用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA
放射性标记DNA探针的制备l 聚丙烯酰胺凝胶的制备1．按照（三）中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小，200bp左右的片段需要4～5％的凝胶，小于100bp的片段应灌制6～8％的凝胶。 l DNA的标记1．用两种限制性内切酶从10μg质粒上将待测DNA片段切下。注意务必使至少一种酶酶切后产生5’凸出末端。酶切体系终体积50μl，在适宜的酶反应缓冲液条件下反应1小时。2．向酶切反应混合液中加入[α－32P]dATP（约10μCi/μl）(若5’凸末端含T残基) ......阅读全文
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验DNA亲和介质制备
实验材料两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多核苷酸激酶（New Eng
常用的分子生物学基本技术（一）
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的
常用的分子生物学基本技术（二）
载体 所谓载体是指携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。细菌质粒 是一种细菌染色体外小型双链环状结构的DNA，分子大小为1-20kb，对细菌的某些代谢活动和抗药性表型具有一定的作用。质粒载体是在天然质粒的基础上人工改造拼接而成。最常用的质粒是pBR322。噬菌体（phaeg） 噬菌体是感
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍（一）
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的
DNA探针的功能特性
DNA探针是以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板,人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DNA片段,可用来快速检测病原体。DNA探针将一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针。可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合,经放射自显影或其他检测手段就可以
关于DNA探针的基本内容介绍
DNA探针是以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板，人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DNA片段，可用来快速检测病原体。DNA探针将一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针。可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合，经放射自显影或其他检测手段就可以
DNA结合蛋白测定实验
本实验主要用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白。实验方法原理本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时，与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移，因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。实验材料质粒DNA试剂、
DNA结合蛋白测定实验
实验方法原理 本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时，与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移，因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。
DNA结合蛋白测定实验
实验材料 质粒DNA试剂、试剂盒 dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙锭TEMED过硫酸铵BSA仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 用一种或多种限制性内切酶在100 μl 体积中消化10 μg 质粒人，产生25~100 bp 的含有结合位点的DNA片段，并至少有一端是5’突出的
什么是DNA结合蛋白？
中文名DNA结合蛋白外文名DNA binding protein别 名螺旋失稳蛋白形 成解链酶类中的一种类型结合效应DBP与单链DNA的结合作 用该单链DNA结合和识别作用
结合DNA的蛋白质
结构蛋白可与DNA结合，是非专一性DNA-蛋白质交互作用的常见例子。染色体中的结构蛋白与DNA组合成复合物，使DNA组织成紧密结实的染色质构造。对真核生物来说，染色质是由脱DNA与一种称为组织蛋白的小型碱性蛋白质所组合而成；而原核生物体内的此种结构，则掺杂了多种类型的蛋白质。DNA可在组织蛋白的表面
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍！
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍！ 核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍！
核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成
基因分离克隆的方法
1 基因芯片技术分离目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介质上的生物信息分子的微列阵。列阵中每个分子的序列及位置都是已知的，并按预先设定好的顺序点阵。基因芯片是生物芯片的一种，其上固定的是核算类物质，主要用于DNA、RNA分析。分为DNA芯片和微点阵两种。分离目的基因是是指从基因组中发现或找出某个
常用的分子生物学基本技术
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的
RACE的原理、应用和优缺点（二）
三、RACE 的应用 RACE技术主要是应用于对全长cDNA序列的获得，但对该技术进行一定的修改后，也可在其它方面显示出极高的应用价值。 首先，RACE技术可用于cDNA文库的构建及筛选。Belyavaasky等(1989)用10个骨髓瘤细胞分离的总RNA，通过TdT加同聚尾、(dT)
PCR技术（十七）：用PCR扩增cDNA库中的特异序列
最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时．费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋 白质序列结构的资料。聚合酶链的反应（PCR）方法可使一种特异DNA扩增
用PCR扩增cDNA库中的特异序列
最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时．费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋 白质序列结构的资料。聚合酶链的反应（PCR）方法可使一种特
PCR扩增CDNA库中的特异序列策略
最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时．费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋 白质序列结构的资料。聚合酶链的反应（PCR）方法可使一种特异D
cDNA文库的构建和筛选
材料许多生物是疾病研究或探索使细胞和机体应对和存活于不同刺激下的分子适应机制的优良模型。 cDNA 文库的构建和随后目的基因的筛选可促使研究者发现在调节和响应某些外部特定环境压力中有重要作用，而在其他体系中可能不表达或者不存在的新基因。确定这些新基因的可读框，进一步分析其编码蛋白质的功能可以开创全新
用顺序浮选法快速分离血清脂蛋白
用超速离心机分离血清脂蛋白，常用顺序浮选法（Sequence floating）和单次垂直管分离法(SVS),各种转速和容量都可以做，下面介绍一种简单、快捷的微量固定角式转头分离法，结果可供研究与临床分析。 一）设备：● 日立CS150GXL 制备型微量超速离心机● 转头：S140AT 固定角式转头
分子生物学的研究方法有哪些
分子生物学（molecular biology ）：从分子水平上研究生命现象物质基础的学科。研究细胞成分的物理、化学的性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系，如遗传信息的传递，基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能，以及细胞信号的转导等。分子生物学中最基本的技术是蛋白质的表
分子生物学的研究方法有哪些
分子生物学（molecular biology ）：从分子水平上研究生命现象物质基础的学科。研究细胞成分的物理、化学的性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系，如遗传信息的传递，基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能，以及细胞信号的转导等。分子生物学中最基本的技术是蛋白质的表
原位PCR技术
除了经典的原位杂交外。原位杂交可与其他组织化学技术相结合，或与其他分子生物学技术相结合，使其应用范围扩大，成为更有应用价值的技术。PCR技术是根据生物体内DNA复制的特点而建立的在体外经酶促反应将特定DNA序列进行高效和快速扩增的技术，它可将单一拷贝或低拷贝的待测核酸以指数形式扩增而达到用常规方法可
LexA酵母双杂交系统的设计原理
LexA酵母双杂交系统的设计原理 报告质粒p8op-LacZ的GAL4 UAS编码序列被完全去除，因此在缺乏LexA融合激活剂的情况下，报告基因LacZ的转录活性为零，该基因的筛选标志为URA3，可以作为有自主复制能力的质粒存在于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因组DNA上。质粒p
甲基化干扰法鉴定与蛋白结合的DNA位点
放射性标记DNA探针的制备l 聚丙烯酰胺凝胶的制备1．按照（三）中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小，200bp左右的片段需要4～5％的凝胶，小于100bp的片段应灌制6～8％的凝胶。 l DN
细胞因子的检测方法介绍
细胞因子生物学活性检测和浓度测定方法主要有以下几类一.生物学检测法生物学检测又称生物活性检测，是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。由于各种细胞因子具有不同的活性，例如IL-2促进淋巴细胞增殖，TNF杀伤肿瘤细胞，CSFci 激造血细胞集落形成，IFN保护细胞免受病毒攻击，因此选择某一细胞因子
基因工程操作技术及原理之基因克隆
1．克隆已知序列的基因根据已知基因的序列设计引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同种属之间，基因编码区序列的同源性高于非编码区的序列。在某种植物的同源基因被克隆的条件下，可先构建eDNA文库或基因组文库，然后以该基因(或部分序列)为探针来筛选目的基因的克隆。2．功能克隆根据基因的产物
基因工程操作技术及原理之基因克隆
1．克隆已知序列的基因 根据已知基因的序列设计引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同种属之间，基因编码区序列的同源性高于非编码区的序列。在某种植物的同源基因被克隆的条件下，可先构建eDNA文库或基因组文库，然后以该基因(或部分序列)为探针来筛选目的基因的克隆。 2．功能克隆 根据基