PCR常见问题分析与对策
1.PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 2.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。 酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。 引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见......阅读全文
PCR常见问题分析与对策
1.PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 2.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白
PCR中常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般认为PCR产物应在48h以内完成电泳检测，有些zui好于当日电泳检测，大于48h后带型就会出现不规则，甚至消失。 1 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节
PCR技术（五）：常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
PCR常见问题及对策
PCR常见问题及对策（一）没有得到扩增产物（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。（3）变性温度是否准确：PCR
PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污
PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 一、污染原因 1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样
PCR技术（四）：PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污 染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.一、污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由
PCR的污染与对策
一、污染原因 （一）标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶 或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染. （二）P
PCR实验污染与对策
PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。一、污染原因1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪
PCR实验指导与常见问题分析7
11. All products in my multiplex reaction are weak. How can I improve the yield?Decrease annealing time in small steps (2º C)Decrease extension temper
PCR实验指导与常见问题分析5
MgCl2 concentrationRelationship between MgCl2 and dNTP concentrationdNTP concentrations of about 200µM each are usually recommended for the Taq polyme
PCR实验指导与常见问题分析2
Fig. 11. Example of the influence of extension temperature. Multiplex PCR with mixtrues A-B using two different PCR programs. Reactions on the right s
PCR实验指导与常见问题分析3
Influence of annealing temperature and number of loci amplifiedLike any other PCR, multiplex reactions should be done at a stringent enough temperatur
PCR实验指导与常见问题分析4
Fig. 25. Multiplex PCR of mixtures A-D comparing PCR programs with 2 (green) and 1 (yellow) minute extension time at 54° C annealing temperature. Comp
PCR实验指导与常见问题分析1
CONTENTPCR guide: a discussion of the main parameters influencing the outcome of the PCR and multiplex PCR reaction in 16 pages/sections and using ove
PCR实验指导与常见问题分析6
Non-denaturing PAA gelsTo separate PCR products differing in only a few bp in length (for example, microsatellite markers), 6-10% PAA gels need to be
核酸提取常见问题、原因分析及其对策
一、DNA提取方法简介二、DNA提取常见问题、原因分析及其对策三、RNA提取方法简介四、RNA提取常见问题、原因分析及其对策核酸提取原理及常见问题.pptx
临床输血中常见问题与管理对策
输血是救治病人的重要手段之一，然而输血不当，可产生严重的输血不良反应、输血传染病和同种免疫反应，重者危及患者生命。临床输血安全是每个医务工作者必须考虑，并严肃对待的问题，应切实做好防范工作。根据部分医院资料分析表明，输血引发的问题，80%以上发生在血站外，而护士责任性差错占全部差错的50%以上。周慧
PCR克隆常见问题分析
1、克隆PCR产物的最优条件是什么？ 最佳插入片段：载体比需实验确定。1:1（插入片段:载体）常为最佳比，摩尔数比1:8或8:1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2X连接液, 50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶，插入片段共10ul。室温保温1小时，或4℃过夜。在
PCR污染及解决对策
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法，在微生物感染的诊断中具有重要的价值。在PCR扩增过程中，扩增的DNA产量是呈指数上升的，经过n个循环的扩增，一个DNA分子的产量便达到2n个拷贝。PCR产物一般为1013拷贝/
离子色谱常见问题及其对策
离子色谱常见问题类型主要有压力异常(偏高、波动)、漏液、保留时间漂移、基线问题(漂移、噪声)、 峰形异常等，本文主要针对这几个现象逐条分析，让你不再为使用离子色谱而烦恼。 一、压力异常 无压力，流动相不流动的可能原因： 1、保险丝断或电源问题;2、柱塞杆折断;3、泵头内有
雷迈分析包衣过程中常见问题及对策
机在实际操作中如遇到如下的问题： 包衣机在实际操作中如遇到如下的问题： 1、粘片多发生在包隔离层。原因是素片表面不光华，单糖浆加入过量且温度低，水分蒸发慢，搅拌不及时，彼此粘附所致。 对策：一是糖浆应控制在40℃～50℃,与素片的比例
小儿静脉留置针输液常见问题原因分析及对策
静脉留置针亦称套管针，其套管柔软，不易穿破血管，可长时间留置于血管内，既减少了患者反复静脉穿刺的痛苦，又能方便及时用药，具有传统头皮针不可替代的优势，因而被广泛应用于临床输液。由于小儿配合差，血管相对较细，静脉留置针的使用可大大减轻患儿的痛苦，也降低了护士进行穿刺时的精神压力。 但在临
血培养，临床常见问题及对策
血流感染（BSI）是指病原微生物侵入血流，随血行播散的感染，可以表现为菌血症、真菌血症、病毒血症和脓毒症。血流感染是一种全身性感染疾病，严重者可引起休克、弥散性血管内凝血和多脏器功能衰竭。 导管相关性血流感染（CRBSI）是指带有血管内导管或者拔除血管内导管48小时内，患者出现菌血症
PCR仪温控性能及常见问题分析
PCR 技术自发明以来已经三十多年，一直广泛应用于分子生物学的各个领域，普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天小宝来聊一聊定性PCR仪zui为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读------------------------------------------
PCR仪温控性能及常见问题分析
PCR 技术自发明以来已经三十多年，一直广泛应用于分子生物学的各个领域，普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天小宝来聊一聊定性PCR仪zui为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读-----------------------------------------
PCR仪温控性能及常见问题分析
PCR 技术自发明以来已经三十多年，一直广泛应用于分子生物学的各个领域，普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天小宝来聊一聊定性PCR仪zui为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读------------------------------------------
献给初学者：PCR－常见问题分析
我们给大家汇总了 PCR 常见问题、出现的原因及解决对策，还有终极解决方案。 PCR 常见问题及解决方案 1没有扩展条带 可能的原因及对应的解决方案如下： 酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。
PCR仪温控性能及常见问题分析
PCR 技术自发明以来已经三十多年，一直广泛应用于分子生物学的各个领域，普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天来聊一聊定性PCR仪最为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读-----------------------------------------------
PCR常见问题
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模