免疫组化染色过程中存在的问题、原因分析及其对策
良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节,每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果,因此,要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题,但从染色的结果看,一般可分为两类:无色片(即无阳性信号)和“ 杂音”染色片(有阳性信号)。一、无色片染色结束后,切片中见不到任何阳性信号。这是常规工作中比较常见的现象,出现这种现象,有两种可能:1、真阴性结果:整个染色过程没有出现问题,组织或细胞确实不表达与抗体相关的抗原。2、假阴性结果:即此阴性结果不是真实的反映。假阴性结果又可分为两种情况:(1)切片中根本就不包含所预期检查的组织或细胞。出现这种情况,要麽是病理医生选择错了切片或抗体选错了,要麽是技术员选错了蜡块。获得正确的切片进行染色是获得正确结果的前提。......阅读全文
做好免疫组化染色必须注意的问题(四)
九、选择合适的抗体至今为止,应用于临床的常用抗体有几十种,在这当中又可分为两种类型。1.浓缩型抗体根据近几年来使用的情况认为,它有许多优点,但也有许多不足之处:①可作为各种疾病检测的常备抗体。在各单位的常规活检诊断中,有常见的病例,也有罕见的病例,尤其是后者,有时很长时间才遇到一例,这就给抗体的应用
做好免疫组化染色必须注意的问题(二)
四、切片的附贴必须牢固,必须使用合适的粘贴剂。免疫组织化学染色前的前期准备工作,就是必须对新的载玻片进行处理,新的载玻片表面看起来很干净,有人认为不需要进行任何的处理,都能够适合使用,这是一种错误的想法。新出厂的载玻片,表面复盖着开一层油脂样的物质,如果不加以处理,对切片的附贴是极为不利的。我们的做
做好免疫组化染色必须注意的问题(五)
十、连接抗体的选用必须正确,否则可造成假阴性的现象。免疫组化染色方法较多,如ABC法,SP法和EV二步法等,如果使用的是SP法,或者ABC法,这时就必须要仔细地选择好连接抗体,第一抗体有单克和多克隆炎分,连接抗体则要根据选用的抗体来进行,例如:第一抗体选用的是单克隆鼠抗人**抗体,连接抗体也要选择相
做好免疫组化染色必须注意的问题(三)
七、必须彻底抑制内源性过氧化物酶的活性,才能降低背景的染色。在各种组织中都含有很多的内源性过氧化物酶,尤其在红细胞,中性粒细胞,单核细胞嗜酸性细胞,出血的组织坏死的组织等等。含有这种酶的各细胞和组织如果在染色前不对其进行处理和抑制,它们将会在DAB底物的显色时,与HRP一样催化底样,使之显色,使之生
Western-Blot过程中常见的问题及可能原因分析
问题可能原因验证或解决办法背景高膜没有完全均匀湿透使用100% 甲醇浸透膜5-10min洗膜不充分增加洗液体积和洗涤次数阻断不充分增加封闭液孵育时间,或者提高温度。选择合适的封闭试剂(脱脂奶粉,BSA,酪蛋白等)二抗浓度过高降低二抗浓度检测过程中膜干燥保证充分的反应液,避免出现干膜现象曝光过度缩短曝
免疫组化常见问题及其解决办法
1、 一抗从4度拿出后,为什么要进行37度复温?(1)一方面,防止切片从4度直接放入PBS易脱片;(2)另一方面,使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。(3)
PCR常见问题分析与对策
1.PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 2.假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板:①模板中含有杂蛋白
血液检验室内质控存在的若干问题及对策
室内质量控制(IQC)是实验室人员采用一系列方法,连续评价本实验室工作的可靠程度。确定报告能否发出,是保证实验室工作质量的重要措施。目前采供血机构检测抗HCV、抗HIV、HBsAg均采用ELISA法,ELISA有其自身的特点,如灵敏度较高,同时影响因素也较多,这就更需加强质量控制。本
PCR实验常见问题、原因分析及其解决方案
PCR产物的电泳检测时间,一般为48h以内,有些最好于当日进行检查,大于48h后带型不规则甚至消失。但有时仍会与到这样那样的问题,影响检测结果的判断,具体归类为以下常见的4点,描述如下:问题一:无扩增产物现象:正对照有条带,而样品则无。原因:1、模板:含有抑制物,含量低。2、Buffer对样品不合适
影响免疫组化的因素及对策
(一)免疫组化染色假阳性及其对策 1、消除内源酶的影响在涉及免疫过氧化酶的各种染色中,均用过氧化物酶来标记抗体,酶的作用是催化底物,使显色剂显色,正常组织中也含有一定量的过氧化物酶,其同样也能催化底物显色,而影响免疫组化染色的特异性,因此在加入标记酶前应设法将其灭活,以保证染色反应的特
影响免疫组化的因素及对策
(一)免疫组化染色假阳性及其对策 1、消除内源酶的影响在涉及免疫过氧化酶的各种染色中,均用过氧化物酶来标记抗体,酶的作用是催化底物,使显色剂显色,正常组织中也含有一定量的过氧化物酶,其同样也能催化底物显色,而影响免疫组化染色的特异性,因此在加入标记酶前应设法将其灭活,以保证染色反应的特异
抗原修复的作好免疫组化染色必须注意的问题
I、为达到免疫组织化学技术的要求,组织固定越新鲜越好。在免疫组化最后结果的判断时,常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象,经多方研究认为,它是一种假性非特异性的染色。因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散,肿瘤细胞无限制的生长和生长过速,导致肿瘤中间部分组织血液供给困难,造成缺血坏死,坏死细胞中的
粮食粘度测定过程中存在问题解析
粮食粘度是评价粮良储藏品质以及陈化的主要控制指标,因此,在粮油检测中,我们经常需要用到相关的仪器,用于测定粮食粘度等参数。而粮食运动粘度计是用于测定粮食粘度的关键仪器,该仪器采用自动控温探时,实现了测量装置一体化,减少了人为操作的误差,测量精度高。经过几年的实践,粘度测定仪已经适用于粮食贮藏、加
石化企业阀门泄漏的原因分析及对策
阀门是石油化工炼油装置中不可缺少的部分,其使用的阀门种类多、数量大,化工生产中的介质多是腐蚀性强、有毒或易燃易爆的,当阀门泄漏时,不仅会造成严重的原材料、能量和产品的浪费,而且对环境也造成严重的影响,甚至引起严重的安全事故。因此,我们有必要也应当重视石油化工生产过程中阀门的泄漏问题。下面就石油化
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抗TP抗体筛查试验的假阳性问题及其对策
一、梅毒体外诊断试验 1.梅毒的体外诊断试验分类 梅毒的体外诊断试验按试验所用抗原分为非密螺旋体抗体试验(nontreponemal antibody test, NTrAT)和密螺旋体抗体试验(treponemal antibody test, TrAT)。NTrAT包括快速血浆反应素环状
我国生鲜食品安全检验存在的问题与对策探讨
摘要:食品安全问题是涉及国计民生的大事,关系到人民生命财产安全和身体健康。生鲜及其加工食品是食品的一种特殊种类,加强对生鲜及其加工食品检测流程的管理和优化,确保生鲜及其加工食品的安全意义重大。本文探讨了我国生鲜食品安全检验存在的问题与对策。 食品安全问题是涉及国计民生的大事,关系到人民生命财产
免疫组化常见问题分析
1,石蜡切片在染色过程中出现脱片现象1)烤片时间不够,或温度不够,可以延长烤片时间和提高烤片温度;2)用含有多聚赖氨酸的玻片,可以购买到或这自己做;3)有些组织本身就容易掉片,如骨组织等,操作时冲PBS不要直接冲到组织上,冲到组织上方,让它流下冲洗组织;4)用高温修复时,温度骤冷也可能引起。2,边缘
酶制剂发展及其对策
酶制剂工业是21世纪最有希望的新兴产业之一,为了适应这个发展趋势,笔者认为,我国酶制剂工业以后5-8年的发展,主要考虑在现有应用领域提高基础上,重点发展的应用领域是:动物饲料工业、低聚糖工业、棉纤维与纺织加工、洗涤剂、焙烤工业、防护用品、蛋白质水解、淀粉改良、纸浆、造纸用酶等。只有这样,才能赶上国际
PCR中常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般认为PCR产物应在48h以内完成电泳检测,有些zui好于当日电泳检测,大于48h后带型就会出现不规则,甚至消失。 1 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节
免疫组化非特异性背景染色及其控制方法
一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片(特别是淋巴造血组织,淋巴细胞,单核细胞,组织细胞表面多),主要是和二
食品检验检测体系的现状及其对策分析
摘要:食品检验检测体系是保证我国食品安全质量的重要体系,是确保社会民众生命健康安全的重要保障,而近年来随着我国市场经济的不断繁荣,食品生产领域的竞争日趋激烈,导致很多食品安全问题频频出现,为社会民众的饮食安全蒙上了一层阴影。为了有效的应对社会民众对于食品安全的担忧,国家除了应该加强对于食品生产企
频控制电机过热损坏的原因分析及对策
1 故障现象 山西铝厂氧化铝二分厂三车间有3个油隔泵站,每个泵站3台喂料油隔泵,分别担负着2台熟料窖的供料任务,是生产流程中的一个关键环节。油隔泵为恒转矩负载,电机采用变频控制,根据生产需要,调节电机转速以改变熟料窖的下料量。因泵的流量不同,一泵站电机工作频率为25Hz左右,二、三泵站电
检验科医院感染的原因分析及对策
医院感染又称医院内获得性感染或医院内感染,是指住院患者发生的感染,包括入院时尚未发生此感染,也未处于此感染的潜伏期状态。随着医院工业和医院技术的发展,大量抗生素进入临床,各种侵入性操作和检查增多,医院感染问题也日益突出,已成为医院急需解决的公共卫生问题。检验科是医院工作运行中不可缺少的重要一环,其工
刘宇:关于我国碳排放核查中存在的问题及对策建议
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单抗制备细胞融合筛选过程中遇到的问题及对策
1,融合率低,阳性孔少①免疫的问题。由于免疫原性不强或者免疫途径不当造成免疫弱,效价低。②融合过程中温度、时间、PEG分子量,作用时间等。③脾细胞是否取出了足够多的细胞,有无组织碎片干扰。④融合前骨髓瘤细胞生长状态是否完好,细胞是否浑圆,透亮,成对数生长。2,单抗亲和力整体低①免疫的问题。免疫途径不
巴傲得生物,WB过程中常见的问题及可能原因分析
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原子吸收分析测试中常出现的问题及对策
[摘要]本文笔者首先介绍了原子吸收分析测试中常出现的问题,进而提出了相应的解决措施,并在最后着重介绍了灵敏度的问题及解决方法。 1原子吸收分析测试中常出现的问题 1.1蒸馏水的纯度 在分析操作过程中,所用的溶液一般为蒸馏水,即去离子水。尤其在测定常见元素如铁、钙、镁、铜、钠等时,更应
IHC免疫组化常见问题分析
分析一下免疫组化实验中一些常见的问题和解决措施: 常见问题一:所有切片呈阴性 原因分析:a.缓冲液内含叠氮化钠,抑制酶的活性; b.染色未完全按照操作步骤进行; c.漏加一种抗体或抗体失活; d.复染或脱水剂使用不当; e.底物中加入的过氧化氢少或失活。