用突变的VlCDR3构建SCFv基因文库
实验概要本实验用突变的VlCDR3构建了SCFv基因文库。主要试剂1. 去离子水(Millipore)2. VentDNA聚合酶和缓冲液(NEB)3. 20XdNTP(每种浓度5mmol/L)(NEB)4. 琼脂糖胶盒5. Geneclean试剂盒(QbiOgene)6. 含有起始scFv基因的质粒DNA7. LMB3引物(5’-CAG GAA ACA GCT ATG AC-3’)，10pmol/ul8. VLFOR随机引物，10pmol/ul主要设备PCR热循环仪实验步骤1．设计合成含有CDR3随机化序列的VLFOR引物。当然，此引物必须以拟进行亲和力成熟的抗体VL基因作为基础进行设计。本实验中，VLCDR3的7个氨基酸被随机化。在每个随机化位点中，保留了大约50％野生型氨基酸。引物设计结果如下：VLFOR随机引物：5’-CCC TCC GCC GAA CAC CCA ACC 524 513 524 524 542 541 5......阅读全文
筛选解离速率优化的scFv
选择3~5轮后，随机挑取克隆加入96孔微量滴定板中 并诱导表达可溶性scFv.然后，在包被有相关抗原的96孔微量滴定板中，用ELISA分析含有可溶性scFv的细菌上清。此过程可以识别出那些结合了抗原的scFv.但即便采用上述严谨性选择后，ELISA阳性克隆中仅有部分克隆的亲和力比野生型高。ELISA
筛选解离速率优化的scFv
选择3~5轮后，随机挑取克隆加入96孔微量滴定板中 并诱导表达可溶性scFv.然后，在包被有相关抗原的96孔微量滴定板中，用ELISA分析含有可溶性scFv的细菌上清。此过程可以识别出那些结合了抗原的scFv.但即便采用上述严谨性选择后，ELISA阳性克隆中仅有部分克隆的亲和力比野生型高。ELI
筛选解离速率优化的单链抗体（scFv）
选择3~5轮后，随机挑取克隆加入96孔微量滴定板中 并诱导表达可溶性scFv.然后，在包被有相关抗原的96孔微量滴定板中，用ELISA分析含有可溶性scFv的细菌上清。此过程可以识别出那些结合了抗原的scFv.但即便采用上述严谨性选择后，ELISA阳性克隆中仅有部分克隆的亲和力比野生型高。ELI
用突变的VlCDR3构建SCFv基因文库
实验概要本实验用突变的VlCDR3构建了SCFv基因文库。主要试剂1. 去离子水(Millipore)2. VentDNA聚合酶和缓冲液(NEB)3. 20XdNTP(每种浓度5mmol/L)(NEB)4. 琼脂糖胶盒5. Geneclean试剂盒(QbiOgene)6. 含有起始scFv基因的质粒
在微量滴定板中进行可溶性SCFv－ElISA
在微量滴定板中进行可溶性SCFv ElISA [器材和试剂] ● 9E10单抗(SantaCruzBiotech) ● ● ／0．1％Tween 20(／Tween) ● 4％M ● 抗小鼠HRP标记抗体(例如Sigma目录号A2554)
可溶性SCFv在微量滴定板中的ElIS...
实验概要本实验首先在微量滴定板中表达可溶性SCFv，然后取上清液进行ElISA实验。主要试剂1. 含100ug/ml氨苄青霉素和0.1％葡萄糖的2XTY培养基(2 ×TY/amp/0.1％glu)2. 含100ug/ml氨苄青霉素和3mmol/L IPTG的2XTY培养基(2×TY/amp/glu/
可溶性SCFv在微量滴定板中的ElISA实验
实验概要本实验首先在微量滴定板中表达可溶性SCFv，然后取上清液进行ElISA实验。主要试剂1. 含100ug/ml氨苄青霉素和0.1％葡萄糖的2XTY培养基(2 ×TY/amp/0.1％glu)2. 含100ug/ml氨苄青霉素和3mmol/L IPTG的2XTY培养基(2×TY/amp/glu/
PCR剪接VHCDR3基因文库和VL基因构建scFv基因文库
[器材和试剂]Winard PCR纯化试剂盒 （Promega）PCR试剂和设备用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备 FDSEQ引物扩增的VHCDR3基因文库和VL基因，[方法]1. 配制4个25ulPCR反应液，包含：去离子水，10.25ul1
PCR剪接VHCDR3基因文库和VL基因构建scFv基因文库
[器材和试剂]Winard PCR纯化试剂盒 （Promega）PCR试剂和设备用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备 FDSEQ引物扩增的VHCDR3基因文库和VL基因，[方法]1. 配制4个25ulPCR反应液，包含：去离子水，10.25ul1
靶向FGFR3胞外区域的人scFv抗体的筛选和活性研究（二）
噬菌体ELISA使用0.3ug的FGFR3，FGFR1或者人IgG蛋白包被微孔板，洗涤，封闭，加入不同浓度前面筛选纯化后的噬菌体悬浮液。孵育后，加入HRP-抗M13抗体，加入底物显色，450nm读取结果。 单克隆噬菌体ELISA经过两轮或三轮的筛选后收获的噬菌体经过培养生长出克隆，然后使用QPix高
靶向FGFR3胞外区域的人scFv抗体的筛选和活性研究（三）
scFv抗体对RT112细胞表达的FGFR3的活性：使用FACS检测了scFvs和膀胱癌RT112细胞表达的天然FGFR3蛋白的结合活性。如图3A所以，首先检测了6个scFvs噬菌体克隆，6个克隆都可以和膀胱癌RT112细胞发生显著的反应。然后，检测纯化后的4个scFvs蛋白(3B，3C，2D，7D
靶向FGFR3胞外区域的人scFv抗体的筛选和活性研究（一）
成纤维细胞生长因子(FGF)是最大的一类中胚层和上皮细胞生长分化多肽因子家族。FGFs在许多生物学过程中发挥重要作用，比如胚胎发育，伤口愈合，血细胞生成及血管发生等。此外，已有研究表明FGFs可以增加多种肿瘤细胞的浸润性，如前列腺、膀胱、肾脏、乳房、胰腺等部位肿瘤。目前，共发现20多种FGFs，对不
一种关于治疗手足口病的双特异性抗体的研究
手足口病（HFMD）是由肠道病毒引起的疾病，引发手足口病的肠道病毒有20多种，其中肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16（CA16）是手足口病的主要致病因子，可导致严重的中枢神经系统并发症。最近针对EV71病毒感染的疫苗和抗体的开发取得了突破性的进展，然而，针对EV71和CA16同时感染的
33肽标签提高大肠杆菌表达单链抗体溶解度和稳定性
单链抗体（single chain variable fragment，scFv）由抗体的重链和轻链可变区通过一段柔性多肽连接而成。scFv分子量仅约30 kDa，具有较高的组织穿透能力，在体内比抗体更快被清除。scFv可避免由Fc区介导的免疫反应。这些特征使scFv更适合应用在体内影像诊断、肿
构建人VH基因节段文库
构建人VH基因节段文库[器材和试剂]● PCR试剂和设备● 自pHENl中天然scFv文库制备的scFv基因文库模板DNA（单链和双链DNA 10ng/ul）● Genecle&n试剂盒（Qbiogene）● PVH3FoR1引物： 5'-TCG CGC GCA GTA ATA CAC GG
动态监控果蝇翻译过程，揭示空间异质性
mRNA翻译成蛋白质的过程涉及到的因子已经有大量的研究，但是在活的多细胞生物体中多步骤的翻译过程是如何进行的还未可知。为了回答该问题，法国蒙彼利埃大学Mounia Lagha研究组与Jeremy Dufourt（第一作者）合作在Science发文，题为Imaging translation dy
惊！CART竟可以逆转TGFβ免疫抑制作用
以往的CART都是识别结合表达于肿瘤细胞表面的抗原，此次整理分享的文章，作者设计了识别可溶性抗原的CART细胞，并对CART激活过程中CAR在结构层面的变化进行了研究，具体内容如下： 可溶性的CD19能激活CD19 CART细胞（CD69表达上调、细胞因子生成增多） 电泳发现CD19以单体和
CART逆转TGFβ免疫抑制作用
以往的CART都是识别结合表达于肿瘤细胞表面的抗原，此次整理分享的文章，作者设计了识别可溶性抗原的CART细胞，并对CART激活过程中CAR在结构层面的变化进行了研究，具体内容如下： 可溶性的CD19能激活CD19 CART细胞（CD69表达上调、细胞因子生成增多） 电泳发现CD19以单体和
用PCR识别不同的噬菌体抗体克隆
。不过，也可以先用PCR筛选方法估计所出现的不同克隆的数目。使用位于scFv基因旁侧的引物，直接从包含了噬菌粒的细菌克隆中扩增scFv。然后，用能多次切割V基因的限制性酶（如BstNI）消化PCR产物。尽管这对于来自非免疫文库的scFv很有效，但对于多样性受到更多限制的抗体文库效果较差。这是因为这些
流式检测CAR，无需再考虑抗原特异性！
Cell Signaling Technology (CST)开发了一组识别广泛 CAR的检测试剂：抗 CAR Linker 的抗体。它可以整合到多参数流式检测实验中，用于监测临床前模型中 CAR 的表达、转运和持久性。 CAR-T 细胞疗法（Chimeric Antigen Receptor
OpenSPR助力乙型肝炎疫苗接种方案的研究
乙型肝炎病毒（HBV）每年导致全球超过80万人死亡。在亚洲和撒哈拉以南非洲等许多发展中地区，它仍是一个威胁全球健康的因素。HBV倾向于在人肝细胞中显现和复制，并且主要从母亲到后代进行垂直传播。此外，暴露于受感染的体液（即共用针头，与感染者性交）也会导致传播。HBV属于Hepadnaviridae病毒
immunity：抗原交叉呈递分子机制新发现
"交叉呈递"是免疫学中一个重要的概念。受到抗原刺激的抗原呈递细胞（Antigen Presenting Cell, APC），主要是树突状细胞（Dendritic cell, DC）能够将抗原物质分解，然后与MHC分子进行装配，最后将该抗原-MHC复合体表达于细胞表面。特定的抗原-MHC复合体
盘点CART实验十大雷区（一）
话说肿瘤医院的熊主任自从看到陈博上期的《CAR-T实体瘤靶点英雄谱：夜空中最闪亮的星》 之后，鸡血满满，奋发图强要做CAR-T实体瘤研究！派出得力干将汪博士！选择靶标！设计载体！体外验证！体内实验！过伦理！上临床！出任院长！迎娶白富美！走上人生巅峰！然而，半年过去了，熊主任内牛满面抱着陈博大腿哭诉：
再扩增VH基因文库添加3‘限制性位点并克隆创建VH基因节...
再扩增VH基因文库添加3‘限制性位点并克隆创建VH基因节段文库[器材和试剂]● PCR试剂和设备● Wlzard PCR纯化试剂盒（Promega）● PVHlOR2引物： 5'-GAG TCA TTC TCG ACT TGC GGC CGC TCG CGC GCA GTA ATA CAC
抗原抗体反应抗体基因的改造简介
将鼠源抗体的V区基因与人源抗体C区基因重组，获得的嵌合抗体（chimericalantibody），可保留鼠抗体对抗原的高亲和性，又减弱鼠源抗体对人的免疫原性，提高治疗性抗体的效果。 重组的嵌合抗体基因转化骨髓瘤细胞或中国地鼠卵细胞（CH0），可在其中表达。为了进一步地消除鼠抗体V区框架区（F
PCR扩增模板和抗体可变区基因的扩增
PCR 扩增模板和抗体可变区基因的扩增 如果构建Fab抗体库,必需利用RT-PCR获取抗体基因;构建ScFv抗体库,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在构建小鼠ScFv抗体库过程中,主要采用DNA作为扩增模板。 【材料和试剂】（1）PCR仪（2）Taq酶（3）氯仿（4）琼脂糖 【
强强联手|生物惰性液相与多角度光散射检测器联用，准确测定双抗分子量
双特异性抗体（简称“双抗”）是一种新型的抗体药物，它可以同时发挥两种单抗联用的协同作用，临床价值很高，但其质量控制的要求也非常严格。在双抗研发生产过程中，需要对双抗分子的大小异质性进行测定，以确认双抗的连接情况，保障产品质量。 然而双抗分子量的测定条件中不仅需要使用高浓度的盐进行洗脱，而且紫外
创建轻链改组噬菌体文库
[器材和试剂]● PCR试剂和设备● 含有起始scFV基因的载体pHENl单链模板DNA（50ng/ul）● Geneclean试剂盒● Wlzard PCR纯化试剂盒● scFvJHL2XhoFOR引物：5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC
概述噬茵体展示技术和噬菌体抗体库
噬菌体展示技术是一种强有力的基因表达筛选技术，1985年首次由美国科学家SmithMl在(Science)杂志进行了阐述。噬菌体展示技术的基本原理是将外源蛋白的基因克隆到噬菌体的基因组DNA中，从而在噬菌体的表面表达特定的外源蛋白。 Ellis SEp等指出利用噬菌体展示多肽库可以筛选和确定线
噬茵体展示技术和噬菌体抗体库
噬菌体展示技术是一种强有力的基因表达筛选技术，1985年首次由美国科学家SmithMl在(Science)杂志进行了阐述。噬菌体展示技术的基本原理是将外源蛋白的基因克隆到噬菌体的基因组DNA中，从而在噬菌体的表面表达特定的外源蛋白。Ellis SEp等指出利用噬菌体展示多肽库可以筛选和确定线虫疫苗的