免疫组化双染实验protocol
第一抗体的染色： 1、 将切片浸在3％H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中10分钟，PBS冲洗2分钟×3次 2、 加100ul（2滴）血清封闭溶液（试剂1）到切片上，室温孵育10分钟，倒掉（不能冲洗） 3、 加入一抗（按照说明推荐浓度和孵育条件） 4、 使用含有0.05％吐温20的PBS( TPBS)，冲洗2分钟×3次 5、 加入100ul（2滴）生物素化的二抗（试剂2)，室温孵育10分钟 6、 使用含有0.05％吐温20的PBS( TPBS)冲洗2分钟×3次 7、 加入100ul（2滴）链霉亲和素-AP（试剂3）的二抗，室温孵育10分钟 8、 使用含有0.05％......阅读全文
蛋白质染色实验——银染法
实验材料蛋白质试剂、试剂盒脱色液戊二醛硝酸银洗印显影液仪器、耗材培养箱摇床实验步骤1. 将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料容器并以5倍体积的固定液覆盖，在旋转摇床中缓慢摇动30 min 以上。 2. 倾去固定液，加5倍凝胶体积的脱色液，缓慢摇动60 min 以上。 3. 倾去脱色液，加5倍凝胶体积的10
免疫组化的实验试剂及实验步骤
一、试剂（1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。（2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。（3）0.
Immunoprecipitation－Protocol
实验概要Immunoprecipitation is a procedure by which proteins or peptides that react specifically with an antibody are removed from solution and examined
ELISPOT－Protocol
实验概要The Elispot (Enzyme Linked Immuno-Spot) assay provides an effective method of measuring the antibody or cytokine production of immune cells on t
ELISPOT－Protocol
实验概要The Elispot (Enzyme Linked Immuno-Spot) assay provides an effective method of measuring the antibody or cytokine production of immune cells on t
ELISA－protocol
ELISA protocol：1.取5－10ul BMMY表达上清用0.05M NaHCO3稀释到100ul铺ELISA板，37度或室温振荡大于1小时。注意一定要做一个GS115空菌株表达上清作为阴性对照，最好还找一个带有histag的蛋白作为阳性对照。2.TPBS洗板3次，方法：倒掉铺板液，倒置于
Immunoblot－Protocol
This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives. Investigators must be aware that they will need to tailor
RNAi－protocol
siRNA protocolsOur current strategy with siRNA is to synthesis relatively small amounts enzymatically and use these to test for efficiency by western
NAi－protocol
siRNA protocolsOur current strategy with siRNA is to synthesis relatively small amounts enzymatically and use these to test for efficiency by western
ELISPOT－protocol
实验概要The procedure below is a general guideline procedure for ELISPOT. Abcam ELISPOT kits have been designed for detection of various cytokines and g
PCR－protocol
PCR reactionProtocol for 50µl reaction - adjust amounts if necessary, for a 20µl reaction use the same volumes of primer and dNTP-mix, but adjust the
RLGS－protocol
A. Preparation of DNA SolutionIn the case of rice, for example This method may be appllicable for many grass species and some other plants.
HE－染色和免疫组化染色可以同时做吗
免疫组化是利用抗原与抗体间的特异结合原理和特殊的标记技术，对组织和细胞内的特定抗原、抗体进行定位、定性、定量的一们技术。我们都是先进行免疫组化，在DAB染色后进行HE染色。既能看到免疫组化的结果，又能看到细胞的形态，CD34+免疫组化染色后是棕色的颗粒，效果很好。 1）做免疫组化的片子最好不要同时做
石蜡切片免疫组化实验2
链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法实验方法原理SP（streptavidin-perosidase）法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。SP法是最常使用的方法。试剂、试剂盒二甲苯酒精PBS双氧水枸橼酸缓冲液羊血清工作液辣根过氧化物酶链霉素卵白素苏木素DAB仪器、耗材冰箱显微镜烧杯玻璃缸
石蜡切片免疫组化实验3
卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法实验材料蜡块切片试剂、试剂盒多聚甲醛蒸馏水蔗糖过氧化氢甲醇PBS酒精KPBS牛血清白蛋白叠氮纳一抗二抗仪器、耗材冰箱显微镜烧杯实验步骤1. 4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01 M KPBS清洗5
免疫组化实验注意事项
当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。那么在做免疫组化实验注意事项有哪些呢？下面我们来详细了解一下： 对照/标本无染色 ① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。 ② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育
石蜡切片免疫组化实验步骤
脱蜡和水化1. 将切片依次浸入二甲苯Ⅰ10 min，二甲苯Ⅱ（10 min）。2. 再次浸入无水乙醇Ⅰ（5 min）-无水乙醇Ⅱ（5 min）-95%酒精（5 min）-80%酒精（5 min）-70%酒精（5 min），然后去离子水冲洗2次，每次2 min。 抗原修复 (可选)3. 将组织切片放入
石蜡切片免疫组化实验4
实验方法原理SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法，是众多免疫组织化学方法的一种。SABC法：一抗+ 生物素标记二抗+ 滴加试剂SABC（链霉卵白素+ 辣根酶标记生物素）+ 辣根酶底物显色。目前常用的亲和素从
免疫组化实验原理和步骤
实验原理： 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原
异染颗粒染色配制及染色方法实验
异染颗粒染色配制及染色方法实验可以用于：（1）检测白喉杆菌的存在；（2）异染颗粒与菌体对比度好。实验方法原理用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来，标本直接涂片或细菌涂片均可用改良阿伯特法染色来观察异染颗粒。实验材料白喉杆菌试剂、试剂盒甲苯胺兰孔雀绿冰醋酸乙醇仪器、耗材培养基载玻片实验步骤
蛋白质染色实验——快速银染法
实验材料蛋白质试剂、试剂盒甲醛固定液硫代硫酸钠干胶液甲醇仪器、耗材摇床透析膜实验步骤1. 将凝胶置于塑料容器中，加入50 ml 甲醛固定液，在旋转摇床中缓慢摇动10 min。 2. 倾去固定液，用水冼两次，每次5 min，缓慢摇动。 3. 倾去水，凝胶浸泡在0.2 g/l 硫代硫酸钠溶液中1 m
异染颗粒染色配制及染色方法实验
实验方法原理 用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来，标本直接涂片或细菌涂片均可用改良阿伯特法染色来观察异染颗粒。实验步骤 实验试剂：甲液：甲苯胺兰：0.15g 孔雀绿：0.2g冰醋酸： lml 95%乙醇：2ml蒸馏水： 100ml将各染料先溶于乙醇，然后加入水与冰醋酸的
流式双染法测凋亡，各个象限代表什么状态的细胞
一般来说以Annexin-FITC 信号为横坐标，PI 信号为纵坐标，左下是正常细胞，右下是早期凋亡细胞，右上是中晚期凋亡，左上是坏死细胞。对于右上象限有争议，有人视其为晚期凋亡，有人视其为坏死细胞~
银染
1．将固定液中的凝胶摇动过夜或至少1小时。2．将保温液中的凝胶轻微振荡2小时。3．去离子水清洗凝胶3次，每次20分钟。4．将硝酸银溶液中凝胶轻微振荡30分钟。5．用去离子水快速洗胶30秒。6．将定影液中凝胶摇动5～30分钟，时间由所加的蛋白质量决定。7．如果已经达到所需的颜色深度，将凝胶放到定影液中
流式细胞仪检测细胞凋亡实验protocol
40年来，流式细胞术一直由多色流式主导。 尽管Fulwyler发明的初代仪器基于库尔特体积，但荧光在短短几年内成为流式细胞仪主导技术。 从20世纪80年代初到现在，技术开发人员一直致力于构建能够测量更多荧光参数（我们通常将其称为“颜色”）的仪器。 最开始，Göhde在1968年首次发表关于荧光
免疫组化实验过程中的注意事项
如何随心所欲的做好免疫组化？免疫组化（Immunohistochemistry) 至今也有八十余年的历史了，从 1930 年免疫组化的理论被提出讨论，一直到 1941 年以带有荧光色素的抗体，成功地观察到组织中肺炎双球菌抗原的存在，至此之后不断对于方法改良创新，也就形成了我们实验中才使用的免
免疫组化技术实验原理及分类
免疫组化技术实验原理： 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。 众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将
如何实现完美的免疫组化实验
（一）、仪器设备1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅（二）、试剂1）PBS 缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，p
免疫组化实验中常用染色方法
根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。
免疫组化实验原理和步骤（三）
免疫组化技术的关键问题1.组织处理恰当的组织处理是做好免疫组化染色的先决条件，也是决定染色成败的内部因素，在组织细胞材料准备过程中，不仅要求保持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的抗原性不受损戒弥漫，防止组织自溶。如果出现自溶坏死的组织，抗原已经丢失，即使用很灵敏的检测抗体和高超的技术，也很难检出所