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选择3~5轮后，随机挑取克隆加入96孔微量滴定板中 并诱导表达可溶性scFv.然后，在包被有相关抗原的96孔微量滴定板中，用ELISA分析含有可溶性scFv的细菌上清。此过程可以识别出那些结合了抗原的scFv.但即便采用上述严谨性选择后，ELISA阳性克隆中仅有部分克隆的亲和力比野生型高。ELISA信号强度不能很好地显示哪个克隆具有较低的Ka值，而且更为普 遍的是它与scFv表达水平相关。因此，这就需要一种筛选ELISA阳性克隆的技术，能识别出具有较低Ka值的克隆。竞争性或抑制性ELISA就是这样的技术。或者可以利用以下事实：koff降低一般是导致高亲和力提高的主要动力学机制，因此通过测定解离速率就可以识别出那些亲和力得到提高的抗体。因为κoff是非浓度依赖的（不同于kon,），所以无需纯化抗体片段就能测定κoff，比如采用类似BIAcore的仪器进行SRP分析。我们已发现这是鉴别高亲和力scPv的一项很有用的技术，......阅读全文
进行抗体开发和研究，不管是完整的单克隆抗体分子还是Fab、scFv，我们需要了解抗体分子的表达量、亲和力、反应动力学（特别是解离速率koff）以及抗体的其它特性如亚型、特异性等等。使用传统的ELISA方法筛选抗体，通常只能先看哪些克隆有表达，然后把表达水平较高的克隆挑出来进一步研究。这种方法筛选抗体