关于柱层析的实验方法和技巧

(注意:有机溶剂对身体特有害别是心肺;肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行!!)常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。 1、柱子可以分为:加压,常压,减压压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗......阅读全文

小分子样品采用柱层析的分离纯化方法

在很多化学药品的原料药合成制备过程中,有可能遇到无法重结晶,只能靠过柱分离来纯化的样品。 目前,利穗科技纯化过以及涉及到的化学药品有数百种,使用到的填料种类和纯化方法也有几十种。目前比较有新意和比较常用的方法有:高效正相硅胶层析柱法、反相C18高效DAC柱层析法、大孔吸附树脂法、高效树脂纯化法、DE

ELISA试剂盒的实验误差和血清解冻操作技巧

ELISA试剂盒实验误差可分为以下三种:系统误差:指一系列测定结果与真值或靶值存在有同一倾向的误差,有明显的规律性,可在一定条件下重复出现,是可以通过质控预防和校正的。随机误差:又称偶然误差,是一种偶然的、未能预料到的误差,是难以避免和校正的误差。检验工作中随机误差的分布符合正态分布规律。过失误差:

免疫组化实验过程中的要点和技巧

1.固定:最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片,甲醛固定有时比冰冻丙酮好;但对于不同的组织和抗原,可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液,请于购置前注意说明书。 Bouin S固定液:饱和苦味酸750ml,甲醛250ml,冰醋酸50ml,其对组织的穿透力较强,固定较好

免疫组化实验过程中的要点和技巧

1.固定:最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片,甲醛固定有时比冰冻丙酮好;但对于不同的组织和抗原,可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液,请于购置前注意说明书。 Bouin S固定液:饱和苦味酸750ml,甲醛250ml,冰醋酸50ml,其对组织的穿透力较强,固定较好

ELISA实验中的小技巧

ELISA试剂盒的影响因素应选用质量靠得住的产品,不能图便宜,忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内,在使用时先平衡至室温,不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完,剩余的试剂下次用时应先检查是否变质,显色剂如被污染变色将造成全部显色,导致错误结果。1. 操作前应对实验的物理参数有

表皮细胞的转染实验技巧

表皮细胞广泛遍布于身体,正常的表皮细胞较难转染,尤其是使用基于脂质体技术的转染试剂。我们使用电转(Amaxa)方法转染正常人的结肠表皮细胞并得到了65%的GFP标记细胞。非常感谢SignaGen,现在我们使用GenJet Ver II可以成功转染正常人的结肠表皮细胞并且转染效率显著提高至75%。

实验台安装的技巧

一、实验室台面安装:        1、在实验台台面安装前请先确认实验台柜体已安装好,并确保柜体的牢固和柜体顶部整体水平,手动检查受力架和连接处的承受力。             2、确认无误后,可以试放台面,根据台面试放的情况调整位置,直至确保实验台面前后对齐并水平仪测量是否水平。    3、在黏

ELISA实验抽取操作的技巧

在ELISA试验中,洗刷是关键过程之一。而有一些参数会影响洗刷过程的作用,这些参数包括吸液高度和吸入方位,这两者都能调整,以下降布景(残留量)和差异。下面我们就一起来看看今日的要点内容,与您谈说ELISA抽吸的操作技巧。残留液体中包括未结合的抗原或抗体,它们会添加布景信号。残留量越小,残留液体越少,

数字万用表的修理方法和技巧

数字万用表的修理方法和技巧:数字式仪表具有很高的灵敏度和准确度,其应用几乎遍及所有企业。但由于其故障出现呈多因素,且遇到问题的随机性大,没有太多规律可循,修理难度较大。因此,本人将多年工作实际中所积累的一些修理经验整理出来,以供从事本专业的同仁参考。电容分压器高压测量系统适用于脉冲高压,雷电高压,工

硅胶柱层析

洗脱剂:极性小的用乙酸乙酯:石油醚系统;极性较大的用甲醇:氯仿系统;极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系统;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸装柱:将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3体积石油醚(氯仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(氯

吸附法纯化病毒实验_葡聚糖柱层析法

实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液仪器、耗材分光光度计实验步骤(1) 经初步纯化浓缩后的材料,通过葡聚糖 G150 或 G200 柱层析。(2) 用 0. 02~0. 15mol/L 磷酸缓冲液 (pH 7. 0~7. 6) 洗脱,洗脱时适宜流速为 2~5ml/(cm2•h) 。分部收集,

DEAE纤维素柱层析纯化酶蛋白实验

离子交换层析法             实验方法原理 利用DEAE纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。 实验材料

离子交换柱层析法(层析实验简介)概略

一、    原理:有些高分子物质含有一些可以分离的基因,例如-SO3H,-COOH等,因此可以和溶液中的离子产生交换反应。如:R-SO3H+M+ ———— R-S3M+H+或R-NH3OH+CL-  —————  R-NH3CL+OH-这类高分子物质通称离子交换剂,其中使用最普遍的是离子交换树脂。由

DEAE纤维素柱层析纯化酶蛋白实验

实验方法原理 利用DEAE纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。实验材料 酶蛋白试剂、试剂盒 DEAE纤维素NaOHHCLTris-HCl缓冲液NaCl仪器、耗材 层析柱收集器磁力搅拌器搅拌子烧杯玻璃砂漏斗水泵抽滤瓶pH试纸pH计三通管止水夹吸耳球紫外比色杯尿糖试纸点滴板电导率仪实验步骤 1.

实验室技巧:给生化试剂加热与过滤的方法

·物质的加热加热固体时,试管口应略下倾斜,试管受热时先均匀受热,再集中加热。2.加热液体时,液体体积不超过试管容积的1/3,加热时使试管与桌面约成45°角,受热时,先使试管均匀受热,然后给试管里的液体的中下部加热,并且不时地上下移动试管,为了避免伤人,加热时切不可将试管口对着自己或他人。

实验室中几种常见的干燥方法及选择技巧

实验室中的干燥法没有哪种最好,只有哪种最适合,不论哪种干燥方法都有其独特的价值,都有其展现生命力的地方。一、真空干燥箱 原理:真空干燥箱专为热敏性、易分解和易氧化物质及较复杂成分物品而设计,能够向内部充入惰性气体,特别是一些成分复杂的物品也能进行快速干燥。应用:应用于生物化学、化工制药、医疗卫生、农

萃取操作实验技巧解析

萃剂原液互不溶,质溶程度不相同。充分振荡再静置,下放上倒切分明。 解释: 1、萃剂原液互不溶,质溶程度不相同:“萃剂”指萃取剂;“质”指溶质。这两句的意思是说在萃取操作实验中,选萃取剂的原则是:萃取剂和溶液中的溶剂要互不相溶,溶质在萃取剂和原溶剂中的溶解度要不相同(在萃取剂中的溶解度要大于在

过滤操作实验技巧解析

斗架烧杯玻璃棒,滤纸漏斗角一样。过滤之前要静置,三靠两低不要忘。 解释: 1、斗架烧杯玻璃棒,滤纸漏斗角一样:"斗"指漏斗;"架"指漏斗架。这两句说明了过滤操作实验所需要的仪器:漏斗、漏斗架、烧杯、玻璃棒、滤纸、并且强调滤纸折叠的角度要与漏斗的角度一样(这样可以是滤纸紧贴在漏斗壁上)。

有关实验操作技巧解析

固体需匙或纸槽, 手贴标签再倾倒。 读数要与切面平, 仰视偏低俯视高。 试纸测液先剪小, 玻棒沾液测最好。 试纸测气先湿润,粘在棒上向气靠。 酒灯加热用外燃, 三分之二为界限。 硫酸入水搅不停, 慢慢注入防沸溅。 实验先查气密性, 隔网加热杯和瓶。 排水集气完毕后, 先撤导管后移灯。

蒸馏操作实验技巧解析

隔网加热冷管倾,上缘下缘两相平。需加碎瓷防暴沸,热气冷水逆向行。 解释: 1、隔网加热冷管倾:"冷管"这冷凝管。意思是说加热蒸馏烧瓶时要隔石棉网(防止蒸馏烧瓶因受热不均匀而破裂),在安装冷凝管时要向下倾斜。 2、上缘下缘两相平:意思是说温度计的水银球的上缘要恰好与蒸馏瓶支管接口的下缘在同

离心柱层析的概念

中文名称离心柱层析英文名称spun-column chromatography定  义将小型的层析柱置于离心管中以离心力代替重力进行小量样品的快速层析法。常用于小量样品凝胶过滤脱盐和吸附层析等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

柱层析法的原理?

   柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附。当采用溶剂洗脱时,发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解du吸的过程,吸附力较强的组分,zhi移动的距离小,后出柱;吸附力较弱的组分,移动的距离大,先出柱。  硅胶柱

柱层析法的原理

柱层析原理:柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附。当采用溶剂洗脱时,发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程,吸附力较强的组分,移动的距离小,后出柱;吸附力较弱的组分,移动的距离大,先出柱。硅胶柱层析流动

柱层析法的原理

柱层析原理:柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附。当采用溶剂洗脱时,发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程,吸附力较强的组分,移动的距离小,后出柱;吸附力较弱的组分,移动的距离大,先出柱。硅胶柱层析流动

关于急性毒性试验的实验动物和染毒方法

  (一) 实验动物选择  在卫生毒理学领域中,体内试验以实验动物为研究对象,最终是为了阐明受试 外来化合物对人的急性危害性质和危害强度。所以选择实验动物时,要求在其接触化合物之后的 毒性反应,应当与人接触该化合物的毒性反应基本一致,虽然利用任何一种或几种实验动物的急性毒性结果向人外推都必须十分慎重

实验室实用的小技巧

本文主要介绍五个实验室实用技巧。 1、收拾洒落的汞 实验室中常用充汞压力计和水银温度计。如果操作不当或温度计破损时,都会发生“洒汞事故”。汞蒸气对人体危害极大,必须及时、彻底清理洒落的汞,不可任其流失。清理方法较多,可依不同情况,选择使用。 A、吸收洒落少量的汞,可用普通滴管,将汞珠一点

离子交换柱层析分离核苷酸实验

离子交换层析法             实验方法原理 本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离, 最后采用紫外吸收法进行鉴定。同时通过

离子交换柱层析分离核苷酸实验

实验方法原理 本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离, 最后采用紫外吸收法进行鉴定。同时通过测定各单核苷酸的含量, 可以计算出酵母RNA 的碱基组成。实验材料 酵母RNA试剂、试剂盒 阴离子交换树脂聚苯乙烯-二乙烯苯-三甲胺季铵甲酸甲酸钠KOH蒸馏水过

关于冰箱的省电技巧分享

  冰箱的放置  冰箱放置的位置选择应该是避免阳光直接照射、利于通风,同时与墙面要保持一段距离,以便于冰箱运作时产生的热量可以散发。  检查密封性  要经常检查冰箱封条的密封性,如果封条出现变形,就会影响关闭的严丝合缝程度,造成冷气外泄,从而增加耗电量。假如变形严重,应及时维修更换。  定期除霜  

实验室多管漩涡混合器使用技巧和要求

实验室多管漩涡混合器使用技巧和要求:  1、该仪器应放在较平滑的地方,最好在玻璃台面上。轻轻按下该仪器,使仪器底部的橡胶脚与台面相吸。  2、仪器使用前,先将调速旋钮置于最小位置,关闭电源开关。  3、如果开启电源开关后,电机不转动,应检查插头接触是否良好,保险丝是否烧断(应断电进行)。  4、为了