根据计数的结果滴加细胞悬液，每滴按50ul计算。4)细胞数量因实验目的不同应做相应调整，如一般细胞增
谷胱甘肽的测定实验
谷胱甘肽（glutathiose,r-glutamyl cysteingl +glycine,GSH）是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成。存在于几乎身体的每一个细胞。实验方法双抗夹心ELISA法 免疫组织法 实验方法原理 先将康体包被于反应板上，加入待测抗原，然后再加入酶
人粒细胞集落刺激因子（GCSF）ELISA试剂盒使用说明
简介 G-CSF属于细胞因子类，刺激中性粒前体细胞的分化和增殖，它由成纤维细胞和血管内皮细胞产生，且有报道称，在某些肿瘤内可刺激其增殖。人G-CSF试剂盒可检测人G-CSF 原理 此试剂盒根据酶免法的夹心原理，利用两种不同的高特异性抗体，TMB作为着色剂，颜色强度与人G-CSF的量成正比 检测范围
人可溶性肾素(前体)受体ELISA试剂盒
简介 肾素受体(RR)是肾素和肾素前体的共同受体.当肾素与其受体结合后, 肾素作用于全身循环及局部组织中的血管紧张素,使其变成血管紧张素1,另外肾素受体受刺激后会激活细胞内的信号通道.公认地对RR的研究对抑制过度活跃的肾素-血管紧缩素-醛固酮系统提供重要的研究方略.(P)RR是一种分子量为39 k
细胞培养板的选择和使用问题集锦2
【操作步骤】1．加样品：将标本稀释液100ul（或2滴）加到包被板内（预留阴阳性及空白对照2－5孔），将待检血清用PBS或生理盐水按1：20稀释后取 10ul加入反应孔内。2．加对照：加入阴性对照1－3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。3．温育：将反应板震荡使样品混匀后，置3
借助于噬菌体ELISA的DNA/RNA...
实验概要本实验从含有源自文库筛选的噬菌体克隆制备了噬菌体上清液，通过噬菌体ELISA，评估筛选出DNA/RNA结合区域的特异性序列的结合活性。实验步骤1. 噬菌体的制备 1) 挑取含有源自文库筛选的噬菌体克隆的单菌落。用灭菌牙签挑取单菌落接种于灭菌圆底培养板的微孔内，其中加有150ul含15
借助于噬菌体ELISA的DNA/RNA结合活性的分析方法
实验概要本实验从含有源自文库筛选的噬菌体克隆制备了噬菌体上清液，通过噬菌体ELISA，评估筛选出DNA/RNA结合区域的特异性序列的结合活性。实验步骤1. 噬菌体的制备 1) 挑取含有源自文库筛选的噬菌体克隆的单菌落。用灭菌牙签挑取单菌落接种于灭菌圆底培养板的微孔内，其中加有150ul含15
PBS缓冲液的配方以及保存方式
PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)：0.27g磷酸氢二钠(Na2HPO4)：1.42g氯化钠(NaCl)：8g氯化钾(KCl)0.2g加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L。高温高压灭菌后室温保存。
pbs缓冲液的配制配方是什么
pbs缓冲液的配制配方是10X的PBS母液，然后再对其母液进行1:10稀释即可获得PBS缓冲液。PBS是磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer Saline），是生物学实验室最常用的缓冲液之一。其主要成分包括：氯化钠（NaCl）、氯化钾（KCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）和磷酸二氢钾（KH
MTT（四唑盐）比色法
MTT比色法 实验方法原理 活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝
人淀粉样蛋白－770（APP770）ELISA试剂盒使用说明
简介阿尔茨海默病（AD）是典型的老年性痴呆，脑组织内淀粉样蛋白β（Aβ）的累积是造成此病的主要原因，与此同时，患有AD的患者其累积的Aβ90%在脑血管壁上发现。众所周知，Aβ是由可分解出两种蛋白（β-和γ-分泌）的淀粉样前体蛋白（APP）产生的，累积在脑组织内的Aβ分子主要是由神经细胞内的APP表达
Western－blot实验需要准备什么试剂和耗材
1.1细胞①将细胞培养皿置于冰上，用冰冷得PBS洗涤细胞2次②吸出PBS，加入裂解液（碧云天P0013；1%TritonX-100；）a.融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶
免疫PCR技术
（一）材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备 免疫球蛋白（如IgG、IgM）的Fc片段上有糖基存在，因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。（1） 将纯化的抗体（IgM或IgG， 0.1~1.0ml）在标记缓冲液（0.1Mol/L NaAc，pH值5.5， 0.1M