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RNAi实验介绍

1. RNAi 介绍 RNA 干扰(RNAi:RNA interference)是由诺贝尔生理学/医学奖得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello(1)在线虫实验中发现的,2001 年 Elbashir 等人发现哺乳类的 siRNA 可以进行 RNAi 诱导。这个方法与常规方法相比更加简便,现在已经成为一种常用的抑制基因功能的方法,也属于研究工具之一。 RNAi 是 21~23bp 的短链双链 RNA(siRNA:small interfering RNA)或者是长链双链 RNA(dsRNA:double-strand RNA),与目的基因表达的 mRNA 同源区进行特异性结合,使 mRNA 降解,达到抑制基因表达的作用。 RNAi 活性与转位子的移动、基因表达抑制和细胞命运决定有关。并且是防止病毒感染的重要因子之一。RNAi 的发现对核酸医药研究和基因治疗的应用有很大帮......阅读全文

RNAi干扰技术及应用进展研究(二)

1.2 RNAi的作用特点 (1)“共抑制”性。RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默机制,它的启动子相当活跃,外源基因可以转录,但不能正常积累mRNA;RNAi作用不仅使外源基因在转录后水平上失活,同时诱导与其同源的内源基因沉默。 (2) 高效性。试验证明双链RNA干扰m

Science:重磅!RNAi是细胞静止所必需的

  一些细胞并没有得到应有的重视。事实上,大多数细胞都没有。在我们的地球上,99%以上的细胞存在于一种静止状态中。捧起一把泥土:它含有上千种微生物,而且当被放置到培养皿中时,几乎每种微生物都不会生长。这些细胞是有代谢活性的---是的,活的---但是它们不会发生细胞分裂。它们将保持在一种繁殖上的“静止

RNAi表达载体构建(二)

(2)、序列同源性分析: 将潜在的序列和相应的基因组数据库(人,或者小鼠,大鼠等等)进行比较,排除那些和其他编码序列/EST同源的序列.例如使用BLAST( www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)选出合适的目标序列进行合成.并非所有符合条件的siRNA都一样有效,其原

RNAi的研究进展(一)

RNA干扰(RNA interference ,RNAi) 现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将与靶基因的转录产物mRNA 存在同源互补序列的双链RNA(double strand RNA ,dsRNA) 导入细胞后,能特异性地降解该mRNA ,从而产生相应的功能表型缺失

RNAi干扰技术及应用进展研究(三)

3.2 基因治疗及药物筛选探索由于RNAi是针对转录后阶段的基因沉默,相对于传统基因治疗对基因水平上的敲除,整个流程设计更简便,且作用迅速,效果明显,为基因治疗开辟了新的途径。 其总体思路是通过加强关键基因的RNAi机制,控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸的复制及表达。尤其

RNAi干扰技术及应用进展研究(四)

3.5 转基因研究在动植物的转基因试验中, 经常发生基因沉默。因此, 对转基因沉默机制的探索可以为在转基因研究中避免基因沉默提供对策。在转基因植物研究中避免基因沉默可提高试验成功率,且节省时间,而在大型动物转基因研究中避免基因沉默可节约成本,提高产率。 3.6

RNAi实验原理与方法选择(二)

尽管有些公司推出了shRNA和siRNA试剂盒,但这些试剂盒大都突出操作简单,毕竟涉及RNA操作,用户自己难免会产生很多预料不到的困难,晶赛公司可以完全为您解决后顾之忧,您可以直接拿到有效的siRNA或shRNA序列。 3. Dicer酶法生产siRNA优点:可以跳过筛选与检测有效siRN

拓宽RNAi疗法适用范围 Alnylam达成10亿美元研发协议

  行业领先的RNAi疗法公司Alnylam Pharmaceuticals与Regeneron Pharmaceuticals公司联合宣布,双方达成研发协议,合作发现、开发和推广RNAi疗法,治疗多种类型疾病。这一合作涵盖的靶标分布广泛,除了表达在肝脏的靶标以外,还包括表达在眼睛和中枢神经系统(C

RNAi表达载体构建(一)

近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分

RNA干扰(RNAi)实验原理与方法(3)

3.DEAE-葡聚糖和polybrene带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。两种试剂都已成功用于转染。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。4.机械法转染技术也包括使用机械的方法,

Science重磅成果:RNAi是细胞平衡的一种必要手段

在我们星球上99%以上的细胞都处于一种静息休眠的状态,随便抓起一把土,这其中就包含着数以千计的微生物,把其中任何一种放到培养基中几乎都不会生长。这些细胞具有新陈代谢活性,也就是说它们是活的,但是它们并不会分裂,而且它们保持在一种相对“安静”的状态,除非在特定的条件下刺激它们,才有可能重新进入细胞周期

RNAi的实验原理和操作实用技术(3)

3.DEAE-葡聚糖和polybrene带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。两种试剂都已成功用于转染。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。4.机械法转染技术也包括使用机械的方法,

RNAi的作用机制及siRNA的合成方法

RNAi的作用机制及siRNA的合成方法RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strandedRNA, dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因表达,用特异性的抗体几乎检测不到靶向

RNAi的发现和起源

首次发现dsRNA能够导致基因沉默的线索来源于线虫Caenorhabditis elegans的研究。>1995年,康乃尔大学的Su Guo博士和>Kemphues在试图阻断秀丽新小杆线虫(C.  elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义

降低甘油三酯水平高达75% 4款创新疗法公布临床结果

  上周在线上召开的欧洲肝脏研究协会(EASL)国际肝脏大会上,杨森(Janssen)/Arrowhead公司联合开发的RNAi疗法JNJ-3989,以及罗氏(Roche)/Ionis联合开发的反义寡核苷酸(ASO)疗法GSK’836在治疗慢性乙肝患者的2期临床试验中表现出可喜的疗效,为“功能性治愈

RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)

1995年,康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达,而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA(sense RNA)以期观察到基因表达的增强。但得到的结果

RNAi的实验原理和操作实用技术(1)

几十年来生物学上最重要的进展,也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA干涉(RNAi)是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象,是在线虫中发现的,在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。此后,科学家们明白,RNAi还有其他形式,它既是一种了解基因功能的强大工具,又是很多生物的基因组所

RNAi的应用(研究基因功能、信号传导通路和基因治疗)

研究基因功能的新工具已有研究表明RNAi能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达,制作多种表型,而且抑制基因表达的时间可以随意控制在发育的任何阶段,产生类似基因敲除的效应。线虫和果蝇的全部基因组序列已测试完毕,发现大量未知功能的新基因,RNAi将大大促进对这些新基因功能的研究。与传统的基因敲除技术

2018十大RNA疗法公司,第一名不是Moderna?

  2006年,斯坦福大学教授Andrew Z.Fire和麻省大学医学教授Craigc.Mello由于发现RNA干扰(RNA interference,RNAi)以及他们在基因沉默现象研究领域的杰出贡献,获得2006年诺贝尔生理学/医学奖。  获奖时,他们就曾预测,应用RNA干扰(RNAi)或小干扰

上海生科院发明一种高效安全的新型RNAi载体

  10月12日,国际学术期刊Nature Communications 在线发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所国家蛋白质科学中心(上海)吴立刚研究组的最新研究成果:Ribozyme-enhanced single-stranded Ago2-processed inter

每年只需两次皮下注射!RNAi创新疗法再获新突破

  今日,The Medicines Company宣布,每年只需接受两次皮下注射的RNAi疗法inclisiran,在降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的关键性3期临床试验中,达到试验的所有主要和次要终点。同时,Inclisiran表现出良好的安全性和耐受性。Inclisiran是使用Alnyl

核糖核酸干扰技术(RNAi技术)介绍

转录后基因沉默(PTGS, post- transcriptional gene silencing)-最初被认为仅限于矮牵牛花和其它一些植物中的奇异现象,是目前分子生物学研究中一个最热门的话题。过去几年中,科研工作者已明确转录后基因沉默现象普遍存在于动、植物中,在机体防御病毒入侵和转座子沉默效应中

沉默是金: 强大的RNAi筛选技术

  在过去,想要发现哺乳动物细胞的重要生理过程,通常需要通过化学突变或将转座子插入到基因组中对细胞内的基因进行干扰。但是,大约10年前,RNA 干扰(RNAi)技术的出现改变了这种状态。这项技术的核心是,设计一个短链RNA,使其在转录过程中与目的基因序列互补结合,从而阻止目的基因翻译成蛋白。RN

RNAi干扰技术及应用进展研究(一)

RNAi是Napoli CD等在试图向紫色矮牵牛花转导色素合成基因,用以增加其花色时发现的。结果出乎预料,转基因的植株不仅没有新基因的表达,反而自身的色素合成也减弱了,一些转基因的花出现了全白色或部分白色。他们把这种导入的基因未表达和植物本身合成色素基因的失活现象命名为共抑制(cosupp

RNAi的机理与应用(一)

关于 RNAi 技术 RNA 干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链 RNA( double-stranded RNA,dsRNA) 诱发的、同源 mRNA 高效特异性降解的现象。RNAi 受到追捧的原因主要有两个方面,一方面, RNAi 可以说是基

RNA实验方案和应用(二)

miRNA 模拟物是化学合成的,双链RNA分子(通常长度为18–24个核苷酸),通过转染到细胞中,模拟成熟的内源性miRNA分子。miRNA抑制剂是单链(通常长度为21–25个核苷酸),经过修饰的RNA分子,通过转染到细胞中,特异性的抑制miRNA的功能。模拟物和抑制剂包含一些化学修饰,以

RNAi药物市场潜力巨大但路途遥远

RNA干涉技术(RNAi)正在受到越来越多的关注,一些大型制药企业已经注入数以十亿美元的资金。由于RNAi特异性抑制蛋白质的合成,所以在理论上优于任何以抑制蛋白功能为机制的传统药物。但是,目前仍没有任何一种RNAi新药上市,最早也要等到2010年,市场达到一定规模至少要5-10年。 现在有4家公

慢病毒的包装简介及其应用范围

  慢病毒,( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达

RNAi的作用机制及siRNA的合成方法(一)

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strandedRNA, dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因表达,用特异性的抗体几乎检测不到靶向基因所表达的蛋白质。因此,RNAi技术又

冷泉港实验室:划算的基因沉默方法

大约在十年前,2006年诺贝尔生理/医学奖得主Craig Mello和Andrew Fire发现,他们能够将短RNA分子插入到线虫中并沉默特定基因的表达。今天,研究人员也常常使用这种强大的RNA干扰方法来研究哺乳动物系统中的特定基因功能。 为了进行这种基因沉默实验,研究人员通常需要依赖化学合成的