酵母基因组DNA简易高效提取方案

1. 10ml菌液过夜培养至饱和(OD600值为2-3) 2. 离心沉降细胞(Sorvall中以2000rpm的速度),然后以冷的、等体积的无菌蒸馏水洗涤 3. 将细胞沉淀在200μl 裂解缓冲液中重悬浮,然后加入约300μl 玻璃珠和200μl的1:1苯酚:氯仿混和液 4. 漩涡摇匀1-2min 5. 加入200μl的 TE缓冲液,倒置混合6-10次。注意:从这步开始漩涡摇匀可能会剪切DNA 6. 在微型离心机中以13000rpm的速度离心样品5min 7. 将上层的水相转移到干净的微量离心管中8. 加入1体积(400μl)氯虏⒎旌蟤ix by inversion 9. 同第6步离心 10. 将上层的水相转移到新的微量离心管中 11. 加1ml乙醇,翻转混匀 12. 在微型离心机中以13000rpm的速度离心2min&nbs......阅读全文

动物组织细胞基因组DNA提取

一、实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA.真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液

基因组DNA提取与PCR扩增技术

一、基因组DNA提取实验目的基因组DNA的制备是基因分析的前提。 本实验要求掌握基因组DNA提取的基本方法。实验原理 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的。核酸与蛋白质之间的结合力包括离子键、氢键、范德华力等,破坏或降低这些结合力就可把核酸与蛋白分开。 DNA、RNA所含有的嘌呤环和嘧啶

动物组织细胞基因组DNA提取

一、实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液

单头昆虫基因组DNA的提取

实验概要一种简单快速提取单头小型昆虫基因组DNA的方法。主要试剂1. 蛋白酶K[美国Merck公司]2. 三羟甲基氨基甲烷(Tris)[美国Amresco公司]3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]4. 琼脂糖及溴化乙锭(EB)[美国Amresco公司]5. 乙二胺四乙酸钠(Na2EDT

利用CTAB法提取植物基因组DNA

一、实验原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物,该复合物在高离子强度(0.7mol/L)的溶液里是可溶的,通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。在酚仿变性的条件下,去除残留的CTAB和蛋白质等杂质,然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分

提取基因组DNA的方法有哪些

1、苯酚氯仿抽提法优点是采用了实验室常见的试剂和药品,做起来成本比较低廉。缺点是由于使用了苯酚、氯仿等试剂,毒性较大,长时间操作对人员健康有较大影响,而且核酸的回收率较低,损失量较大,由于操作体系大,不同实验人员操作重复性差,不利于保护RNA,很难进行微量化的操作。 2、离心柱法离心柱法DNA提取它

动物细胞基因组DNA提取实验

实验原理真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,制备DNA将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,同时保持DNA分子的完整。提取DNA的过程是指将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从

IgG的简易快速提取法

应用硫酸铵盐析及DEAE-纤维素层析法提纯化的IgG,不仅操作复杂、需时较长,处理过程中样品体积大大增加,而且透析时变性严重,容易引起抗体效价降低等。为了克服这一不足,特别是当大量提取IgG时,则往往采取下列的简易办法。一、DEAE-纤维素直接提取法取样品直接过DEAE-纤维素柱。下面介绍的是最为简

提取基因组dna后,怎样判断dna的纯度和质量

用紫外分光光度计测od值a260/a280正常1.8左右如果制备的dna样品a260/a2802,说明样品中rna过高,可用rnase消化后,用酚、氯仿、异戊醇抽提,再用乙醇沉淀dna

磁珠法提取基因组DNA的原理

(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生

知识分享:动物细胞基因组DNA提取

  实验原理   真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,制备DNA将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,同时保持DNA分子的完整。提取DNA的过程是指将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉

使用离心机提取植物基因组DNA

植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做?具体步骤怎么样?植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。(这时选择设备的时候注意选择那种通用性强的,可以一机配多种

GenStar基因组DNA提取纯化产品选择指南

基因组DNA相对稳定,故其提取方法也相对简单。通常细胞通过表面活性剂处理,释放出基因组DNA,经过蛋白酶和RNA酶消化后,经有机溶剂抽提和乙醇沉淀或过柱纯化即可获得一定量的基因组DNA。目前商品化的基因组DNA提取试剂盒分为溶液型和离心吸附柱型两种。溶液型产品价格经济,产率高,可获取适用于建立文库的

如何从粪便中快速提取基因组DNA

粪便基因组DNA快速提取方法,无抑制物,可直接做PCR。采用硅胶膜技术从新鲜或冷冻人类粪便或其他样品类型(混有高浓度的PCR抑制剂)中抽提多至30μg 的基因组、细菌、病毒和寄生物DNA。独特的吸附树脂配合经优化的缓冲液可去除PCR抑制剂。方便的Aidlab 离心柱纯化过程只需40分钟,用于

微量基因组DNA提取试剂盒说明

本试剂盒提供了高效、快速从各种微量生物样本中纯化得到较高浓度基因组DNA的方法,例如:微量血液、细胞、动物组织、干燥血迹、临床棉签、毛囊等。采用本公司特有的DNA-only硅胶膜离心柱和配方,搭配Foregene Protease,可以在20-80分钟提取到较高浓度、高质量的基因组DNA。专

磁珠法提取基因组DNA的原理

(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生

基因组DNA提取纯化的注意事项

大多数动物组织可以用裂解缓冲液和蛋白酶/蛋白酶 K 进行高效裂解。在加入裂解液之前需要将组织切成小块,有条件的话建议使用 TissueLyser 或研钵等提前进行均质化。骨骼肌,心脏,皮肤等组织含有收缩蛋白,结缔组织和胶原蛋白,所以利用蛋白酶 / 蛋白酶 K 进行充分消化是必须的。FFPE

磁珠法提取基因组DNA的原理

a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生物

磁珠法提取基因组DNA的原理

(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生

基本方案2-基因组-DNA-的扩增

实验材料基因组DNA试剂、试剂盒4dNTP 混合物10 X PCR 扩增缓冲液寡聚核苷酸引物Taq DNA 聚合酶矿物油筛(子)琼脂糖DNA 分子大小标准参照物仪器、耗材聚丙稀微量离心管循环变温加热器实验步骤

技术和方案26-小量提取E.coli-DNA

试剂、试剂盒Terrific broth实验步骤1.将单菌落接种于 3 ml 含有 100 ug/ml 氨节青霉素的 Terrific broth 培养基中,37°C 培养过夜。2.取 1.5 ml 细胞悬液于微量离心管中,13000 r/min 离心 1min,弃去上清。3.加入 100 ul 溶

酵母的高效转化

酵母的高效转化1.接种5ml液体YPAD或10ml SC,30℃下振荡培养过夜。2.计数过夜培养物细胞密度,以最终5×106个/ml的细胞密度接种50ml YPAD培养液。3.置30℃,200r/min振荡培养至2×107个细胞/ml,通常需要3~5小时,该培养物的细胞足够供十次转化用。4.用50m

方法二:细菌基因组DNA的微量提取法

本方法通过SDS裂解细胞,蛋白酶降解蛋白,CTAB去除多糖成分一:仪器:同方法一 二:试剂:TE、TAE缓冲液;10%SDS;5MNaCL;20mg/ml蛋白酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB,0.7M NaCL  4.1gNaCL 溶于80ml水中,缓慢加入10gCTAB,加热溶解);

如何使用离心机提取植物基因组DNA

就那植物来说吧!原理是一致的.方法不同. 1植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子. 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒. 三、试剂 1、提取缓冲液Ⅰ:100mmol/L Tris·Cl,pH8

植物基因组DNA及总RNA提取技术1

幼嫩组织的细胞处于旺盛的分裂阶段,核较大而胞质较少,核酸浓度高,且内含物少、次生代谢产物少,蛋白质及多糖类物质相对较少,在SDS或 CTAB物质存在时,经机械研磨,使细胞破裂并释放出内含物,提取的DNA、RNA的产量高,纯度好。 提取DNA所用的提取液、吸头、离心管等需要高压灭菌以灭活DNase。R

提取的基因组DNA有降解如何解决

选取的材料不新鲜或反复冻融,采集材料后未及时处理或未低温保存:陈旧血液或不新鲜的材料中,细胞凋亡导致DNA降解,或者低温保存的样品经反复冻融导致细胞破碎,内源性核酸酶降解DNA,因此应该选用新鲜的材料样品,不能及时处理则低温保存,运输过程中应该使用干冰: 1 ) 未能有效的抑制内源性核酸酶的作用

植物基因组DNA及总RNA提取技术2

(二)植物总RNA提取 (1)65°C水浴中预热15 mL CTAB提取液。 (2)液氮中研磨2~3 g新鲜或-70°C冷冻的材料。 (3)转移样品至有CTAB提取液的离心管中,立即激烈涡旋30s,短时放回 65°C水浴中(4~5 min)。 (4)加入等体积的氯仿/异戊醇并涡旋混合,10000 r

细菌基因组DNA快速提取试剂使用说明

细菌基因组DNA快速提取试剂◆ 产品说明核酸抽取系列是检测试剂配套使用的DNA/RNA提取系列产品。本产品为细菌基因组DNA快速提取试剂,采用独特的溶解系统,可快速地从样品中制备DNA。提取过程中无需使用有毒的酚氯仿,也无需进行耗时的醇类沉淀,整个过程只需10-15分钟。◆ 产品组成 071011M

细菌基因组DNA提取试剂使用说明(二)

三.组织或液体样品中细菌DNA提取该方案适合于从各种组织、血液、分泌液等液体样品中提取基因组DNA和寄生的细菌DNA。纯化的DNA可直接用于各种细菌的检测。若需从粪便样品中提取细菌DNA,我们推荐使用DePure Stool DNA Kit,若需要从土壤样品中提取细菌DNA,推荐使用DePure

如何使用离心机提取植物基因组DNA

   如何使用离心机提取植物基因组DNA植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做?具体步骤怎么样?植物组织提取基因组DNA 一、材料www.runwelltac.com 幼嫩叶子。 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,