就这样做轻松搞定实时PCR探针设计
除了为克隆基因、预测编码蛋白而需要研究基因的构成外，当前在基因组学上的努力也包括对基因组构成的研究，以分析具有结构和调控因子插入的基因。近源物种分析成为比较基因组学的主要内容，被认为是研究进化、基因功能和人类疾病的重要方法。 利用该方法分析微生物，特别是细菌的基因组，早在 1996 年就已开始识别出细菌中的保守基因和与亚种相关的毒性基因（Fredricks and Reiman 1996)。这方面的进展促生了新的、大规模的检测和识别致病菌的方法。近源种 PCR 可以用来研究进化上相关的种，它们在基因组上有一 些共同的特点，这些保守的区域可被用于在基因组水平识别新种。还可以用该技术在尚未测序的物种的基因组中扩增同源基因。 设计策略 根据多元序列比较和引物设计的一般规律来设计近源种 PCR 引物。通过比较少数几个大的相近序列识别出保守区域，这些区域即是近源种引物的可能结合位点。近源种的比较需要对少数大的相近序列......阅读全文
荧光定量PCR荧光化学物质
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下： 1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；P
实时荧光定量PCR的荧光化学物质的介绍
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下： 1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；P
荧光定量PCR检查的分类
荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下： 1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩
什么是荧光PCR检测
荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。原理： PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探
如何根据荧光基团的发光强度推算蛋白的量
荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度.原理： PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团.探
扫描探针显微镜和扫描探针显微镜的光轴调整方法
扫描探针显微镜和扫描探针显微镜的光轴调整方法。提供能够使用配置于扫描探针显微镜的物镜来自动地进行光杠杆的光轴调整的扫描探针显微镜和其光轴调整方法。是一种扫描探针显微镜（100），所述扫描探针显微镜（100）具备：悬臂支承部（11），以规定的安装角（θ）安装悬臂（4）；移动机构（21），对悬臂的位置进
常见荧光定量PCR检测方法比较
定量PCR：以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 常见荧光定量PCR方法比较 SYBR Green I 检测模式 SYBR Green I 是一种能与双链 D
常见荧光定量PCR检测方法比较
定量PCR：以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 常见荧光定量PCR方法比较 SYBR Green I 检测模式 SYBR
核酸扩增—实时荧光PCR
实时荧光PCR，即在常规PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时，探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'端外切
实时荧光Taqman－探针设计的几个要点
实验室很多同学都要做Real time PCR实验，实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见，不过也有实验室前没有做过的，查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物，探针法的出现使得定量PCR技术
荧光定量PCR实验指南2
2.3TaqmanMGB探针设计介绍MGB探针的优点：²MGB探针较短(14-20bp)，更容易找到所有排序序列的较短片段的保守区。²短片段探针(14-20bp)加上MGB 后，Tm值将提高10℃，更容易达到荧光探针Tm值的要求。²MGB探针的设计原则²探针的5’端避免出现G，即使探针水解为单个碱基
概述荧光定量PCR技术的原理
又称实时PCR技术。该技术在常规PCR基础上，添加了一条标有两个荧光基团的荧光双标记探针，一个标记在探针的5′端称为报告基团(Reporter，R)；另一个标记在探针的3′端称为荧光抑制基团或称淬灭基团(Quencher，Q)。两者可构成能量传递结构，即5′端R发出的荧光信号可被3′端R基团抑制。3
核酸检测要求
检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭
核酸检测要求
检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭
新型冠状病毒核酸检测原理
检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和
新型冠状病毒核酸检测原理
检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和
荧光定量PCR技术的荧光定量PCR的方法
接下来我们就来了解一下荧光定量的主要方法，我们如何选择合适的方法？荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类，特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物；而非特异性检测方法是在在PCR反
实时荧光定量PCR原理和实验（二）
归一后的荧光信号再扣除本底，就得到DRn：DRn = Rn,样本- Rn,空白。DRn是最后构建PCR实时扩增曲线的纵坐标。 无论绝对定量还是相对定量，在得到实验结果后，还要考虑数据之间的可比性问题。在实验操作中，取样都是以体积或重量为单位的，但是同样体积或重量的样本所来源的细胞数目并不一样
建立一个实时－PCR－定量分析实验
对于一个新的靶分子建立实时 PCR 定量分析的过程包括：①设计步骤一 PCR 引物和探针的选择；②根据特定分析的要求，选择实时 PCR 的检測方法。使用 SYBRGreen 的实时 PCR 通常被用于优化引物，且被主要用于在研究中检测 PCR 产物 TaqMari 探针和分子信号提供了更好的特异性。
如何做好荧光定量PCR实验？（五）
5、反应体系配制：ð A2010A0101试剂盒：（探针体系）FQ-PCR MasterMix-UNG混合物(2X) 25ul（终浓度为1×）；上游引物（终浓度为50~900nM），下游引物（终浓度为50~900nM）；探针（终浓度为200nM）；待检样品 5ul（终浓度为10~100ng）；无菌
讲解实时荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR (real time fluorogenetic quantitative PCR, FQ-PCR)，是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术。它是一种在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该
TaqmanPCR技术检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲尿原体...
Taqman-PCR技术检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲尿原体的意义临床尿道炎患者中，淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲尿原体通常为共同感染状态，但常用的检测方法尚不能精确检测和鉴别，开发精确、灵敏、快速、无污染的临床诊断方法已经成为预防性传播疾病的重要措施。随着分子生物学的发展，基于Taqman-PCR
实时荧光定量PCR（Quantitative－Realtime－PCR－，qPCR）技术介绍
荧光定量PCR也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。荧光定量PCR的发展史是一部ABI、罗氏和伯乐等巨头的荡气回肠的斗争史，感兴趣的可以去查查。该技术是目前最成熟，使用最广泛的半定量PCR技术。 荧光染料法（SYBR
定－量－P－C－R
定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测，来评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR相对定量→绝对定量， 手工操作→自动化检测， 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起始含量越大，则指
定－量－P－C－R
定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测，来评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR相对定量→绝对定量， 手工操作→自动化检测， 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起
深蓝云qPCR知识小课堂TaqMan探针法的操作
在之前发表的文章《实时荧光定量PCR检测方法，你选对了吗?》中提到，实时荧光定量PCR常用的方法包括了SYBR Green染料法、TaqMan探针法、分子信标、荧光共振能量传递(FRET)和LUX Primers等。那么应用最为广泛的则是SYBR Green染料法和TaqMan探针法，两者各有所
盘点：单核苷酸多态性（SNP）检测方法
单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms, SNP)主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，包括碱基的颠换、转换、插入和缺失。它是人类可遗传变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以上。SNP作为第三代分子标记，被广泛应用于分子
何谓实时荧光聚合酶链反应定量检测？
在普通PCR扩增系统中，加入一个与靶基因序列特异互补的双荧光标记探针。5′端标记荧光发射集团，3′端标记荧光淬灭集团，当探针完整时，后者抑制前者而不发光。有靶基因存在时，在PCR复性阶段，探针与靶基因互补，PCR延伸中，由于Taq酶有5′-3′的外切酶活性，引物沿模板延伸至标记探针结合处，将5′端报
PCR技术－PCR技术的应用
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。
实时荧光定量PCR（realtime－PCR）
实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 RNA提取试剂盒荧光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆转录酶MMLV异丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2琼脂糖溴化乙锭MOPS甲醛乙酸钠EDTAEB溴酚兰仪器、耗材 离心管离心机风光光度计电泳槽凝胶板Realtime PCR仪实验步骤 一、 样品