流式胞内染色protocol
一、surface marker染色1、收获细胞，0.5-1x10e6/tube，用FACS Buffer 2ml洗涤一次，倾倒后滤纸吸干管口液体。2、加入预先配置好的你需要染的surface marker的抗体混合液（即CD3，CD4，CD8抗体mixture），充分混匀，室温下孵育20分钟。3、FACS Buffer 2 ml洗涤一次倾倒后滤纸吸干管口液体。二、Intracellular Staining的步骤1、加入Fix/permeabilizatioin Buffer（不同公司有各自的试剂，ebioscience或者BD，看你的抗体是那个公司的，但是操作流程大致相同）2、加入Fix/Perm Buffer 250ul 后，混匀，4度孵育30分钟（公司可能推荐1ml，我一直加250ul，绝对可行）或者室温15～20分钟3、用公司配套的Perm Wash Buffer 1x的2ml洗涤1-2次，本人一直洗一次节约试剂，也没......阅读全文
2014值得关注的技术：迷你的胞内探针
2013年末，《Nature Methods》杂志将年度技术授予了单细胞测序(single-cell sequencing)。同时，杂志还介绍了2014年值得关注的技术，包括CRISPR和基因组编辑、神经学工具、原位测序、单颗粒低温电子显微镜等。 追踪小的分子并干扰其活性对了解活细胞如
酶分子的胞内高效递送、催化和检测
Nature Communications:高内涵助力纳米材料新剂型研究--酶分子的胞内高效递送、催化和检测近日，中国科学院过程工程所(IPE)生化工程国家重点实验室生物剂型与生物材料课题组与清华大学(THU)及天津大学(TJU)合作，基于无定形金属有机框架开发出一种新剂型，可实现酶分子的细胞内高效
抗胞内菌免疫的基本内容介绍
对人类重要的兼性胞内菌有结核分枝杆菌、伤寒沙门氏菌、布鲁氏菌、嗜肺军团菌等，它们主要寄居在人体单核吞噬细胞中。专性胞内菌有引起斑疹伤寒、恙虫病的立克次体，引起Q热的柯克斯体，引起沙眼、性病淋巴肉芽肿的衣原体等。它们主要寄居在人体的血管内皮细胞和上皮细胞内，有时亦可在单核吞噬细胞内发现。 巨噬细
流式抗体（荧光抗体）细胞染色步骤与注意
染色缓冲液（BSA）的配制：PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱备用。准备单细胞悬液：淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。用冰染色缓冲液洗细胞2次，离心细胞，用冰染色缓冲液重悬细胞，使终浓度为2×107细胞/ml。各取50ul（106细胞）细胞悬液到2个圆底的Ep管中。根据
异钙调素结合在质膜胞外位点上并导致胞内钙离子水平...
异钙调素结合在质膜胞外位点上并导致胞内钙离子水平上升钙调蛋白（CaM）是一种高保守性的细胞内钙离子感应器。在植物中，胞外CaM也作为一个多肽信号影响许多生理功能，但是其在细胞质外的结合位点至今仍存在争议。2009年5月，中科院植物所林金星研究组在《JBC》上发表文章，研究人员利用CaM交联QD系统对
酿酒酵母胞内代谢通量调控机制方面获进展
细胞内的代谢通量受胞内基因表达、转录调控、蛋白修饰、别构效应等调控体系共同作用。然而，目前关于细胞内代谢通量的详细调控机制存在较多未知，例如代谢通量的变化到底在多大程度上依赖基因表达以及有多大程度通过酶活力调控。酿酒酵母的Crabtree效应是重要的代谢调控表型，但该表型下各种调控因子对胞内代谢
Cell－Rep：影响EBV胞内复制过程的关键基因
最近，来自VCU的研究者们鉴定出了两个与EBV（Epstein-Barr virus）复制有关的基因，该病毒的侵染会导致多种不同类型癌症的发生。这项发现有助于病毒相关疾病（包括胃癌以及淋巴瘤等）的新型疗法的开发。 EBV是一类最常见的人类病毒，几乎95%的成年人都携带EBV。根据美国健康组织的
大肠杆菌裂解液澄清，收获胞内表达蛋白
简介从大肠杆菌裂解液中分离细胞内表达的蛋白质。目的蛋白具有抗肿瘤潜力。工艺条件裂解液体积为245升。使用一根0.2 μm 的Krosflo® 组件进行批量分离，膜表面积为1.0m2 。流路见图1所示，料液的循环速率保持57L/min。先开始料液循环，然后缓慢打开滤液端口。不限制下游循环。起始处理
Cell－Rep：影响EBV胞内复制过程的关键基因
最近，来自VCU的研究者们鉴定出了两个与EBV（Epstein-Barr virus）复制有关的基因，该病毒的侵染会导致多种不同类型癌症的发生。这项发现有助于病毒相关疾病（包括胃癌以及淋巴瘤等）的新型疗法的开发。EBV是一类最常见的人类病毒，几乎95%的成年人都携带EBV。根据美国健康组织的报告，每
细胞内细胞因子染色步骤
1.样本准备：1） 收集细胞。经刺激和阻断处理的细胞（具体处理方案请参考文献进行），加细胞染色Buffer（或含0.1%BSA的PBS）制成单细胞悬液，调整细胞浓度约为1×107/ml。2） 取100μl细胞/管（约1×106细胞），分别加到做好标记的流式管底部。2.固定：1） 如需要表面染色，选用
RLGS－protocol
A. Preparation of DNA SolutionIn the case of rice, for example This method may be appllicable for many grass species and some other plants.
ELISA－protocol
ELISA protocol：1.取5－10ul BMMY表达上清用0.05M NaHCO3稀释到100ul铺ELISA板，37度或室温振荡大于1小时。注意一定要做一个GS115空菌株表达上清作为阴性对照，最好还找一个带有histag的蛋白作为阳性对照。2.TPBS洗板3次，方法：倒掉铺板液，倒置于
NAi－protocol
siRNA protocolsOur current strategy with siRNA is to synthesis relatively small amounts enzymatically and use these to test for efficiency by western
ELISPOT－Protocol
实验概要The Elispot (Enzyme Linked Immuno-Spot) assay provides an effective method of measuring the antibody or cytokine production of immune cells on t
PCR－protocol
PCR reactionProtocol for 50µl reaction - adjust amounts if necessary, for a 20µl reaction use the same volumes of primer and dNTP-mix, but adjust the
RNAi－protocol
siRNA protocolsOur current strategy with siRNA is to synthesis relatively small amounts enzymatically and use these to test for efficiency by western
Immunoprecipitation－Protocol
实验概要Immunoprecipitation is a procedure by which proteins or peptides that react specifically with an antibody are removed from solution and examined
ELISPOT－Protocol
实验概要The Elispot (Enzyme Linked Immuno-Spot) assay provides an effective method of measuring the antibody or cytokine production of immune cells on t
ELISPOT－protocol
实验概要The procedure below is a general guideline procedure for ELISPOT. Abcam ELISPOT kits have been designed for detection of various cytokines and g
Immunoblot－Protocol
This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives. Investigators must be aware that they will need to tailor
流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙浓度
血小板胞浆游离钙离子\[Ca2+\]i与血小板的许多形态与功能活动有关，如血小板形态的改变、聚集、收缩、释放、分泌等。也与血小板参与的凝血、血液流变性调节（如血液黏度、流动性等）以及动脉粥样硬化、脑血管疾病的发生和发展、血管内皮活动等生理、病理过程有关。研究发现\[1\]，当血小板内的\[Ca2+\
流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙浓度
流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙浓度庄明明，温奕欣，刘少列，洪晓鹏 西安交通大学学报2005年10月第26卷第5期摘要：目的建立流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙离子浓度\[Ca2+\]i的方法。方法 用Fluo3AM作为钙指示剂，在有或无细胞外钙\[Ca2+\]o存在的条件下，测定静息和凝血酶激活状
流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙浓度
流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙浓度庄明明，温奕欣，刘少列，洪晓鹏 西安交通大学学报2005年10月第26卷第5期摘要：目的建立流式细胞仪测定血小板胞浆游离钙离子浓度\[Ca2+\]i的方法。方法 用Fluo3AM作为钙指示剂，在有或无细胞外钙\[Ca2+\]o存在的条件下，测定静息和凝血酶激活状
流式细胞仪PI染色死细胞方法
PI 能够插入双链 DNA 中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ 、材料1、 PI （ e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA ）2、 缓冲体系： 1 × PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,I
流式细胞仪PI染色死细胞方法
PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ、材料1、 PI（e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA）2、 缓冲体系：1×PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240
流式细胞仪dapi染色软件怎么设置
这个取决于你所用仪器的设置这个图中，蓝色曲线是可以激活DAPI的波长（最强波长在359纳米），红色曲线是DAPI被激活后所发出的荧光的波长（最强在470纳米附近）。只要你所用仪器的激光和相应的PMT滤镜在这个范围，就可以检测。常见的配置是紫色激光， PMT前的滤镜450/50。和Pacific bl
新研究实现酶分子胞内高效递送、催化和检测
近日，中国科学院过程工程研究所与清华大学、天津大学合作，基于无定形金属有机框架开发出一种新剂型，可实现酶分子的细胞内高效递送和催化，在单细胞水平上实现细胞代谢产物的原位检测。该工作发表于《自然-通讯》（Nature Communications）。 纳微颗粒为生物剂型工程的发展做出了重要贡献。
科学家建立高效运载胞内蛋白质技术
5月16日，中国科学院上海生命科学研究院（人口健康领域）宋海云研究组与上海应用物理研究所樊春海组合作的研究论文Nanodiamonds Mediate Oral Delivery of Proteins for Stem Cell Activation and Intestinal Remode
科学家建立高效运载胞内蛋白质技术
5月16日，中国科学院上海生命科学研究院（人口健康领域）宋海云研究组与上海应用物理研究所樊春海组合作的研究论文Nanodiamonds Mediate Oral Delivery of Proteins for Stem Cell Activation and Intestinal Remode
胞内晶体蛋白基因的酿酒酵母真核表达
实验概要本实验将酿酒酵母作为胞内晶体蛋白的携带和表达宿主，同时，作为可能的营养体喂养海洋线虫P. redivivus将所表达的目的蛋白导入线虫机体，观察线虫的生长、发育、繁殖或是死亡情况，探讨胞内晶体蛋白对昆虫病原线虫以外的线虫是否具有营养作用。为此，首先构建一种重组大肠杆菌，其所携带的重组质粒能够