噬粒（phagemid）
Phagemid Related Protocol (Erik)provides procedures for phagemid lysate preparation, titering phagemid, determining uracil incorperation and SS DNA preparation Preparation of Single-stranded DNA (OGMP)This protocol is Optimized for preparing ssDNA from phagemid pBluescript propagated in E.coli host. Two method are described: triton Method and SDS Method. Large scale preparation o......阅读全文
噬粒（phagemid）
Phagemid Related Protocol (Erik)provides procedures for phagemid lysate preparation, titering phagemid, determining uracil incorperation and SS DNA pr
关于噬菌粒的简介
噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。它是包含了丝状噬菌体大间隔区域的质粒，是一种双链质粒，含噬菌体来源的复制子，在细菌的细胞中出现有辅助噬菌体的情况下，可被诱导成单链DNA噬菌粒，同时具有噬菌体和质粒的特征，可以像噬菌体或质粒一
筛选pⅧ噬菌粒库
实验概要大量的方法已经被设计用于筛选大规模的噬菌体肽库。其中最简单的形式就是使用直接吸附的方式将靶分子固定于一个固体支持物上，然后使其接触到噬菌体库。那些不能与之结合的噬菌体在一系列洗涤的过程中将会被除去，而可以结合的噬菌体克隆将在酸性洗脱后被重新获得。主要试剂1. 磷酸盐缓冲液2. PBS/0.1
关于噬菌粒的基本介绍
噬菌粒（phagemid）是带有丝状噬菌体复制起始点的质粒。 噬菌粒本身不含噬菌体蛋白编码基因，在导入大肠杆菌后不产生子代噬菌体，感染时要用辅助噬菌体，辅助噬菌体编码的噬菌体蛋白可将单链噬菌粒DNA 包装成噬菌体病毒颗粒释放出来，能再次感染大肠杆菌而繁殖。
关于噬菌粒的特征介绍
1、双链DNA既稳定又高产，具有常规质粒的特征； 2、免除了将外缘DNA片段从质粒亚克隆于噬菌体载体这一繁琐又费时的步骤； 3、由于载体足够小，故可得到长达10kb的外源DNA区段的单链。
pⅧ噬菌粒库的构建
实验概要本实验构建了pⅧ噬菌粒库，主要包括：载体的准备，插入片段的准备，连接插入片段与BstⅪ消化的p8V5载体及扩增与储存。主要试剂p8V5噬菌粒载体(AHymaxlnc)LB氨苄青霉素培养基(1％蛋白胨，0，5％酵母提取物， 0.5％ NaCl，100ug/m1氨苄青霉素)BstⅪ限制性内切酶(
噬菌体的扩增和定量实验
Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术，其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术，在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用，极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用，还能和传统的动物免疫技术相结合，与纳米抗体、
如何优雅的完成噬菌体的扩增和定量实验
Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术，其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术，在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用，极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用，还能和传统的动物免疫技术相结合，与纳米抗体、
用噬菌粒载体制备单链DNA
噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外，这些质粒通常是高拷贝数的，并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白，但含有全部的顺式作用序列，该作用是病毒 DNA 合成起始和结束及噬菌体颗粒的形态发生必不可少的。本实验来源「分子克隆实验指
用噬菌粒载体制备单链DNA
实验方法原理 噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外，这些质粒通常是高拷贝数的，并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白，但含有全部的顺式作用序列，该作用是病毒 DNA 合成起始和结束及噬菌体颗粒的形态发生必不可少的。实验材料
用噬菌粒载体制备单链DNA
实验方法原理 噬菌粒巧妙地组合了质粒和丝状噬菌体的特征。除了基本特征外，这些质粒通常是高拷贝数的，并带有一个修饰后的丝状噬菌体的主要基因间区。这个区域 ( 野生型为 508 bp)不表达蛋白，但含有全部的顺式作用序列，该作用是病毒 DNA
分子克隆常用载体（质粒、单链丝状噬菌体和噬粒）
DNA 片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获
分子克隆常用载体
分子克隆常用载体 DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用
分子克隆的常用载体
DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆
分子克隆的常用载体介绍
DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆
DNA测序技术（非同位素银染测序系统操作技术与T7－DNA...2
（1）过夜培养的宿主细胞(如NM522或JM101)用3ml TYP肉汁培养基以1:100稀释。在37℃强烈震荡1小时之后，细胞进入对数早期。此时，将一个合适的含有重组M13的噬菌斑(连同琼脂)用滴管转入该细胞培养液中。（2）37℃强烈震荡(300rpm) 培养6小时。（3）把细胞培养液转入两只1.
自噬的自噬发生过程
在此过程中，自噬体的形成是关键，其直径一般为 300 ~ 900 nm，平均 500 nm，囊泡内常见的包含物有胞质成分和某些细胞器如线粒体、内吞体、过氧化物酶体等。与其他细胞器相比，自噬体的半衰期很短，只有 8 min 左右，说明自噬是细胞对于环境变化的有效反应。由于自体吞噬较少受到关注,而且很难
自噬性死亡的自噬机制
细胞为维持正常新陈代谢，其生长过程始终都有自噬现象，这已在形态学中得到证实。但自噬的消长受多种因素影响，营养缺乏、胰高血糖素可诱导自噬，胰岛素抑制自噬，细胞肿胀也同胰岛素一样有抑制自噬的作用，它们的作用点在于改变氨基酸的浓度。当氨基酸浓度降低时，自噬启动可产生氨基酸，保证器官成活；相反则自噬被抑制。
自噬体的自噬发生条件
自噬体（autophgosome）自噬溶酶体（autolysosome）当自噬体与溶酶体融合后，形成自噬溶酶体。自噬性溶酶体是一种自体吞噬泡, 作用底物是内源性的,即细胞内的蜕变、破损的某些细胞器或局部细胞质。这种溶酶体广泛存在于正常的细胞内，在细胞内起“清道夫”作用，作为细胞内细胞器和其它结构自然
自噬的自噬的研究方法
正常培养的细胞自噬活性很低，不适于观察，因此，必须对自噬进行人工干预和调节，经报道的工具药有：（一）自噬诱导剂1）Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin ：模拟内质网应激2）Carbamazepine/ L-690，330/ Lithium Chloride
自噬分类
根据细胞物质运到溶酶体内的途径不同，自噬分为以下几种。①大自噬：由内质网来源的膜包绕待降解物形成自噬体，然后与溶酶体融合并降解其内容物；②小自噬：溶酶体的膜直接包裹长寿命蛋白等，并在溶酶体内降解；③分子伴侣介导的自噬（CMA）：胞质内蛋白结合到分子伴侣后被转运到溶酶体腔中，然后被溶酶体酶消化。CMA
Autophagy（自噬）
自噬是近年来很热门的领域，搜了一下园子，发现没有这方面系统的介绍或讨论，但很多战友有这方面的疑问，加上本人最近对此也非常感兴趣，因此，借本版来专门讨论一下自噬（说实在的，自噬属于丁香园哪一个版块的范围我也选不好），与各位同行或有志于研究自噬的战友共同学习，也欢迎大家提出自己的看法，本人的目的就是交流
Autophagy（自噬）
自噬是近年来很热门的领域，搜了一下园子，发现没有这方面系统的介绍或讨论，但很多战友有这方面的疑问，加上本人最近对此也非常感兴趣，因此，借本版来专门讨论一下自噬（说实在的，自噬属于丁香园哪一个版块的范围我也选不好），与各位同行或有志于研究自噬的战友共同学习，也欢迎大家提出自己的看法，本人的目的就是交流
关于细胞自噬的自噬形式的介绍
细胞自噬主要有三种形式：微自噬（microautophagy)、巨自噬（macroautophagy）和 分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy，CMA）。 微自噬 定义 ：指 溶酶体或者液泡内膜直接内陷底物包裹并降解的过程。 作用时间：多在种子成熟
粘粒
Preparation of Cosmid DNAPreparation of Cosmid DNA from 50 ml Cultures (Donis Keller Lab)Cosmid vectors containing foreign DNA inserts are known to re
粘粒
Preparation of Cosmid DNAPreparation of Cosmid DNA from 50 ml Cultures (Donis Keller Lab)Cosmid vectors containing foreign DNA inserts are known to re
细胞自噬过程
a、吞噬泡噬过程存在于膜的形态变化，体现了膜的流动性特点，a正确；b、线粒体是有氧呼吸的场所，氧气在线粒体中被消耗，线粒体功能退化，氧气的消耗量减少，b正确；c、细胞及时清除受损的线粒体，维持了细胞内部环境的相对稳定，c正确；d、当细胞养分不足时，细胞“自噬作用”一般都会增强，为细胞提供更多的养分，
什么是自噬？
自噬是溶酶体吞噬细胞器和其他内容物以清除不必要或功能失调的成分的过程。该关键机制允许细胞材料的系统降解和回收。它可以依据不同的环境促进细胞存活或细胞死亡。
细胞自噬过程
细胞自噬(autophagy)是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后，送入溶酶体(动物）或液泡（酵母和植物 ）中进行降解并得以循环利用。
细胞自噬工具
就像我们会打扫以保持房间整洁一样，细胞也演化出了一系列“清洁”机制，来维持有序的生命活动。自噬（autophage）就是其中最重要的机制之一。自噬于上个世纪60年代被发现，但引起科学界的广泛关注，还是在1990年代日本科学家大隅良典（Yoshinori Ohsumi）做的相关研究。大隅良典也因此获得