PCR需要注意的一些问题
扩增长目的片段当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得最佳产量（图24）。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低，减少了较长产物的产量。将Taq DNA聚合酶同带有3'-5'外切核酸酶活性的热稳定DNA聚合酶混合，可以扩增最高为30kb的目的片段。Platunum Pfx DNA聚合酶（带有3'-5'外切核酸酶活性）也可以扩增较长产物（≤12kb）。除了选用正确的热稳定DNA聚合酶，较长产物的扩增还需要改变标准步骤的延伸时间、变性时间、缓冲液pH。按1分钟/kb增加延伸时间使聚合酶完成合成。一般对于有效的超长PCR，延伸温度会低至68℃。因为延伸时间较长，对于20kb的模板高达20分钟，所有使用较高起始pH的缓冲液。如果pH将至低于p......阅读全文
PCR需要注意的一些问题
PCR需要注意的一些问题扩增长目的片段当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得zui佳产量）。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低
PCR需要注意的一些问题
扩增长目的片段当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得最佳产量（图24）。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低，减少了较长产物的产量
pcr需要注意的问题
1、PCR产物的电泳检测时间：一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。2、假阴性，不出现扩增条带模板：模板中含有杂蛋白质，模板中含有Taq酶抑制剂，模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。模板核酸变性不彻底。在酶和引物质
PCR扩增需要注意的点
1. 引物的质量是保证PCR特异性的关键，引物过长或过短均会使特异性降低，以18～30bp为宜；引物中C+G含量宜在50%左右；引物内部和引物之间不应含有互补序列；引物的碱基顺序与非扩增区域的同源性应小于70%；引物的3’末端与模板DNA一定要配对，但末端没有严格的限制，故引物设计时可在5’末端加上
电感耦合等离子体光谱仪时需要注意一些问题
1、操作电感耦合等离子体发射光谱仪时，使用者应该做好安全防护准备，如戴好安全帽等。此外，如果在带电的领域进行作业，使用者还要听从相关负责人的指导，并且在规定的地面上进行升降操作。否则，也许一个小小细节的疏忽，将有可以引起一场不可挽回的悲剧。 2、在操作电感耦合等离子体发射光谱仪，倘若发现动力系统无
二次PCR需要注意什么问题
二次PCR实际上与AFLP基本一样，做AFLP一般要进行预扩增和选择性扩增，而选择性扩增就是二次PCR。 有时在预扩增后直接取样品做选择性扩增，条带数很少，而且在PAGE觉上染色不明显，背景很深。预扩增后的产物稀释至少10－20倍，有时甚至要稀释100倍才能在选扩时候扩增出来DNA条带，这样扩增出来
操作ABI－PCR仪时需要注意的事项有哪些？
1.PCR引物设计： 引物设计可能是PCR扩增成功zui关键的因素。如引物设计欠佳，可能导致扩增产物不足，甚至扩增失败，其原因是设计欠佳的引物可导致非特异扩增和/或形成引物二聚体，此又成为PCR反应的竞争性产物，从而进一步抑制PCR产物形成。 在引物设计时必须考虑以下几个因素，其中zu
选购荧光定量PCR仪需要注意的几个关键参数
选购荧光定量PCR仪时，需要注意的几个关键参数：1.仪器的检测通量（Throughput）首先要考虑实验室目前需要使用定量PCR仪的频率。加州大学旧金山分校癌症中心的基因组分析设备负责人David Ginzinger检测过市面上绝大多数的定量PCR仪。他表示，如果不是大规模批量使用，比如说主要是用
操作ABI－PCR仪时需要注意的事项有哪些？
操作ABI PCR仪时需要注意的事项有哪些？ 1.PCR引物设计： 引物设计可能是PCR扩增成功最关键的因素。如引物设计欠佳，可能导致扩增产物不足，甚至扩增失败，其原因是设计欠佳的引物可导致非特异扩增和/或形成引物二聚体，此又成为PCR反应的竞争性产物，从而进一步抑制PCR产物形成。
选购荧光定量PCR仪时需要注意的几个关键要点
选购荧光定量PCR仪时，需要注意的几个关键要点：1.仪器的检测通量（Throughput）首先要考虑实验室目前需要使用定量PCR仪的频率。加州大学旧金山分校癌症中心的基因组分析设备负责人David Ginzinger检测过市面上绝大多数的定量PCR仪。他表示，如果不是大规模批量使用，比如说主要是用
选购荧光定量PCR仪时需要注意的几个关键要点
选购荧光定量PCR仪时，需要注意的几个关键要点：1.仪器的检测通量（Throughput）首先要考虑实验室目前需要使用定量PCR仪的频率。加州大学旧金山分校癌症中心的基因组分析设备负责人David Ginzinger检测过市面上绝大多数的定量PCR仪。他表示，如果不是大规模批量使用，比如说主要是用来
撰写SCI论文应注意的一些问题
论文写作上，许多牛人都给出了各自的经验，我虽然发表过许多论文，但是真正自己写的并不多，所以也无所谓有价值的经验，尤其是英文的基础十分不够，看看论文找点毛病的尚可应付，真的让我写篇论文，感觉仍然是非常痛苦的工作。 不过写论文我觉得首先要在战略上藐视。首先我们知道写论文不是写作文，一般可以有比较充
pcr技术扩增dna需要的条件
①PCR技术需要目的基因作为模板，①正确；②PCR技术中需要一对引物，②正确；③PCR技术中需要四种脱氧核苷酸作为原料，③正确；④PCR技术是体外扩增DNA的，不需要mRNA，④错误；⑤PCR技术需要热稳定DNA聚合酶等，⑤正确；⑥PCR技术是体外扩增DNA的技术，不需要核糖体，⑥错误．
多重pcr需要考虑的因素有哪些
多重PCR的特点有:①高效性在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是用一滴血就可检测多种病原体.②系统性多重PCR很适宜于成组病原体的检测
PCR实验建设需要遵循的规范汇总
《实验室生物安全通用要求》国家标准GB19489-2008《临床基因扩增检验实验室工作规范》卫医发[2002]8号文《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》卫医发[2002]10号文《临床基因扩增检验实验室设计标准》卫医发[2002]10号文附件《基因检验实验室技术要求》国家质监检验总局SN/T119
黑光诱虫灯诱测中应该注意的一些问题
在应用黑光灯进行诱测工作中，应该注意以下几点： (1)应用黑光灯进行有趋光性森林害虫测报时，要求测报工作人员具有高度责任感和娴熟的业务技术。要做到认真观察、详细记载、及时分析和准确测报。 (2)力求黑光灯设备(如黑光灯瓦数等)、安装地点、高度，一年中开灯天数、一夜中开启、闭灯时间等，在每年中
pcr技术扩增dna需要的条件是什么
Pcr 技术扩增DNA 需要的条件是:DNA模板链，脱氧核苷酸原料， TaqDNA的聚合酶，引物等。
PCR、qPCR、dPCR你需要知道的事儿
上世纪八十年代Cetus Corporation公司的化学家Kary Mullis发明了PCR，如今DNA扩增俨然已经成为了生物学研究的基础。三十多年以来，人们为了解决研究中出现的新问题新需求，不断对这一经典技术进行改良。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，PCR技术在不断
PCR中子链延伸阶段需要的酶是
DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶，高保真的pfu等）DNA聚合酶的作用是以一条DNA单链为模板，将三磷酸脱氧核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接成为与单链互补的另一条单链。
pcr技术扩增dna需要的条件是什么
Pcr 技术扩增DNA 需要的条件是:DNA模板链，脱氧核苷酸原料， TaqDNA的聚合酶，引物等。
PCR、qPCR、dPCR你需要知道的事儿
上世纪八十年代Cetus Corporation公司的化学家Kary Mullis发明了PCR，如今DNA扩增俨然已经成为了生物学研究的基础。三十多年以来，人们为了解决研究中出现的新问题新需求，不断对这一经典技术进行改良。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR，PCR技术在不断蜕变却从
PCR应该注意的事项
出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数 过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出
PCR产物是否需要用凝胶纯化？
如凝胶分析扩增产物只有一条带,不需要用凝胶纯化。如可见其他杂带,可能是积累了大量引物的二聚体。少量的引物二聚体的摩尔数也很高,这会产生高比例的带有引物二聚体的克隆,而非目的插入片段。为此需在克隆前做凝胶纯化。
PCR实验时需要设置阳性内参照的目的
保证你检测的每个样品的均一性，保证检测结果的可比性，如果某一个样品中对PCR扩增有干扰作用，那么就会体现在阳性内参照的结果上，阳性内参照做出来是阴性或者比正常阳性内参照的值要低。
介绍露点仪在测量中应注意的的一些问题
露点仪是能直接测出露点温度的仪器。使一个镜面处在样品湿空气中降温，直到镜面上隐现露滴（或冰晶）的瞬间，测出镜面平均温度，即为露（霜）点温度。它测湿精度高，但需光洁度很高的镜面，精度很高的温控系统，以及灵敏度很高的露滴（冰晶）的光学探测系统。使用时必须使吸入样本空气的管道保持清洁，否则管道内的
PCR注意事项
PCR注意事项PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋
免疫PCR(IMPCR)注意事项
免疫PCR(IM-PCR)注意事项 (1)固相载体的选择：主要取决于抗原在固相载体上的吸附程度。如果抗原吸附良好，可以进行IM-PCR。如果抗原吸附不良，则需选用双抗体夹心IM―PCR。另外选用的固相载体要和PCR仪器相匹配。一般用0.5ml的塑料反应管，也可以用微量滴定板。 (2)
什么情况下需要做降落PCR？
主要是在出现非特异条带时可以考虑用降落PCR,在高的退火温度下做几个循环,这样扩出的产物特异性好,可以做为后续反应的模板,然后再温度较低的情况下以前面扩出来的较特异的产物做模板,这样不但特异性好,而且产物也够多,可以出现很好的结果。还有就是在刚合成引物还未经鉴定效果的时候,可以用降落PCR ,但是正
荧光定量pcr每个循环需要数据收集吗
是啊，每个循环的延长期结束，就是测量数据的时候。
什么情况下需要做降落PCR？
主要是在出现非特异条带时可以考虑用降落PCR,在高的退火温度下做几个循环,这样扩出的产物特异性好,可以做为后续反应的模板,然后再温度较低的情况下以前面扩出来的较特异的产物做模板,这样不但特异性好,而且产物也够多,可以出现很好的结果。还有就是在刚合成引物还未经鉴定效果的时候,可以用降落PCR ,但是正