质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳

(一)碱变性法提取质粒DNA 质粒(Plasmid) 是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息,可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。 分离和纯化质粒DNA的方法很多,但这些方法基本包括三个步骤:即细菌的培养和质粒DNA的扩增,细菌菌体的裂解; 质粒DNA的提取与纯化。 本实验学习用碱变性方法提取质粒DNA。 【原理】 细菌培养物加入SDS和NaOH 碱性溶液处理后,菌体裂解,可使细菌的质粒DNA、染色体DNA和RNA一起从细胞内释放出来,经琼脂糖凝胶电泳,因各种核酸分子的迁移率不同将上述核酸分成不同的带。用溴化乙锭(EB)染色后,在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光。根据荧光的位置,可区分不同的核酸带。 【材料......阅读全文

质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳

(一)碱变性法提取质粒DNA   质粒(Plasmid) 是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息,可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。  

质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测

质粒(Plasmid)是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息,可赋予细菌某些新的表型。分离和纯化质粒DNA的方法很多,但这些方法基本包括三个步骤:即(1)细菌的培养和质粒DNA的扩增;(2)细菌菌体的裂解;(3)质粒DNA的提取与纯化。实验方法原理1、碱变性法提取质粒DNA:细菌

质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测

实验材料 E.coliJM109E.coliRRI试剂、试剂盒 TE缓冲液KAc溶液葡萄糖Tris.HclLB液体培养基仪器、耗材 离心机EP管恒温培养箱凝胶槽电泳仪

质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测

质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测             实验方法原理 1、碱变性法提取质粒DNA:细菌培养物加入SDS和NaOH碱性溶液处理后,菌体裂解,可使细菌的质粒DNA、染

质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定实验

实验材料 琼脂糖试剂、试剂盒 溴化乙锭仪器、耗材 琼脂糖凝胶电泳装置紫外灯实验步骤 1.  琼脂糖凝胶电泳装置 由于琼脂糖凝胶电泳既要求不高,而适应性又强,在过去15年里已成功地设计了形形色色及大大小小的电泳槽。对这些装置的选择主要是依据个人的喜恶。使用最普遍的装置是Walter Schaffner

质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定实验

实验材料琼脂糖试剂、试剂盒溴化乙锭仪器、耗材琼脂糖凝胶电泳装置紫外灯实验步骤1.  琼脂糖凝胶电泳装置 由于琼脂糖凝胶电泳既要求不高,而适应性又强,在过去15年里已成功地设计了形形色色及大大小小的电泳槽。对这些装置的选择主要是依据个人的喜恶。使用最普遍的装置是Walter Schaffner发明的水

质粒DNA的抽提、沉淀及琼脂糖凝胶电泳

一、实验目的·学习酚、氯仿抽提去除蛋白质的基本方法·了解质粒DNA的抽提方法·学习掌握琼脂糖凝胶电泳的方法·熟练取液枪的使用方法二、实验原理·在DNA的粗提液或其他的DNA反应体系中,一般都混有蛋白质、寡糖苷酸等杂质。酚和氯仿可以使蛋白质变性,离心后变性蛋白质存在于有机相和水相之间的界面,吸取上层含

DNA,质粒的琼脂糖凝胶电泳及PCR结果图分析

质粒电泳图那个除了很亮的那个是质粒,上面细细的那带应该是基因组的;PCR结果比较差,基本上是没跑好了,再优化体系和问题跑跑看吧。

DNA,质粒的琼脂糖凝胶电泳及PCR结果图分析

质粒电泳图那个除了很亮的那个是质粒,上面细细的那带应该是基因组的;PCR结果比较差,基本上是没跑好了,再优化体系和问题跑跑看吧。

质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳(agarose-gel-electrophoresis)

带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳的种类多,应用非常广泛,它已成为分子生物学技术中分离生物大分子的重要手段。琼脂糖凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点,已成为分离和鉴定核酸的常用方法。实验目的:掌握琼脂糖凝胶电泳的原理,学习琼脂糖凝胶电泳的操作。实验材料:质粒DNA、BAC、植物总DN

质粒DNA琼脂糖凝胶电泳图该怎么分析

想分析这种结果,  首先,写明你在做什么样的实验,使用的是什么材料、什么技术,实验目的是什么。  其次,写明每块胶浓度多少,每个加样孔里是什么样品,marker每条带对应的是多大的DNA。  再次,写明哪些条带和你预期结果一致,哪些条带和你预期结果不一致。  最后,写明结果不一致有哪些可能原因。

质粒DNA琼脂糖凝胶电泳图该怎么分析

一、实验名称:质粒DNA的提取与纯化,DNA琼脂糖凝胶电泳 二、实验原理: 1.质粒DNA的提取: 质粒是一类存在于几乎所有细菌等微生物中染色体之外(细胞质中)呈游离状态的双链、闭环的DNA分子,能够自主复制和稳定遗传,以超螺旋形式存在,是最常用的基因克隆载体。除质粒外,大肠杆菌中还含有基因组DNA

质粒DNA的酶切和琼脂糖凝胶电泳鉴定

[实验原理]限制性内切酶识别短的DNA序列并在识别序列内或旁侧特异性切割双链DNA。对环状DNA有多少切口,就能产生多少个酶解片段,因此鉴定酶切后的片段在电泳凝胶中的区带数,就可以推断酶切口的数目,从片段的迁移率可以大致判断酶切片段大小的差别。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。D

质粒DNA琼脂糖凝胶电泳图该怎么分析

想分析这种结果,  首先,写明你在做什么样的实验,使用的是什么材料、什么技术,实验目的是什么。  其次,写明每块胶浓度多少,每个加样孔里是什么样品,marker每条带对应的是多大的DNA。  再次,写明哪些条带和你预期结果一致,哪些条带和你预期结果不一致。  最后,写明结果不一致有哪些可能原因。

质粒DNA提取实验

实验方法原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。 提取质粒的基本步骤分为三步:①细菌的培养和质粒的扩增②细菌菌体的裂解③质粒DNA的纯化实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒

质粒DNA提取实验

碱解法SDS碱裂解法(试剂盒提取)实验方法原理碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质,通过离心除去。实验材料大肠杆菌                              

质粒DNA提取实验

            实验方法原理 碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质,通过离心除去。

质粒DNA的提取

实验概要        通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒。实验原理         碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA

质粒DNA提取技术

实验概要通过本实验,学习和掌握碱裂解法提取质粒的方法和技术。实验原理质粒是基因工程中常用的载体之一。质粒是染色体外小型双链环状的DNA,大小在1~200kb之间。碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们的。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线

DNA酶解及DNA片段琼脂糖凝胶电泳

【目的要求】1.掌握限制性核酸内切酶概念、特点及作用原理,DNA酶解技术的应用2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段原理及其操作3.熟悉电泳基本原理及其影响因素【教学内容】1.限制性核酸内切酶概念、特点及作用原理,DNA酶解技术的应用2.DNA片段琼脂糖凝胶电泳3.电泳概念、分类、应用、基本原理及其影

质粒DNA限制性酶切及琼脂糖凝胶电泳分离鉴定1

实验原理一、DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:I类和III类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。III类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的D

质粒DNA限制性酶切及琼脂糖凝胶电泳分离鉴定2

EcoRI酶及其酶切缓冲液;HindⅢ酶及其酶切缓冲液;琼脂糖(Agarose)。 二、 器材    电泳仪, 台式高速离心机, 恒温水浴锅, 微量移液枪, 微波炉, 琼脂糖凝胶成像系统。 操作方法 一、 DNA酶切反应 1. 用微量移液枪向灭菌的eppendorf管

质粒DNA提取实验步骤

质粒DNA提取可以:(1)快速纯化质粒;(2)用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。实验方法原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。  

人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析

实验目的: 1. 熟悉分子生物学实验的操作特点。 2.掌握人类基因组DNA提取的基本原理。 3.熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。 4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。 实验原理: 用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,加入SDS破裂核膜,用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来,经苯酚

人类基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析

实验目的:  1.熟悉分子生物学实验的操作特点。  2.掌握人类基因组DNA提取的基本原理。  3.熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。  4.熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。实验原理:  用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,加入SDS破裂核膜,用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来,经

质粒DNA提取时质粒为何会丢失

中稳定存在,经多次转接后有可能造成质粒丢失。因此不要频繁转接,每次接种时应接种单菌落。另外,检查筛选 用

质粒的琼脂糖凝胶电泳及PCR结果图分析

质粒电泳图那个除了很亮的那个是质粒,上面细细的那带应该是基因组的;PCR结果比较差,基本上是没跑好了,再优化体系和问题跑跑看吧。

大肠杆菌质粒DNA的提取及转化

实验概要本实验包括大肠杆菌质粒DNA的提取,质粒DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定,大肠秆菌感受态细胞的制备及质粒DNA高频转化大肠杆菌。实验步骤1. 大肠杆菌质粒DNA的提取碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:   1) 接1%含质

质粒DNA的提取与纯化

一、实验目的与原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步:①细菌的培养和质粒的扩增,②细菌菌体的裂解,③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方

碱裂解法提取质粒DNA

实验目的1、掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法;2、了解制备原理及各种试剂的作用。实验原理碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质,通过离心除去。细菌质粒是一类双链、闭环