异源表达经验谈(1)

异源蛋白的表达是个很复杂的问题,有许许多多的影响因素,而且由于蛋白本身千差万别,很难有一个很完善或很标准的流程方法。另外,表达的宿主也是多种多样,目前比较常用的包括E.coli,酵母(以甲醇酵母居多),昆虫细胞,哺乳动物细胞等,各自有着其本身的特点,优缺点各异。1. 宿主的选择。表达宿主虽众多,但比较常用的也就E.coli,酵母(以甲醇酵母居多),昆虫细胞,哺乳动物细胞等,各自代表了一种体系。 E.coli 原核宿主,无翻译后修饰。但周期短、费用低、表达量大,一直是最常用的宿主之一。蛋白一般很好表达,量很大,但很可能由于蛋白的翻译后修饰不完善而没有活性(或形成包涵体),尤其是表达真核蛋白时最应注意。酵母,有了比较完备的翻译后修饰系统,尤其是糖基化。但是个人感觉酵母表达异源蛋白时对蛋白本身的特点要求很大,有的蛋白表达量非常大,有的却几乎一点也没有,很折磨人。昆虫细胞和动物细胞本人没有做过,但园子里也有很详细的介绍,搜一下......阅读全文

异源表达经验谈(1)

异源蛋白的表达是个很复杂的问题,有许许多多的影响因素,而且由于蛋白本身千差万别,很难有一个很完善或很标准的流程方法。另外,表达的宿主也是多种多样,目前比较常用的包括E.coli,酵母(以甲醇酵母居多),昆虫细胞,哺乳动物细胞等,各自有着其本身的特点,优缺点各异。1. 宿主的选择。表达宿主虽众多,但比

异源表达经验谈(3)

4. 菌种的保存、退化一般来说是加甘油20%左右,-70保存;或制成干粉保存。但是在做甲醇酵母时发现了个问题,就是重组工程菌的退化现象比较严重,一般都是学生做得好好的,但是毕业以后下面的师弟一接手,蛋白就不表达了,或表达量非常的低。连续好几个师兄的结果都是如此,很是奇怪。我猜测可能是由于整合入基因组

异源表达经验谈(2)

2. 转化子、表达子的筛选转化子的筛选,由于许多质粒是穿梭质粒,因此大多具有E.coli中的抗性筛选标记,筛选起来是很方便的(当然,我不清楚细胞方面的筛选,一般使用病毒载体吧,希望高手们介绍一下)。但是转化成功的并不意味着能够成功表达目的蛋白了,因此还需要“表达子”的筛选,尤其是整合入基因组的片断(

异源蛋白表达的基本介绍

  随着人类基因组计划的完成,蛋白表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。越来越多的基因被发现,其中多数基因功能不明,利用蛋白表达系统表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。根据不同的表达要求,如表达量高低、目标蛋白的活性和表达产物的纯化方法,可选用适当的表达系统及相应的表达策略。

异源蛋白表达的处理和修饰

  真核mRNA在离开细胞核进而在胞浆的核糖体上被翻译前需要特异的处理和修饰。这些过程包括去除内含子、5'端甲基化帽子形成和3'端加poly-A。内含子去除需要5'剪切位点、G75/G100U100A65AG65U保守序列、3'剪切位点、富含密啶NC66A100G10

关于异源蛋白表达的分类介绍

  蛋白表达是现代工业、医疗和基础研究领域的重要组成部分,也是当前生物技术的难点和热点,重组蛋白表达的系统主要分为:  1、原核蛋白表达系统  以大肠杆菌表达系统为代表,具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点,缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制,如二硫键的形成、蛋白糖基化

酵母表达外源蛋白(foreign-protein)(1)

1、 菌株用GS115表达不出蛋白,换KM71H后,大部分克隆能表达。2、温度: 在28度和室温下诱导表达,表达水平可能都不低。3、pH手册上用6.0,pH提高到6.8,不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA,最适pH大概 5-6左右。pH3的时候

密码子的应用提高基因的异源表达

可通过分析密码子使用模式,预测目的基因的最佳宿主;或者应用基因工程手段,为目的基因表达提供最优的密码子使用模式。3种不同的方式,目的都是利用密码子偏爱性来提高异源基因的表达。

异源蛋白表达的密码子偏爱性介绍

  原核细胞表达真核基因的cDNA时,会涉及到密码子的偏爱性,真核细胞在表达原核来源的基因、真核基因的cDNA拷贝或其他无内含子的基因时可能表现很多特异问题。富含AT的基因在很多真核细胞中表达时会遭遇很剧烈的障碍。主要的真核信号序列如 加poly-A的位点、酵母转录终止位点和真核mRNA去稳定序列都

简述密码子提高基因的异源表达的作用

  可通过分析密码子使用模式,预测目的基因的最佳宿主;或者应用基因工程手段,为目的基因表达提供最优的密码子使用模式。3种不同的方式,目的都是利用密码子偏爱性来提高异源基因的表达。

异源异倍体的概念

中文名称异源异倍体英文名称alloheteroploid定  义染色体来自不同染色体组的异倍体。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)

异源异倍性的概念

中文名称异源异倍性英文名称alloheteroploidy定  义由非同源染色体形成的异倍性。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞遗传(二级学科)

DNA重组(DNA-recombination)技术:外源基因的蛋白表达1

通过外源DNA的重组、克隆、以及鉴定,可以获得所需的特异DNA克隆。外源克隆基因在某种表达载体及适宜的宿主细胞中可表达为相应的蛋白质,这就组成了外源基因的蛋白表达系统。表达后的蛋白质必须具有原来的生物学活性,这是基于正确的基因转录、转录后加工、mRNA翻译及翻译后修饰,同时与表达载体的结构和表达体系

异源基因的概念

中文名称异源基因英文名称heterologous gene定  义来自不同物种的、在进化过程中不源于共同祖先的基因。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

原核生物大肠杆菌异源表达一定要切除信号肽吗

一般要进行切除。假如你将那个来自原核的酶(包括信号肽序列)插入表达载体后,表达产物的信号肽也很难将酶分泌出来,这里涉及到的问题很多,首先能否可溶性表达,其次信号肽能否在宿主菌中能起作用(不同种类的细菌,信号肽有差异),信号肽能否被信号肽酶切除,很多情况下信号肽即使能起作用,一般也只能将表达产物分泌至

外源基因的诱导表达

1.目的了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。2.原理外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长,lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG(异丙基硫代-b-D-半乳糖),解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-

异源多元单倍体的概念

中文名称异源多元单倍体英文名称allopolyhaploid定  义细胞染色体来自异源多倍体的不同染色体组的一类多元单倍体。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)

什么是异源诱导者?

能诱导原肠胚外胚层形成一定的结构,并具有区域性诱导效应的组织称为异源诱导者(heterogeneous inductor)。它们虽不是组织者,却具有与组织者相当的形态发生效应,而且无种的特异性。它们包括许多成体和幼体的多种组织,广泛存在于动物界,甚至某些有机和无机化合物。最初发现成体组织对两栖类原肠

异源翻译系统的定义

中文名称异源翻译系统英文名称heterologous translational system定  义将基因或信使核糖核酸(mRNA)转移到非自身的宿主表达系统中进行蛋白质的翻译合成,该宿主表达系统即为异源翻译系统。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

细胞化学词汇异源基因

中文名称:异源基因英文名称:heterologous gene定  义:来自不同物种的、在进化过程中不源于共同祖先的基因。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

异源倍性的概念

中文名称异源倍性英文名称alloploidy定  义由非同源染色体形成的倍性变化。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)

异源倍性的概念

中文名称异源倍性英文名称alloploidy定  义由非同源染色体形成的倍性变化。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)

异源抗血清的定义

中文名称异源抗血清英文名称heterologous antiserum定  义来源于异种动物(如马对人),含特异性抗体的血清。应用学科免疫学(一级学科),免疫病理、临床免疫(二级学科),感染免疫(三级学科)

异源抗血清的定义

中文名称异源抗血清英文名称heterologous antiserum定  义来源于异种动物(如马对人),含特异性抗体的血清。应用学科免疫学(一级学科),免疫病理、临床免疫(二级学科),感染免疫(三级学科)

异源倍性的概念

中文名称异源倍性英文名称alloploidy定  义由非同源染色体形成的倍性变化。应用学科遗传学(一级学科),细胞遗传学(二级学科)

异源双链的概念

中文名称异源双链英文名称heteroduplex定  义(1)两种不同来源的单链DNA分子杂交而成的DNA双链,是碱基没有完全互补的DNA双链。(2)DNA与RNA杂交形成的双链。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

异源多倍性的概念

异源多倍性(allopolyploidy)指不同种的染色体组组合在一起而产生的染色体倍数的变异(H.Kihara,T.Ono,1926)。根据组成核型的染色体组的数目又可分别称为异源三倍体、异源四倍体、异源…倍体等(allotriploid,allote- traploid,sllo…ploid),

异源双链作图的定义

中文名称异源双链作图英文名称heteroduplex mapping定  义不同来源的双链DNA分子的单链间进行杂交,绘制出同源区和非同源区的遗传图。应用学科遗传学(一级学科),基因组学(二级学科)

异源载体疫苗的功能特点

中文名称异源载体疫苗英文名称heterologous carrier vaccine定  义一种新型疫苗。即将疫苗附着在大分子载体上,以增强其免疫原性。所用载体一般是具有免疫原性的大分子蛋白质或减毒的活病毒、细菌。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)

异源嵌合体的特点

嵌合成分来自不同的受精卵所产生的嵌合体。和同源嵌合体一样,嵌合成分可以包含不同的染色体或不同的基因。少数异源嵌合体是天然的,例如蜜蜂的雌雄嵌合体由一个二倍体受精卵(一般发育成为雌体)和一个未受精的单倍体极核(一般发育成为雄体)并合后发育而成,桑蚕中的雌雄嵌合体则是由一个受精卵和一个受精的极体并合后发