单克隆抗体(McAb)亲和层析柱纯化
重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的细胞因子新型药物，已在国内外广泛投入临床应用，并取得了显著的疗效。国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高，美国NIH规定必须在90%以上，因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。我们研制了rHuIFN-α2a的McAb 3F1，与CNBr活化的Sepharose 4B交联制成亲和层析柱，经1年60余次较大规模试用表明具有较理想的亲和层析纯化rHuIFN-α2a的性能，达到了国内外同类McAb的水平。由于McAb 3F1也能和rHuIFN-α2b结合，故极有可能亦适用于rHuIFN-α2b的亲和层析纯化。一、性能指标1.McAb的特性：IgG1，间接ELISA效价10-7，对rHuIFN-α2a具中和活性。2.洗脱的rHuIFN-α2a纯度：>90%。3.洗脱的rHuIFN-α2a比活性：≥1×109IU/mg。4.rHuIFN-α2a的回收率：......阅读全文
单克隆抗体的制备技术路线和关键点
动物的选择与免疫1．动物的选择 纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。2．免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般在融合前两个月左右根
与T细胞识别、粘附、活化有关的CD分子（六）
（五)CD2 1.CD2分子的结构和分布 CD2分子又称T11、绵羊红细胞受体（ER)、淋巴细胞功能相关抗原2（LFA-2)和Leu5，是人T淋巴细胞表面的单链糖蛋白，分子量50kDa，CD2基因定位于第1号染色体，属免疫球蛋白基因超家族。编码351氨基酸残基，包括先导序列24氨基酸残基，2个
关于抗碱性磷酸酶复合物制备技术的简介
Mason等（1978），用碱性磷酸酶代替过氧化物酶，建立了碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶复合物（APAAP）桥联酶标技术。但以AP作为抗原用常规免疫方法制备的抗血清，很难达到APAPP桥联酶标技术的质量要求，在一定程度上限制了此项技术的推广使用。杨志刚等（1989）利用抗AP的McAb建立了一种制备
免疫分析中干扰物的排除
近十几年，国内外报道了免疫分析中的假阳性、假阴性或其他的特异性干扰，尤其对双抗体夹心法测定干扰明显。干扰物有：血浆、血清蛋白（类风湿性因子、结合蛋白）、嗜异性抗体（Id）、人抗动物抗体（HAAA）和药物及其导至的代谢物等，尤其是后两种抗体干扰最多。 随着鼠源性单克隆抗体（鼠McAb）应用于免疫显像及
兴奋剂促红细胞生成素免疫检测方法的研究
1.抗人促红细胞生成素单克隆抗体的制备复苏抗rHuFPO杂交瘤细胞，采用动物体内诱生单克隆抗体的方法，大量制备腹水。用快速蛋白液相分析仪(FPLC)，联合使用疏水柱(Phenyl-SepharoseCL-4B)和ProteinASuperoseFastFlow柱纯化单克隆抗体。 2.单克隆抗体理化性
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免疫
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
实验方法原理1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
实验方法原理 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术 实验方法原理 1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞
杂交瘤技术基本程序与方法7
⑦Dot-ELISA试验 免疫斑点试验（Dot-ELISA）是以硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜为固相载体，进行抗原抗体反应的免疫检测手段。该法采用不溶性底物（如DAB，或4-氯萘酚或AgNO3等），其与相应标记物（HRP、AP、胶体金）作用形成不溶性产物，呈现斑点状着色，从而易于判定结果。根据所用的标
与T细胞识别、粘附、活化有关的CD分子（四）
（三)CD4 CD4和CD8分子分别与MHCⅡ类和Ⅰ类抗原结合，不仅可增强T淋巴细胞与APC或靶细胞结合的程度，而且与刺激信号的传递有关。CD4阳性细胞是MHCⅡ类抗原限制的细胞群，CD8阳性细胞是MHCⅠ类抗原限制的细胞群。有关CD4和CD8抗原在胸腺细胞分化过程中的变化以及CD4、CD8T
ELISA抗原竞争法检测样品中sIL2R含量
【基本原理】 本法是用纯化或重组的IL-2R(α链，P55，CD25，Tac抗原)蛋白包被96孔酶标反应板，同时加入已知量的抗IL-2RMcAb，再分别加入sIL-2R标准品与待测样品。则待测sIL-2R或者sIL-2R标准品与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白竞争与抗IL-2R McAb结合
过氧化物酶抗过氧化物酶复合物的制备
实验概要本实验介绍了制备过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物的操作步骤。主要试剂1. HRP和兔（或羊）抗HRP：抗HRP用HRP免疫兔（或羊）获得2. 0.075mol/L醋酸钠-0.15 mol/L醋酸铵等量混合液3. 0.1mol/LHCl和0.01mol/LHCl4. 饱和硫酸铵溶液5. 0.01
关于先天性弓形体感染的免疫学检查
1.检测抗体所用抗原主要有速殖子可溶性抗原（胞质抗原）和胞膜抗原。前者的抗体出现较早（用染色试验、间接免疫荧光试验检测）、而后者的抗体出现较晚（用间接血凝试验等检测）。同时采用多种方法检测可起互补作用而提高检出率。由于弓形虫在人体细胞内可长期存在，故检测抗体一般难以区别现症感染或以往感染，可根据
过氧化物酶抗过氧化物酶复合物(PAP)的制备实验
实验概要本实验制备了过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物(PAP)。主要试剂1. HRP和兔(或羊)抗HRP：抗HRP用HRP免疫兔(或羊)获得2. 0.075mol/L醋酸钠-0.15 mol/L醋酸铵等量混合液3. 0.1mol/LHCl4. 0.01mol/LHCl5. 饱和硫酸铵溶液6. 0.01
钩端螺旋体病的肾损害的检查
1.常规检查 (1)血常规：血白细胞轻至中度增高，多为(10～20)109/L，黄疸出血型可高达60109/L，中性粒细胞可占80%～95%，血沉增快，肾损害时血中的BUN升高，Scr升高。 (2)尿常规：早期尿中可有少量蛋白，红细胞，白细胞及管型。 (3)血生化：出现肾衰时，患者血钾，血
免疫球蛋白纯化技术——纯化小鼠腹水中单克隆抗体
实验方法原理根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含McAbγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。实验材料PBS试剂、试剂盒缓冲液仪器、耗材层析柱高效液相色谱仪实验步骤1. 腹水10000 g离心10 min，除去细胞和杂质，在4 ℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液，使
普通培养箱改为CO2培养箱及在杂交瘤中的应用
将三角形橡胶密封条和医用乳胶管用市售强力胶封闭内箱接缝处及玻璃内门：除去箱顶温度计，箱内挂入干湿温度计(可在玻璃内门处观察温、湿度)：原温度计孔以橡胶塞密封后打孔安装二氧化碳培养箱入气管和排气管，连接CO2钢瓶与CO2入气管，排气管用铁夹夹闭； 普通氧气流量表控制CO2流量，湿化瓶内盛
关于抗组织相容性抗原DR抗体的检查过程介绍
利用Raji细胞表面具有表达组织相容性抗原DR(HLA-DR)特点，以及被检血清中抗HLA-DR抗体与抗人HLA-DR单克隆抗体(McAb)竞争结合Raji细胞表面HLA-DR抗原的特征，建立检测血清抗HLA-DR抗体的Raji细胞免疫酶抑制法。
囊虫胶乳凝集试验的临床意义是什么
异常结果： 检测抗体阳性率为81.4%；McAb-LAT检测囊虫病人CAg阳性率为73.05%，经有效治疗后3个月阳性率为44.11%。检测脑囊虫病人：活动期为97.29%，钙化期为31.11%；脑脊液的检出率高于血清。 需要检查人群： 出现异常行为者有可能是脑囊虫病。
脑脊液单克隆抗体检测癌细胞的临床意义及注意事项
临床意义 脑脊液中恶性细胞有癌细胞、神经外胚层瘤细胞和淋巴瘤细胞。其检测阳性率可达60%。单克隆抗体技术可鉴定恶性细胞的组织来源，有助于癌性脑膜病的早期诊断。 注意事项 MCAb具有单一性好，特异性强，纯度高和重复性好等特点。
囊虫胶乳凝集试验的正常值及临床意义
正常值 阴性。 临床意义 异常结果： 检测抗体阳性率为81.4%；McAb-LAT检测囊虫病人CAg阳性率为73.05%，经有效治疗后3个月阳性率为44.11%。检测脑囊虫病人：活动期为97.29%，钙化期为31.11%；脑脊液的检出率高于血清。 需要检查人群： 出现异常行为者有可能
单克隆抗体的产生方法
（一）动物体内诱生法 目前McAb治疗用或体外诊断用的多采用该法。小鼠腹腔接种液体石蜡，一周后接种杂交瘤细胞悬液，接种10～14天后，无菌抽取腹水，离心取上清液即可。（二）体外培养法 这是实验室制备的方法。将杂交瘤细胞置培养瓶中培养，离心后收集上清液。
与T细胞识别、粘附、活化有关的CD分子（七）
（六)CD58（LFA-3) 1.LFA-3分子的结构 淋巴细胞功能相关抗原-3（lymphocyte function associated antigen-3,LFA-3)（CD58)是细胞表面糖蛋白，分子量55～70kDa，属免疫球蛋白超家族成员，与CD2分子高度同源，胞膜外区有2个
杂交瘤技术基本程序与方法6
③全菌抗原的ELISAS a、新鲜培养的细菌用蒸馏水或PBS悬浮，并调整细菌浓度至1×108个/ml。必须指出，对于人畜共患病病原体需注意安全操作，最好是灭活处理。 b、每孔中加100ul 5%戊二醛溶液（0.1mol/L NaHCO3 95ml+25%戊二醛溶液5ml），37℃作用2小时，蒸馏水洗
双酶双底物的双重免疫染色—多种组织抗原配对的双重酶
改良的 EnVision-HRP/AP 双酶双底物的双重免疫染色（间接法）——Ki-67-CK20 等多种组织抗原配对的双重酶实验步骤1. 恒冷切片或石蜡切片，厚 4～6 μm，常规处理。2. 0.1％NaN3+0.3％H2O2/TBS（50 mmol/L，pH 7.8）或 0.3％H2O2/甲醇，
自然杀伤细胞NK的表型
与T细胞、B细胞相比，NK细胞表面标志的特异性是相对的。人NK细胞mIg-，部分NK细胞CD2、CD3和CD8阳性，表达IL-2受体β链（P75，CD122)，CD11b/CD18阳性。目前常用检测NK细胞的标记有CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94和LAK-1（见表7
流式细胞术在血液学中的应用（一）
DNA倍体分析及细胞周期分析 在细胞周期内,DNA含量随细胞内时相发生周期性变化,正常情况下,大多数细胞处于休止期(Go), G1期细胞虽有DNA合成，但DNA含量仍为2N，为二倍体细胞,;处于活跃的DNA合成期(S期)的细胞DNA含量为2N-4N;正经历细胞分裂(G2/M期)的细胞含有最
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术4
（二）细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag
抗CD8单克隆抗体的基本信息
中文名称抗CD8单克隆抗体英文名称anti-CD8 monoclonal antibody;anti-CD8McAb定 义针对细胞表面CD8分子的单克隆抗体。用于鉴定、分离和清除CD8阳性的免疫细胞。如外周血中的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫治