石蜡切片免疫组化染色方法
1、载玻片的处理:抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。为保证试验的正常进行,可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下:1.1 APES:现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30秒钟,取出稍停片刻,再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES,置通风橱中晾干即可。用此载玻片捞片时应注意组织要一步到位,并尽量减少气泡的存在,以免影响染色结果。1.2 HistogripTM:将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的Histogrip液中,停留1~2分钟,然后用双蒸水快速清洗三次,室温干燥或60oC烤箱烘烤一小时,装盒备用。1.3 Poly-L-Lysine:将洗净、干燥的载玻片放入以1:10比例去离子水稀释的多聚赖氨酸溶液中,......阅读全文
石蜡切片免疫组化染色方法
1、载玻片的处理:抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。为保证试验的正常进行,可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下:1.1
石蜡切片免疫组化染色
实验概要掌握石蜡切片免疫组化染色实验中载玻片的处理,常用酶消化,抗原热修复及基本实验步骤。实验步骤1. 载玻片的处理 1) APES:现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30秒钟,取出稍停片刻,再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES,置通风橱
石蜡切片免疫组化染色
实验概要掌握石蜡切片免疫组化染色实验中载玻片的处理,常用酶消化,抗原热修复及基本实验步骤。实验步骤1. 载玻片的处理 1) APES:现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30秒钟,取出稍停片刻,再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES,置通风橱
石蜡切片免疫组化染色步骤
1、载玻片的处理:抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。为保证试验的正常进行,可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下:1.1
石蜡切片免疫组化染色实验操作流程
1.石蜡切片脱蜡至水:(石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时) 。① 二甲苯 、II,各 10 分钟。② 梯度酒精:100%,2 分钟 95%,2 分钟 80%,2 分钟 70% 2 分钟。③ 蒸馏水洗:5 分钟,2 次(置于摇床)。2.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶:3%H2 O2 ,室温 10 分
石蜡切片(paraffin-sections)免疫组化染色步骤
1、载玻片的处理:抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响,极易造成脱片。这里选用ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂,对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下:(1)APES:现用现配。将洗净的玻片
石蜡切片免疫组化实验
即用型(Envision)快速酶免疫组化二步法免疫组化可应用于:(1)确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究;(2)诊断异常细胞,指导治疗。实验方法原理根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后,加入
石蜡切片免疫组化实验
即用型(Envision)快速酶免疫组化二步法 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法 卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法 链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物(SABC)法
石蜡切片免疫组化步骤
实验概要石蜡切片免疫组织化学染色主要试剂染色缸;染色架;保湿盒;晾片盘;微量移液器;0.2MPBS,乙醇,二甲苯,BSA,中性树胶等实验步骤1. 石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤120分钟;2. 脱蜡和水化:二甲苯(10min)→二甲苯(10min)→无水乙醇(5min×2次)→95
石蜡切片免疫组化实验
实验方法原理 根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后,加入底物显色。实验材料 石蜡切试剂、试剂盒 PBS柠檬酸盐缓冲液蒸馏水增强剂酶标抗鼠 兔聚合物苏木素酒精二甲苯树胶盐酸二氨基联苯胺仪器、耗材 烘箱微波盒塑料切片架显微镜胶头
石蜡切片免疫组化实验2
链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法实验方法原理SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。SP法是最常使用的方法。试剂、试剂盒二甲苯酒精PBS双氧水枸橼酸缓冲液羊血清工作液辣根过氧化物酶链霉素卵白素苏木素DAB仪器、耗材冰箱显微镜烧杯玻璃缸
石蜡切片免疫组化实验3
卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法实验材料蜡块切片试剂、试剂盒多聚甲醛蒸馏水蔗糖过氧化氢甲醇PBS酒精KPBS牛血清白蛋白叠氮纳一抗二抗仪器、耗材冰箱显微镜烧杯实验步骤1. 4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜。蜡块制作。切片,贴片。0.01 M KPBS清洗5
石蜡切片免疫组化实验步骤
脱蜡和水化1. 将切片依次浸入二甲苯Ⅰ10 min,二甲苯Ⅱ(10 min)。2. 再次浸入无水乙醇Ⅰ(5 min)-无水乙醇Ⅱ(5 min)-95%酒精(5 min)-80%酒精(5 min)-70%酒精(5 min),然后去离子水冲洗2次,每次2 min。 抗原修复 (可选)3. 将组织切片放入
石蜡切片免疫组化实验4
实验方法原理SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法,是众多免疫组织化学方法的一种。SABC法:一抗+ 生物素标记二抗+ 滴加试剂SABC(链霉卵白素+ 辣根酶标记生物素)+ 辣根酶底物显色。目前常用的亲和素从
石蜡切片阴性染色产生的原因
⑴一抗和二抗浓度不合适或孵育条件不妥。⑵荧光素提前衰退。荧光素质量不佳或操作过程中没有注意避光等防止荧光素衰退的事项。⑶血清封闭时间过长。⑷抗体稀释液PH值不合适,影响抗原抗体反应。⑸组织切片不平、裂片或脱片很严重,易引起大块阴性着色。⑹组织标本不新鲜或已经冷冻组织制成的切片中抗原易弥散,易引起本来
HE染色石蜡切片制作的基本过程
HE染色石蜡切片制作的基本过程:1、取材与固定从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0.5厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。2、脱水透明一般用由低浓度到高浓度酒精作脱
石蜡切片的酶免疫组化注意事项
一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象? 一般来说,如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话,如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法: 1.一般用APES:丙酮=1:50的处理液来处理片子,处理5min左右,然
石蜡切片的酶免疫组化注意事项
一. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象?一般来说,如果用多聚赖氨酸包被过的片子做正常免疫组织化学染色的话是不会掉片子的。但如果要做抗原修复的话,如果片子处理不好的话是有可能掉片子的。你可以试试一下的方法:1.一般用APES:丙酮=1:50的处理液来处理片子,处理5min左右,然后水洗,烘干既可用于贴
石蜡切片与冰冻切片
一、组织和细胞标本类型:(一) 组织标本类:1、 石蜡切片:组织形态保存好2、 冰冻切片:抗原性保存好(二)细胞标本类:1、组织印片 2、细胞培养片(细胞爬片) 3、细胞涂片二、组织取材1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后,再进行后固定。2、组织取材注意事项:(1)标本新鲜:组织要求离体后30min
石蜡切片免疫组织化学染色
主要试剂染色缸;染色架;保湿盒;晾片盘;微量移液器;0.2MPBS,乙醇,二甲苯,BSA,中性树胶等实验步骤1. 石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤120分钟;2. 脱蜡和水化:二甲苯(10min)→二甲苯(10min)→无水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5min×2)→90%(
石蜡切片抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)免疫组化染色试剂..
石蜡切片抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)免疫组化染色试剂盒说明主要用途石蜡切片抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)免疫组化染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和免疫抗体显色技术,即通过抗酒石酸酸性磷酸酶多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗,使用染料二氨基联苯胺染色显示棕褐色,分析存档中的石蜡包埋
振动切片方法及与石蜡、冰冻切片的比较
振动切片用振动切片机,可以把新鲜组织(不固定不冰冻)切成厚片20~10μm,以漂浮法在反应板进行免疫组织化学染色,然后在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位,修整组织进行后固定,最后按电镜样品制备、脱水、包埋、超薄切片、染色观察等。组织不冰冻,无冰晶形成和组织抗原破坏,在免疫组化染色前避免了组织脱水、透
石蜡切片如何检测线粒体功能需要多少石蜡切片
线粒体有关的脑组织染色问题(线粒体,脑组织,石蜡切片,认知功能,心理)] 本人心理专业,研究认知功能方面,无奈需要生理的指标,因此对动物认知相关的脑区进行取材,主要想测线粒体功能和形态方面的指标。可是本人对这方面一窍不通,急需大家伙帮忙。我现在把组织分为两组进行处理,一部分-80冷藏了,好像是做分子
石蜡切片的制作
以石蜡制作的切片,可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蜡切片不但可以达到这个要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。这一点是冰冻切片和火棉胶切片难以获得的结果。另外,石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存。所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中
石蜡切片的制作
以石蜡制作的切片,可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蜡切片不但可以达到这个要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。这一点是冰冻切片和火棉胶切片难以获得的结果。另外,石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存。所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中
石蜡切片技术简介
石蜡切片(paraffin section)组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
石蜡切片和冰冻切片的比较
(1)要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片,这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。(2)冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细
石蜡切片与冷冻切片的区别
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组 织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片, 而那些稳
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
一、石蜡切片 把修好的蜡块装在旋转切片机上,即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利,切片厚度通常为5~7um,也可根据染色需要切成不同厚度,一般不旋转式切片机超过10um。切好的蜡带,放人40℃左右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕,切片厚度均一平整。切片如有上述
石蜡切片免疫荧光TUNEL和NEUN双标染色
石蜡切片免疫荧光TUNEL和NEUN双标染色曾经作过脑组织的TUNEL,也指导过别人做心肌的TUNEL,谈谈我的意见:蛋白酶K37度30min,好像有点偏长,我是10min。你是NBT/BICP显色的话,这说明你用的是AP系统,而不是HRP这样的话就不是用3%H2O2来去除内源性酶的了,(H2O2是