在质粒载体中进行定向克隆实验
在质粒载体中进行定向克隆实验 实验方法原理 大多数常用质粒都含有可被不同内切酶识别的多克隆位点。由于可供选择的克隆位点很多 [ 如 Invitrogen 公司的 PSE280 质粒的克隆位点有 46 个之多，而且还可以设计含有更多克隆位点的多聚接头（Brosius 1992 ) ]，因此一般来说总是能够找到一个带有与某一特定外源 DNA 片段末端相匹配的酶切位点的质粒载体。 实验材料 T4 噬菌体 DNA 连接酶 限制性内切核酸酶 试剂、试剂盒 ......阅读全文
酵母质粒载体具备的条件有哪些？
一个理想的基因载体应该具有以下几个基本条件： ①能在宿主细胞进行独立和稳定的DNA自我复制,并在其DNA中插入外源基因后,仍然保持着稳定的复制状态和遗传特性； ②易于从宿主细胞中分离,并进行纯化； ③在其DNA序列中,具有适当的限制性内切酶位点(最好是单一酶切位点)。这些位点位于DNA复制
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓冲液 125I 标记的蛋白质 A 或 125I 标记的免疫球蛋白放射性碘化第二抗体第一抗体LB 或 SOB 琼脂平板仪器、耗材 空气培养箱平头镊子 装有防水黑墨水（印度墨水）并带有 18 号针头的注射器硝酸纤维
筛选质粒载体构建表达文库实验
检测结合抗体的方法有以下 3 种：放射化学筛选，生色反应筛选及化学发光反应筛选。3 种方法的优缺点在本章导言中有所论述。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液 氯仿 裂解缓冲液 检测抗原-抗体复合物所用试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液
关于黏性质粒载体的基本介绍
由于真核基因的结构与功能研究的需要，人们发展出比λ噬菌体载体具有更大克隆能力的新型的载体——柯斯质粒载体(cosmid vectors，cosmid是COS site—carrying plasmid的缩写)，也称为黏陛质粒或黏粒。是基因工程中一个重要的基因表达载体。
酵母质粒载体的基本信息介绍
酵母质粒载体是基因表达载体的一种,既可以在大肠杆菌中、又可以在酵母系统中进行复制与扩增,所以也称为穿梭载体。它分为整合载体和自我复制载体两类。①整合载体：它带有一个酵母URA3标志基因和大肠杆菌的复制和报告基因。由于质粒DNA与酵母基因组DNA之间发生了同源重组,在转化的细胞中可以检测到质粒的整
pTrcHis2－B载体载体的基本信息和质粒图谱
pTrcHis2 B载体载体基本信息载体名称pTrcHis2 B载体抗性Ampicillin载体长度4404 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Invitrogen (Life Technologies)拷贝数High copy numberpTrcHis2 B载体质粒图
LITMUS38i载体载体的基本信息和质粒图谱
LITMUS38i载体载体基本信息载体名称LITMUS38i载体抗性Ampicillin载体长度2814 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷贝数High copy number克隆方法Enzym
pDD载体的基本信息和质粒图谱
pDD载体载体基本信息载体名称pDD载体抗性Ampicillin载体长度3040 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Clontech拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpDD载体质粒图谱
pBR322与－pUC质粒载体相比优点
（1）具有更小的分子量和更高的拷贝数如pUC8为2 750bp，pUCl8为2 686bp，控制质粒复制rop基因的缺失，平均每个细胞即可达500～700个拷贝（2）适用于组织化学法检测重组体通过a-互补作用，利用菌落颜色筛选重组子。（3）具有多克隆位点区段（MCS）可以定向克隆防止载体自我连接。
pBS(+)载体的基本信息和质粒图谱
pBS(+)载体载体基本信息载体名称pBS(+)载体抗性Ampicillin载体长度3204 bp载体类型Basic Cloning Vectors拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpBS(+)载体质粒图谱
pInvRecA载体的基本信息和质粒图谱
pInvRecA载体载体基本信息载体名称pInvRecA载体抗性Ampicillin载体长度7354 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Sektas M, Gregorowicz M, Szybalski W.拷贝数Low copy numberpInvRecA载体质粒图
pMiniT载体的基本信息和质粒图谱
pMiniT载体载体基本信息载体名称pMiniT载体抗性Ampicillin载体长度2525 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源New England Biolabs拷贝数High copy numberpMiniT载体质粒图谱
pRSET－A载体的基本信息和质粒图谱
pRSET A载体载体基本信息载体名称pRSET A载体抗性Ampicillin载体长度2897 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Invitrogen (Life Technologies)拷贝数High copy numberpRSET A载体质粒图谱
pTrcHis－A载体的基本信息和质粒图谱
pTrcHis A载体载体基本信息载体名称pTrcHis A载体抗性Ampicillin载体长度4414 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Invitrogen (Life Technologies)拷贝数High copy numberpTrcHis A载体质粒图谱
BlueScribe载体的基本信息和质粒图谱
载体基本信息载体名称BlueScribe载体抗性Ampicillin载体长度2746 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Short JM, Fernandez JM, Sorge JA, Huse WD.拷贝数High copy number启动子T3克隆方法Enzyme
pBS()载体的基本信息和质粒图谱
pBS(-)载体载体基本信息载体名称pBS(-)载体抗性Ampicillin载体长度3204 bp载体类型Basic Cloning Vectors拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpBS(-)载体质粒图谱
pUAST载体的基本信息和质粒图谱
pUAST载体载体基本信息载体名称pUAST载体抗性Ampicillin载体长度8897 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Brand AH, Perrimon N.拷贝数High copy numberpUAST载体质粒图谱
质粒克隆载体的设计和构建的原则
①选择合适的出发质粒出发质粒也叫亲本质粒，它应含有质粒克隆载体必备的元件，如复制起始位点、选择标记基因、克隆位点、启动子和终止子等。②正确获得构建质粒克隆载体的元件一般采用限制性核酸内切酶切割出质粒DNA分子，获得含有某种元件的DNA片段，还可以采用PCR技术从靶DNA中扩增出含某种元件的特异性DN
pZErO®2载体的基本信息和质粒图谱
pZErO®-2载体载体基本信息载体名称pZErO®-2载体抗性Kanamycin载体长度3297 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Invitrogen (Life Technologies)筛选标记Neomycin/G418(Geneticin)拷贝数High cop
在质粒载体中进行平末端片段的克隆
在质粒载体中进行平末端片段的克隆1．分别设立两个反应，用适当的限制性内切核酸酶消化1~10μg质粒DNA和外源DNA片段，使它们能产生平末端。2．苯酚：氯仿抽提与乙醇沉淀法纯化出已被消化的载体和外源DNA片段。3．分别用TE（pH 8.0）重新溶解纯化出的两种DNA沉淀，使终浓度为100 ng/ml
pEZSeq™Kan载体的基本信息和质粒图谱
pEZSeq™-Kan载体载体基本信息载体名称pEZSeq™-Kan载体抗性Kanamycin载体长度2008 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Lucigen拷贝数High copy numberpEZSeq™-Kan载体质粒图谱
pTrcHis－B载体的基本信息和质粒图谱
pTrcHis B载体载体基本信息载体名称pTrcHis B载体抗性Ampicillin载体长度4404 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Invitrogen (Life Technologies)拷贝数High copy numberpTrcHis B载体质粒图谱
pBC－KS(+)载体的基本信息和质粒图谱
pBC KS(+)载体载体基本信息载体名称pBC KS(+)载体抗性Chloramphenicol载体长度3400 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Agilent Technologies拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引
pEXA载体的基本信息和质粒图谱
pEX-A载体载体基本信息载体名称pEX-A载体抗性Ampicillin载体长度2450 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Eurofins Genomics拷贝数High copy numberpEX-A载体质粒图谱
质粒载体对宿主生存并不是必需的
这点不同于线粒体，线粒体DNA也是环状双链分子，也有独立复制的调控，但线粒体的功能是细胞生存所必需的。线粒体是细胞的一部分，质粒也往往有其表型，其表现不是宿主生存所必需的，但也不妨碍宿主的生存。某些质粒携带的基因功能有利于宿主细胞的特定条件下生存，例如，细菌中许多天然的质粒带有抗药性基因，如编码
pGEM®T载体的基本信息和质粒图谱
pGEM®-T载体载体基本信息载体名称pGEM®-T载体抗性Ampicillin载体长度3000 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Promega拷贝数High copy number5'引物M13 fwd3'引物M13 revpGEM®-T载体质粒图谱
质粒载体和外源DNA的连接反应
实验原理DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来，该反为需能反应，通常需要加入ATP或NADH，DNA连接酶对粘性末端的连接效率要远高于对平末端的连接效率。在基因基因工程实验中，最常用的来源于T
pBluescript－KS(+)载体的基本信息和质粒图谱
pBluescript KS(+)载体载体基本信息载体名称pBluescript KS(+)载体抗性Ampicillin载体长度2958 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Short JM, Fernandez JM, Sorge JA, Huse WD.拷贝数High
在质粒载体中进行平末端片段的克隆
1．分别设立两个反应，用适当的限制性内切核酸酶消化1~10μg质粒DNA和外源DNA片段，使它们能产生平末端。2．苯酚：氯仿抽提与乙醇沉淀法纯化出已被消化的载体和外源DNA片段。3．分别用TE（pH 8.0）重新溶解纯化出的两种DNA沉淀，使终浓度为100 ng/ml。 假设1 bp相当于660 D