抗体检测以及杂交瘤细胞的选择
（一）抗体检测用检测抗体的方法从杂交细胞中筛选出生产指定抗体的杂交株是很重要的。检测抗体的方法很多，从沉淀反应到放射免疫测定。由于细胞培养液中的抗体浓度通常是很低的，而且传统的检测方法多是以多价抗原与多克隆抗血清相反应。杂交瘤产生的抗体则是单克隆的，所以并不是每项方法都能适用。一定要选择敏感的、快速的、一次又能检测多份样品的方法。常用的检测方法如下：１．试管溶血反应检测法（1）材料：①杂交瘤细胞，换液后至少两天才收取培养液；②绵羊红血球，洗涤三次后，配成1％悬液；③豚鼠补体，无菌采取补体，以pH7.2PBS稀释成20％溶液，分装小瓶，于﹣40℃保存。使用时以补体和压积红血球5:1（V/V）的量进行吸收，4℃30min，然后2 000r/min离心10min，去红血球，取上清液备用；④0.01Mol/L pH7.2PBS液。（2）操作方法：①在小试管中，加入0.1ml杂交瘤细胞用过的培养液，再加入0.1ml pH7.2的PBS液，......阅读全文
抗体检测以及杂交瘤细胞的选择
（一）抗体检测用检测抗体的方法从杂交细胞中筛选出生产指定抗体的杂交株是很重要的。检测抗体的方法很多，从沉淀反应到放射免疫测定。由于细胞培养液中的抗体浓度通常是很低的，而且传统的检测方法多是以多价抗原与多克隆抗血清相反应。杂交瘤产生的抗体则是单克隆的，所以并不是每项方法都能适用。一定要选择敏感的、快速
抗体检测及杂交瘤细胞的选择
（一）抗体检测用检测抗体的方法从杂交细胞中筛选出生产指定抗体的杂交株是很重要的。检测抗体的方法很多，从沉淀反应到放射免疫测定。由于液中的抗体浓度通常是很低的，而且传统的检测方法多是以多价抗原与多抗血清相反应。杂交瘤产生的抗体则是单的，所以并不是每项方法都能适用。一定要选择敏感的、快速的、一次又能检测
杂交瘤细胞和重组抗体
在过去的二十五年里，利用杂交瘤细胞生产了成千上万的鼠单克隆抗体。人们用同样的技术从转基因鼠中克隆人类的抗体，并设计了全长型抗体和重组片段，它们可以被用于多种诊断和治疗。而且如果他们能在哺乳动物细胞，牛奶及植物中表达，就可以大量获得。 一个世纪以前，Paul Ehrlich提出了著名的侧链理论来解
关于杂交瘤技术细胞的选择与融合
建立杂交瘤技术的目的是制备对抗原特异的单克隆抗体，所以融合细胞一方必须选择经过抗原免疫的B细胞，通常来源于免疫动物的脾细胞。脾是B细胞聚集的重要场所，无论以何种免疫方式刺激，脾内皆会出现明显的抗体应答反应。融合细胞的另一方则是为了保持细胞融合后细胞的不断增殖，只有肿瘤细胞才具备这种特性。·选择同
简述单克隆抗体杂交瘤细胞的内容
克隆化的细胞可以在体外进行大量培养，收集上清液而获得大量的单一的克隆化抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液。而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小
杂交瘤细胞的选择性培养是什么？
将经过融合的细胞置于含有次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷的HAT培养基中。 1.脾细胞：在一般培养基中不能生长繁殖。 2.骨髓瘤细胞：采用的小鼠骨髓瘤细胞都是HGPRT或TK代谢缺陷型细胞，在HAT培养基中不能增殖。 3.杂交瘤细胞：骨髓瘤细胞与脾细胞融合，获得HGPRT，可以利用次黄嘌呤
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术 实验方法原理 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
实验方法原理1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包
单克隆抗体杂交瘤细胞筛选技术介绍
1986年，美国FDA批准了第一个单克隆抗体药物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超过40个治疗用抗体药物被批准上市，每年实现超过600亿美元的销售额。在国际及国内形成了抗体药物开发热潮。巨大的市场前景和现存的技术问题及壁垒并存的现实不可避免地引发抗体药物新一轮技术革命。而其结果又将毫无疑问地改
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
实验方法原理 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术（一）
实验方法原理 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体
单克隆抗体腹水制备实验——杂交瘤细胞接种
实验方法原理高滴度的单克隆抗体的制备可以通过在小鼠的腹腔内接种能产生 MAb 的杂交瘤细胞，从而产生腹水来获得。腹水可收集几次，经热灭活、滴定后储存。实验材料裸鼠（6～8 周龄 无特定病原体／注射了鼠鼠杂交瘤细胞的同系宿主）目的杂交瘤试剂、试剂盒完全DMEM-10培养液（含10mmol／L HEPE
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术（二）
2. HAT选择杂交瘤 一般在融合24 小时后，加HAT选择培养液。HT和HAT均有商品化试剂50×贮存，用时1 ml加入50 ml20 ％小牛血清完全培养液中。 因为在培养板内已加入饲养细胞、融合后的细胞，200 μl/孔。所以在加选择培养液时应加3倍量的HAT。我们认为，融合后最初补加的量可用
如何正确选择WB检测的抗体？
WB免疫印迹法，也称免疫转移技术IBT(Immunoblotting)，是Towbin将1975年Southern发明的Soutnern blotting技术应用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫学检测方法。其操作简便，主要用于未知蛋白检测及抗原组分、抗原决定簇鉴定，同时也用于未知抗体的
如何正确选择WB检测的抗体？
WB免疫印迹法，也称免疫转移技术IBT(Immunoblotting)，是Towbin将1975年Southern发明的Soutnern blotting技术应用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫学检测方法。其操作简便，主要用于未知蛋白检测及抗原组分、抗原决定簇鉴定，同时也用于未知抗体的检测和单
淋巴细胞杂交瘤(hybridoma)单克隆抗体技术1
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备方法
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序，逐一介绍其实验方法。一、细胞融合前准备（一） 免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
淋巴细胞杂交瘤(hybridoma)单克隆抗体技术2
(三) 骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤细胞在同一品系小鼠腹腔内产生大量 McAb。 常用骨髓瘤细胞系有：NS1、SP2／0、X63 Ag8.653 等。 骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度
杂交瘤细胞的制备
1. 骨髓瘤细胞的准备选择生长状态良好的细胞，浑圆透亮，大小均一，边缘清晰，排列整齐，呈半致密分布。弃上清，以不完全培养基洗涤一次后，用10mL不完全培养基将骨髓瘤细胞（SP2/0）轻轻吹下。2. 脾淋巴细胞的准备a、取加强免疫后3天的小鼠，摘除眼球采血供分离阳性血清。b、颈脱位将小鼠致死，用75
杂交瘤细胞的筛选
杂交瘤细胞的筛选 在细胞融合后，要从上述五种细胞中筛选出杂交瘤细胞，一般使用HAT培养进行筛选，HAT培养基中含有次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶（T）三种成分。细胞的DNA合成有内源性途径（主要途径）和外源性途径（旁路途径）两种方式。内源性途径就是利用谷氨酰胺或单磷酸尿苷酸在二氢叶酸还原
细胞杂交瘤技术
细胞杂交瘤技术 杂交瘤技术 杂交瘤技术是1975年Kohler和Milstein用于制备单克隆抗体而创建的一项重要技术，被誉为“免疫学上的一次革命”。此技术被广泛用于各种单克隆抗体的制备。抗体是由B淋巴细胞分泌的，一个B淋巴细胞只能分泌一种抗体。把B淋巴细胞和骨髓细胞融合，即可形成在体外长期存活并分
细胞培养基的种类，以及如何选择？
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 细胞培养基的种类有哪些？ 按照细胞培养基的发展历史，细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培
单克隆抗体细胞的选择
实验概要本文介绍了单克隆抗体细胞的选择实验。实验原理在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖，必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养细胞(Feeder cell)。在细胞融合和单克隆的选择过程中，就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体，因此在这一
单克隆抗体细胞的选择
实验概要本文介绍了单克隆抗体细胞的选择实验。实验原理在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖，必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养细胞(Feeder cell)。在细胞融合和单克隆的选择过程中，就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体，因此在这一
单克隆抗体技术：细胞的选择
脾细胞 1．材料 (1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2) 1640培养液 (3) 2.5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2) 将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。 (3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的
单克隆抗体的细胞如何选择？
(一)脾细胞1.材料(1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。单克隆抗体制备流程(2)1640培养液(3)2.5%FCS-1640营养液2.操作方法(1)拉颈或用CO2处死小白鼠。(2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。(3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的16
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术3
抗体的制备方法与原理一、抗血清的制备 有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。 （一）用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术4
（二）细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag