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1.PCR反应的最适条件4．1 TaqDNA聚合酶在早期进行的PCR反应中，使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段，，即Klenow片段。也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶。这两种酶的共同弱点是对热不稳定性，DNA合成反应只能在370C进行。PCR时每一循环的解链温度都在90C以上进行，故在每两个循环之间要加入新的DNA聚合酶，使得整过程整个实验过程很繁琐和昂贵。同时在370C，引物与DNA模板之间会发生分子非特异性结合，最终导致很多非特异性DNA片段的扩增。Taq 酶有耐高温的特性，其最适的活性温度是720C（75-80），连续保温30分钟仍具有相当的活性，而且在比较宽的温度范围内都保持着催化DNA合成的能力，一次加酶即可满足PCR操作过程自动化的实现。（1） TaqDNA聚合酶的热稳定性及最适延伸温度相对分子质量为94000的TaqDNA聚合酶的酶活性较高，大约为200000Umg，在合成时有一个较高的最适温度75-80C，......阅读全文
实验概要一种比较详细的PCR技术实验原理1. TaqDNA聚合酶在早期进行的PCR反应中，使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段，即Klenow片段。也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶。这两种酶的共同弱点是对热不稳定性，DNA合成反应只能在37°C进行。PCR时每一循环的解链温度都
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达zui灵敏，zui可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+
生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求： 1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA
优博生物技术有限公司开发的SYBR实时荧光定量PCR（Real-time PCR）就是在PCR反应体系中加入荧光染料与DNA双链的结合的原理，实时监测整个PCR进程，判定即时测定特异性产物的量和推断出初始基因的量，可快速、灵敏的检测样本的RNA和DNA，在动物病原体基因的检测，畜禽产品的检验检疫，生
测序技术的引入促使miRNA研究领域进入快速发展阶段，然而qPCR仍是验证测序数据的重要标准。本文将为您介绍使用qPCR进行miRNA分析的基本要点，希望能帮助新人快速入门。什么是miRNA？miRNA是一类小的非编码RNA，能够与RNA诱导沉默复合物（RISC）结合，通过作用于mRNA，进而介导转
——访德国耶拿生命科学部中国区经理诸建 分析测试百科网讯 2016年10月10-12日，2016上海慕尼黑分析生化展（analytica China 2016）的生命科学展馆里，德国耶拿生命科学部门首次以独立展位亮相并推出了一系列生命科学新技术与新产品，如革命性的核酸纯化技术Smart Ext
生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变
real time RT-qPCR 是检测样本中特定基因表达量的有效方法，包含逆转录步骤和定量PCR步骤。好的开始是成功的一半，获得高质量的、能正确反应样品中转录情况的RNA，对于其后的定量结果，自然是非常重要的。Mikael Kubista，教授, R&D TATAA Biocenter主
本贴先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信
DNA定点突变实验 实验方法原理 定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（
本文先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上： 在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。 实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：
本贴先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信
DNA定点突变可用于：（1）研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的不同活性或者动力学特性；（2）改造启动子或者DNA作用元件；（3）提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性、研究蛋白的晶体结构，以及药物研发、基因治疗等等方面。实验方法原理定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以
此方法可能很多师兄师姐们都在用，只是当时的确没有找到相关的详细说明，学弟再次把自己摸索出来的一点心得写出来，高手就多多指正，没做过的就相互学习下，见笑）由于课题组所需，我需要构建数量可观的真核表达载体和融合载体起初我也查到相关菌落PCR 的文献 ，和导师商量，导师一口回绝了他的理由和我所搜
这里，很多经常遇到的问题，比如引物设计，PCR体系和条件，电泳条带分析等，我没有一一详细列举，因为这些原因比较容易找到，我这里列举的可能多是些容易忽略的疑难杂症，希望对大家有帮助。（说了是疑难杂症了，可能有一些看法走极端了，但是为了做出实验，怀疑一切，狗急跳墙，没事找抽也是值得的）。1.引物设计引物
[摘要]由于人们生活质量水平的提高，对食品安全问题的关注度越来越高，在一定程度上食品检测技术水平得到了不断提高，从而使各种新设备、新技术不断应用于食品检测中。现如今，生物技术在食品检测中得到了广泛的应用，不仅提高了食品检测的精确度，而且拓展了食品检测的新方向，大大地提高了食品的安全性。文章就生物
DNA测序样品用什么溶液溶解比较好? 答：溶解DNA测序样品时,用灭菌蒸馏水溶解最好。DNA的测序反应也是Taq酶的聚合反应,需要一个最佳的 酶反应条件.如果DNA用缓冲液溶解后,在进行了测序反应时,DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体 系条件,造成Taq酶的聚合性能
KASP技术经验分享 KASP技术经验分享 KASP技术经验分享 重要的事情说三遍，终于可以开始实验了,但在实验前或实验中乃在实验后,根据小编多年的经验,您可能会遇到以下问题,不用担心,待小编为您一一解答. 1.引物设计提交序列时的注意事项有哪些？ 我们要求所提交的
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为10
关于平台期和线性期的问题，实际上线性期是指数期，只不过碰巧2的冥和2的倍数是相同的。看上去任何一个时期都可以，实际上是不对的，因为牵涉到酶促动力学的问题，这个我也不懂，有一些专门的文章，好像，涉及到很多化学的东西。我们学医的，也没必要知道那些，但是其中主要是因为模板引物酶原料和buffer之间的关系
生物通报道：造血干细胞是一群具有自我更新及分化能力的多能干细胞，可以分化为所有类型的成熟血液细胞，在机体中扮演了重要的角色，造血微环境对于造血干细胞行使功能具有关键的调控作用，但直到最近几年，造血微环境的细胞和分子基础才逐渐明晰。 近期来自City of Hope医学中心和第四军医大学的
重要的事情说三遍，终于可以开始实验了,但在实验前或实验中乃在实验后,根据小编多年的经验,您可能会遇到以下问题,不用担心,待小编为您一一解答.1.引物设计提交序列时的注意事项有哪些？我们要求所提交的序列长度至少为目标位点上下游各50bp。请注意序列来源，尽量保证序列准确，多态性位点BLAST结果证明为
RT2 Profiler PCR Arrays新手小技巧及注意事项（做了几百次PCR Array的Matt Finley博士的经验之谈） RNA纯化和分析: 起始RNA样品的质量是成功实验的最重要的因素之一。我强烈推荐使用QIAGEN的RNA纯化试剂盒来进行RNA纯化。RNA样品必须进行柱上DNa
PCR仪有哪些种类？ PCR仪的种类总体来说可以分为两大类： ①PCR扩增仪 ②实时荧光定量PCR仪 &
2014年7月10日，国际植物学领域著名期刊《Plant Cell》（5年影响因子为10.125）在线发表了北京林业大学的一项最新研究成果“The Cysteine Protease CEP1, a Key Executor Involved in Tapetal Programmed Cell
苏黎世联邦理工学院（ETH Zurich）的研究人员开发了确保测序质量的有效方法，并在此基础上获得了全面且准确的抗体图谱。这项研究发表在最近的Science Advances杂志上。 为了跟踪免疫系统激活后的抗体生成情况，研究人员对携带抗体生产指令的mRNA进行了测序分析。“近年来测序技术取得
目前，国内外针对微流控芯片上样品的前处理的方法和技术研究越来越多，最主要的技术有过滤、膜分离、液-液萃取、固相萃取、等速电泳和场放大堆积等。这些方法各有特色和优势，有的兼具样品提取和富集的功能。特别是固相萃取技术，其富集倍数甚至可达10^5，超过某些专门的样品富集技术。与其他前处理方法相比，固相萃取