PCR需要注意的一些问题
扩增长目的片段当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得最佳产量（图24）。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低，减少了较长产物的产量。将Taq DNA聚合酶同带有3'-5'外切核酸酶活性的热稳定DNA聚合酶混合，可以扩增最高为30kb的目的片段。Platunum Pfx DNA聚合酶（带有3'-5'外切核酸酶活性）也可以扩增较长产物（≤12kb）。除了选用正确的热稳定DNA聚合酶，较长产物的扩增还需要改变标准步骤的延伸时间、变性时间、缓冲液pH。按1分钟/kb增加延伸时间使聚合酶完成合成。一般对于有效的超长PCR，延伸温度会低至68℃。因为延伸时间较长，对于20kb的模板高达20分钟，所有使用较高起始pH的缓冲液。如果pH将至低于p......阅读全文
反向PCR引物设计需要同源臂吗
需要。用pcr扩的时候就把同源重组片段引入，vector酶切后5端选15nt，3'端选15nt分别加到正向引物和反向引物上，就做成了同源臂。同源序列是指在同一物种不同个体间或不同物种间相同或相似的DNA序列，而同源臂是指一段同源序列，类似于trna氨基酸臂的结构，所谓臂，指的是手臂样结构。引
PCR实验应当注意的问题
一、假阳性：实验中设立的阴性对照可提示有无假阳性结果出现。如果一次实验中的几个阴性对照中出现一个或几个阳性结果，提示本次实验中其它标本的检测结果可能有假阳性。造成假阳性的原因包括样品污染、扩增试剂污染、扩增产物交叉污染等。常见的污染来源包括实验室环境、加样器、操作中形成的喷雾、 DNA抽提仪器、试
PCR的操作注意事项
实验操作注意事项：尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：(1)戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套。(2)使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长
PCR的操作注意事项
实验操作注意事项：尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：(1)戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套。(2)使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长
大片段PCR的注意点
在实验室使用PCR仪进行PCR时，遇到3-5kb以上的大片段DNA时，许多同学的扩增结果往往出现假阴性，条带模糊等不理想的情况。那么对于大片段的DNA进行PCR时要注意哪些？怎样才能得到理想的结果呢？主要从以下方面入手更正：1,确定反应体系各组分的量是否足够（如引物量、模板量，镁离子量等）；2,确定
PCR的引物设计注意要点
引物（primers)：引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。引物的重要性：在整个PCR体系中, 引物占有十分重要的地位。PCR的特异性要求引物与靶DNA特异结合，不与其他非目的DNA结合，PCR的灵敏
ELISA实验需要注意的问题
实验室需要做elisa实验，在做的时候需要特别注意些什么问题呢？比如说样品稀释，加样，温育等方面。elisa实验中应该注意的问题，包括样品稀释、试剂盒平衡、样品和试剂的混匀、加样、温育等问题，希望对你有用处。Elisa试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点，深受广大用户朋友的喜爱。然而，在
糖类的摄入需要注意哪些？
蔗糖不宜大量摄入蔗糖是含有最高热值的碳水化合物，过量摄入会引起肥胖、动脉硬化、高血压、糖尿病以及龋齿等疾病。空腹不宜大量食用英国科学家研究发现：空腹大量吃糖，会使血液中的血糖突然增高，破坏机体的酸碱平衡与体内各种有益微生物的平衡，不利于人体健康。过多食用影响儿童发育吃糖过多可影响体内脂肪的消耗，造成
酶标仪的存放需要注意哪些？
随着行业的发展，酶标仪等仪器在实验室中的应用也越来越广泛，在种子检测实验室中，也能够经常看到它的身影，而作为一款光学类检测分析仪器，将其放在环境潮湿或灰尘较大的空间下存放，必然会影响其性能和使用寿命，因此为了提高其性能，让它能够更长时间、更好的为我们服务，在酶标仪的存放过程中，我们需要注意以
砝码定做需要注意的事项
砝码作为一种计量工具，有时候在使用的时候可能常规的规格，有时不能满足使用需求，这个时候就需要定做了，下面我们就以增砣砝码为例，来说说定做的情况；1.在订购砝码之前，我们需要确定好所需砝码的规格，材质，以及形状2.确定好砝码形状为增坨形状，我们就要确认砝码的尺寸，是按常规的做还是有没有尺寸要求。3.如
攻博需要注意的问题
中国的高等教育，尤其是研究生教育，自从大学扩招以来，其招生人数逐渐增加，到2015年博士招生超过了7万，当年毕业的博士也超过5万。美国从2006年到2015年，10年间共计培养了501695名博士，年均培养博士45219人。很显然，中国目前的博士培养人数已经超过了美国。美国在2006-2015年
RTPCR需要多大的细胞量及操作步骤
理论上50个cell就可以，但是实际操作中我只看到过牛人从100个cell里面提出来过（用LCM逮的），自己提弄过1000cell的。没有用kit。不同点是用BCP代替氯仿，并且加糖原助沉淀，具体的好处不是很清楚，但是BCP用量小，而且在cell少的情况下，使用糖原可以尽量的降低误操作。由于细胞的大
在线水质分析仪维护及校准时要注意的一些问题
在线水质分析仪维护及校准时要注意的一些问题 在线水质分析仪顾名思义就是用于分析水质的，包括其中含有哪些微生物，以及一些物理的指标和化学的指标。因为水质能够直接影响人体的健康，所以现在越来越多的人都十分的关注它。而一些自来水公司、矿泉水公司以及饮料行业等都需要使用到它。 生活用水的质量影响这国计
液相色谱中的需要分割峰积分需要注意什么
割相对基线的峰、、误差会小很多、、如果是用外标法（峰高）的话只需要割峰的起点和终点就可以了
细胞培养的一些问题
细胞培养常见问题1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？要冷藏！！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。2. 液体培养基中谷氨酰胺的作用
质粒提取的一些问题（二）
6．加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理？ 加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。也可用饱和酚、
能谱（EDS）的一些问题
无论扫描电镜还是透射电镜，现在购置的时候能谱几乎成了标配，因为价格相对电镜来说只有五分之一甚至六分之一，而且分析速度快，可以在线分析微区内样品组分，给出半定量或者定量结果，如果透射电镜有扫描附件，也和扫描电镜一样能给出漂亮的元素分布map，这对于实验结果来说，是一个很有益而且很直观的
质粒提取的一些问题（一）
1．溶液I—溶菌液： 溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。 葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。 EDTA：（1）螯合Mg
能谱（EDS）的一些问题
无论扫描电镜还是透射电镜，现在购置的时候能谱几乎成了标配，因为价格相对电镜来说只有五分之一甚至六分之一，而且分析速度快，可以在线分析微区内样品组分，给出半定量或者定量结果，如果透射电镜有扫描附件，也和扫描电镜一样能给出漂亮的元素分布map，这对于实验结果来说，是一个很有益而且很直观的支持。 但
地磅调试需要注意哪些？
调试就像道检验关口样，对个产品下线后般都会经过检验这道关，只有检验合格后才可称得上是合格品，大型设备都需要在出厂后进行调试才能被正式的投入使用，这样才能确保产品的有效性，但是在我们使用这些设备的过程中也总是会出现很多的问题，比如说我们生活中常见的电子地磅就需要经过严格的调试才能进行使用，在调试的过程
温度检测需要注意什么
温度是表征物体冷热程度的物理量，温度检测就是借助各种物体的热交换及冷热程度变化的物理特性加以间接检测。一.温度检测仪表的分类温度检测仪表按测温方式可分为接触式和非接触式两大类，接触式测温仪表一般分为膨胀式、压力式、热电偶和热电阻。通常来说，接触式测温仪表比较简单、可靠，测温精度较高。但由于受到耐高温
PCR注意事项（一）
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq
PCR注意事项（二）
3)如果没有回收到目的片段，还需要作什么对照实验？A）涂布未转化的感受态细胞。如有菌落，表明氨苄失效，或污染上带有氨苄抗型的质粒，或产生氨苄抗型的菌落。B）转化完整质粒，计算菌落生长数，测定转化效率。例如，将1ug/ul质粒1:100稀释,1ul用于100ul感受态细胞转化。用SOC稀释到1000u
PCR操作步骤及注意
PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段，并能轻易在皮克(pg)水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此，PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。它不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，
PCR注意事项（三）
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供应， 一种是从栖热水生
pcr技术中需要加入扩增仪中加入什么
A、PCR操作是在较高温度下进行的，A错误；B、扩增区域是由两种DNA引物来决定的，B正确；C、经过3次循环后才能得到所需的目的基因，C错误；D、扩增仪内需加入4种脱氧核糖核苷酸和耐高温DNA聚合酶，D错误．
PCR分子诊断POCT需要具备哪些基本要素？
分子诊断POCT是近几年的热门话题。作为未来分子诊断发展的热门方向，分子诊断POCT集合了小巧、灵活、方便、快速、精准等特点，在应用场景和应用领域上比传统的分子诊断更多更广。这也是目前国内外诊断企业纷纷布局这一领域原因。那么实现PCR分子诊断POCT一般需要具备哪些基本要素？01多重PCR技术一般来
血型检测前需要注意的事情
血型是人类血液的遗传性状，ABO血型系统是人类最重要的血型系统，ABO血型作为植入证据已在临床广泛应用，在临床输血工作中占有极其重要的地位，而ABO血型正反定型则是其鉴定的关键所在。引起正反定型结果不一致的原因有很多，其中，血液样本的因素对于鉴定结果有着不容忽视的意义，影响样本的因素包括被检测者的病
熔点仪的需要注意哪些事项
熔点仪运用光电检测、数字温度显示等技术，具有初熔、终熔自动显示等功能。温度系统应用了线性校正的铂金电阻作为检测元件，让实验过程与结果更为、准确。可广泛应用于化学工业、医药研究中，是生产药物、香料、染料及测量其他有机晶体物质的必备仪器。 熔点仪的注意事项： 1.样品必须按要求烘干，
熔点仪的需要注意哪些事项
熔点仪运用光电检测、数字温度显示等技术，具有初熔、终熔自动显示等功能。温度系统应用了线性校正的铂金电阻作为检测元件，让实验过程与结果更为、准确。可广泛应用于化学工业、医药研究中，是生产药物、香料、染料及测量其他有机晶体物质的必备仪器。 熔点仪的注意事项： 1.样品必须按要求烘干，