PCR需要注意的一些问题

扩增长目的片段当扩增大于5kb的目的片段时,可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得最佳产量(图24)。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段(大于5kb),可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性,不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低,减少了较长产物的产量。将Taq DNA聚合酶同带有3'-5'外切核酸酶活性的热稳定DNA聚合酶混合,可以扩增最高为30kb的目的片段。Platunum Pfx DNA聚合酶(带有3'-5'外切核酸酶活性)也可以扩增较长产物(≤12kb)。除了选用正确的热稳定DNA聚合酶,较长产物的扩增还需要改变标准步骤的延伸时间、变性时间、缓冲液pH。按1分钟/kb增加延伸时间使聚合酶完成合成。一般对于有效的超长PCR,延伸温度会低至68℃。因为延伸时间较长,对于20kb的模板高达20分钟,所有使用较高起始pH的缓冲液。如果pH将至低于p......阅读全文

PCR-清理时的注意事项

 PCR 净化其实并不是 DNA 提取技术本身,但它是一种效率高且简单的技术,它只是添加高浓度的结合盐(通常每体积 PCR 反应 3-5 体积盐)和离心来过滤。在实验过程中,PCR Clean-up 试剂盒出现故障也会导致整个实验功亏一篑。因为在PCR 反应中有较多吸收 260 度紫外线的物质,比如

配置PCR液时的注意方法

在做克隆鉴定的时候经常需要在酶切鉴定前进行PCR鉴定,每次配置PCR反应液很繁琐,可以将其配置类似kit的形式,按你需要的反应体系列表,然后放大100倍配置100×主反应液(100次反应),其中含buffer,Mg2+,dNTPs,但不含引物和Taq酶,然后可以10×分装或一管储存在-20度,在需要

PCR实验操作的注意事项

 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:    1.戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;    2.使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间

液相色谱中的需要分割峰积分需要注意什么

割相对基线的峰、、误差会小很多、、如果是用外标法(峰高)的话只需要割峰的起点和终点就可以了

PCR仪PCR注意事项及解决方案

1、PCR 污染PCR 技术的敏感性极高,极微量的污染即可导致假阳性的产生,因此,了解 PCR 污染的原因,采取相应的措施预防和消除 PCR 污染就十分重要。PCR 污染主要是随机污染,包括 PCR 反应前污染及反应后污染。(1)PCR 反应前污染主要是样品 DNA 的交叉污染。提取 DNA 使用的

温度检测需要注意什么

温度是表征物体冷热程度的物理量,温度检测就是借助各种物体的热交换及冷热程度变化的物理特性加以间接检测。一.温度检测仪表的分类温度检测仪表按测温方式可分为接触式和非接触式两大类,接触式测温仪表一般分为膨胀式、压力式、热电偶和热电阻。通常来说,接触式测温仪表比较简单、可靠,测温精度较高。但由于受到耐高温

地磅调试需要注意哪些?

调试就像道检验关口样,对个产品下线后般都会经过检验这道关,只有检验合格后才可称得上是合格品,大型设备都需要在出厂后进行调试才能被正式的投入使用,这样才能确保产品的有效性,但是在我们使用这些设备的过程中也总是会出现很多的问题,比如说我们生活中常见的电子地磅就需要经过严格的调试才能进行使用,在调试的过程

熔点仪的需要注意哪些事项

  熔点仪运用光电检测、数字温度显示等技术,具有初熔、终熔自动显示等功能。温度系统应用了线性校正的铂金电阻作为检测元件,让实验过程与结果更为、准确。可广泛应用于化学工业、医药研究中,是生产药物、香料、染料及测量其他有机晶体物质的必备仪器。   熔点仪的注意事项:   1.样品必须按要求烘干,

熔点仪的需要注意哪些事项

  熔点仪运用光电检测、数字温度显示等技术,具有初熔、终熔自动显示等功能。温度系统应用了线性校正的铂金电阻作为检测元件,让实验过程与结果更为、准确。可广泛应用于化学工业、医药研究中,是生产药物、香料、染料及测量其他有机晶体物质的必备仪器。   熔点仪的注意事项:   1.样品必须按要求烘干,

钳形表的使用需要注意哪些问题?

  1)测量前要机械调零,同时要对钳形表外观进行检查。  (2)选择合适的量程,先选大,后选小量程或看铭牌值估算。  (3)当使用最小量程测量,其读数还不明显时,可将被测导线绕几匝,匝数要以钳口中央的匝数为准,则读数=指示值×量程 / 满偏×匝数  (4)测量完毕,要将转换开关放在最大量程处。  (

药敏试验的操作需要注意什么?

药敏试验操作注意事项:(1)培养基的厚度对抑菌圈的大小有影响,故平皿中加入培养基要固定,以4mm深度为宜。制备的平板使用时应放于35℃温箱中30min去除过多的水分,以免影响抗菌药物的扩散。(2)接种细菌后应在室温放置片刻,待菌液被培养基吸收后,再贴纸片;但不宜放置太久,否则在贴纸片前细菌已开始生长

固相萃取需要注意的几点

固相萃取是近年发展起来一种样品预处理技术,由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来,主要用于样品的分离、纯化和浓缩,与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率,更有效的将分析物与干扰组分分离,减少样品预处理过程,操作简单、省时、省力。广泛的应用在医药、食品、环境、商检、化工等领域。萃取是利用系统

烟尘称重需要注意的多个环节

烟尘分析需要注意的多个环节:1 烟尘称重的设备支撑—电子天平的使用与维护  为了得到比较准确的采样前后滤筒的重量,这就需要准确度较高的、操作较简便的电子天平。实验室使用的是赛多利斯BSA224S-CW型天平,经检定为①级天平。因为它的准确度高,所以在使用过程中需要特别注意这样一些事项:电子天平应放置

熔点仪的需要注意哪些事项

熔点仪运用光电检测、数字温度显示等技术,具有初熔、终熔自动显示等功能。温度系统应用了线性校正的铂金电阻作为检测元件,让实验过程与结果更为、准确。可广泛应用于化学工业、医药研究中,是生产药物、香料、染料及测量其他有机晶体物质的*仪器。 熔点仪的注意事项:1.样品必须按要求烘干,在干燥和洁净的研钵中碾碎

腺病毒有什么需要注意的

你听说过腺病毒吗?这种病毒感染的症状与感冒的症状非常相似,但如果不及时治疗,可能导致肺炎。那么,如何识别和预防腺病毒呢?腺病毒是一种常见的致病微生物。这种病毒感染广泛存在于各个年龄段的人群中。它通常发生在六个月到五岁之间,尤其是两岁以下的儿童。作为一种呼吸道病毒,“腺病毒”现在是一种经常发生在人们生

箱式炉都有哪些需要注意的

  箱式炉采用数显仪表,控温精度高,可减少人为操作误差,提高工作效率,此外设备还配备急停按钮,超温报警功能,提高了设备使用的安全性。   箱式炉的注意事项:   1.定期检查温度控制系统的电器连接部分的接触是否良好,应特别注意加热元件的各连接点的连接是否紧固。   2.炉子使用或长时间不用时,

抗体检测需要注意的问题

  为了保证试验的特异性和敏感性,无论是颗粒性抗原、组织提取物、多肽抗原、重组抗原都必须纯化,否则容易产生非特异性反应。在应用标记免疫分析中,可引起本底数值的增高,极大地影响试验的准确性。在检测自身抗体时,许多抗原是用组织提取物,更应注意抗原的纯化问题。由于不同组织、器官间可存在相同抗原成分,使得同

血型检测前需要注意的事情

血型是人类血液的遗传性状,ABO血型系统是人类最重要的血型系统,ABO血型作为植入证据已在临床广泛应用,在临床输血工作中占有极其重要的地位,而ABO血型正反定型则是其鉴定的关键所在。引起正反定型结果不一致的原因有很多,其中,血液样本的因素对于鉴定结果有着不容忽视的意义,影响样本的因素包括被检测者的病

氨基柱使用需要注意的地方

氨基柱其固定相是以超纯全多孔球形硅胶为基质,通过采用独有的固定相键合技术,使用含有氨基丙基官能团的有机硅烷键合而成,能比硅胶柱更快达到平衡,对流动相的水含量没有硅胶柱敏感。适用于大多数正相色谱的应用,还可作为HILIC亲水作用色谱的固定相,可用于极性化合物的正相分析,弱阴离子交换以及含水的反相液相分

购买土壤养分速测仪的一些问题?

一、土壤养分速测仪购买之后,相关试剂药水该如何解决?对于大部分客户来说,在购买土壤养分速测仪后,一个zui为迫切知道的问题就是药水和相关试剂了,如果缺乏这些单单一个土壤养分速测仪,是无法做土壤肥力测试实验的。通常他们都会疑问在购买土壤养分速测仪后,还需要不需要购买这些药剂,价格是不是很贵?锦农科技对

干细胞的一些问题解惑!

在医学日渐发达的今天,我们常常看到干细胞救治疑难杂症患者,很多名人政要用干细胞抗衰老,相信很多人对干细胞这个名词已不陌生。但依旧有很多人不太了解这是什么?能干什么?甚至还有很多人把各种干细胞混为一谈,甚至提到造血干细胞就认为是人体内的“骨髓”,小编针对大家需了解的常识问题进行答疑。1、什么是干细胞?

离心机常见的一些问题?

  离心机的使用和维护是有很多问题需要注意和引起重视的,为了更好的使用离心机以及避免事故的产生,几个常见的问题: 问题1:离心机的摆放应该注意什么?      答:离心机一般放在干燥、避免阳光直射的地方。离心机散热量比较大,周围不要堆放杂物,四周离墙壁、挡板等不透气、散热性差的物品至少10cm以上。

关于外科导管的一些问题分析

外科治疗疾病的过程中,很多情况下会碰到积液的引流,感染物的引流,以及观察病情的需要,可能会留置一些导管。这些导管留置后,会碰到各种各样的问题,如:导管脱出,导管留置后的感染等问题。导管存留、去除的问题最佳的导管护理是包括没必要时避免插管,在穿刺时做好好的备皮和无菌预防,选择合适的导管(抗菌或抗感染的

PCR实验操作注意事项

 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:    1.戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;    2.使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间

PCR仪选购注意事项

PCR仪知识_PCR仪选购注意事项对于 选购PCR 仪来说升降温速率、温控准确性及范围、样本容量及热盖功能等无疑是用户最为关心的几个关键参数,下面我们就以 领成TCG5基础型PCR仪的相关参数作一说明。在选购PCR仪时,应该注意的几个关键参数: 1、最大(升/降)温速率 :升温速率4℃/s,降温速率

偏光应力仪的一些问题的说明

偏光应力仪PST-01仪器利用偏振场中的干涉色序原理,定性或半定量的测量玻璃的内应力,可以准确定量的测量出玻璃内应力数值。辅助更好的改进生产工艺,做出更好的产品。是制药企业、玻璃制品厂、检测机构作测量光学玻璃、玻璃制品及其它光学材料的检测仪器。一.仪器校准问题:由于整个校准过程太过繁复,如果直接由用

PCR代测服务之PCR操作环节注意事项

PCR检测微量感染因子时,容易因为污染的而导致各种问题,因此,进行PCR操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,zui大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。(1)划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现完全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区域

免疫PCR系列五免疫PCR要点与注意事项

一、免疫PCR要点(1)连接分子免疫PCR需要适当的连接分子连接报告分子和抗原抗体复合物。1 992年Sano用重组的链亲和素-蛋白A嵌合体作为连接分子,创立了免疫PCR技术。该融合蛋白的蛋白A可结合抗体的Fc段,链亲和素可结合DNA分子上的生物素,Sano利用此连接分子把一段生物素化的DNA(PU

全自动卡尔费休水分测定仪使用中应注意的一些问题

现在在化工、制药等职业中,对原材料和有些制品中的游离水或结晶水的检查遍及选用卡尔费休水份测定仪。在检查了很多进口的、国产的各类型仪器以及各职业检查人员中,就卡尔-费休水分测定仪运用中存在的有关疑问提出沟通。1、卡尔费休水份测定仪试剂滴定度(俗称水当量)的标定 卡尔-费休试剂的滴定度的标定精确与否,直

全自动卡尔费休水分测定仪使用中应注意的一些问题

现在在化工、制药等职业中,对原材料和有些制品中的游离水或结晶水的检查遍及选用卡尔费休水份测定仪。在检查了很多进口的、国产的各类型仪器以及各职业检查人员中,就卡尔-费休水分测定仪运用中存在的有关疑问提出沟通。1、卡尔费休水份测定仪试剂滴定度(俗称水当量)的标定 卡尔-费休试剂的滴定度的标定与否,直接关