放射自显影和从测序凝胶上读取DNA序列实验
实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的配方见附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。凝胶固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋酸放射性混合物放射性墨水或化学发光标记物参见附录 9。可重复使用的放射性墨水主要是选择 Stratagene 的冷光标记物（Glosos)。标记物能被多次运用而且应该恰拾在一个新的放射自显影循环之前被暴露在荧光灯下。凝胶DNA 测序胶准备和电泳见方案 8~11。特殊设备放射自显影暗盒（金属，弹簧 35.6 cmX43.2 cm)放射增感屏每个胶片需要两个大的增强的钨酸钙屏幕（例如，LighteningPlus,Dupont)。80°C 的凝胶干燥机凝胶干燥机应该被连接在一个真空系统上。聚脂薄膜片（在长和宽上比凝胶大约 5 cm)聚脂薄膜是为了保证凝胶在真空条件下干燥时保持平整。丝龙（Saran) 巾不锈钢的金属小铲或手术刀固定凝胶......阅读全文
放射自显影和从测序凝胶上读取－DNA－序列实验
本实验介绍关于放射自显影和从测序凝胶上读取 DNA 序列的过程。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。实验步骤材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的配方见附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。凝胶固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋
放射自显影和从测序凝胶上读取－DNA－序列实验
实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的配方见附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。凝胶固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋酸放射性混合物放射性墨水或化学发光标记物参见附录 9。可重复使用的放射性墨水主要是选择 Strat
放射自显影和从测序凝胶上读取－DNA－序列实验
实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的配方见附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。凝胶固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋酸放射性混合物放射性墨水或化学发光标记物参见附录 9。可重复使用的放射性墨水主要是选择 Stratagene 的冷光标记物（Glosos)。标记物能被多
关于DNA测序测序凝胶的银染
染色过程要求凝胶浸在塑料盘中。因而至少使用两个盘子，大小与玻璃板类似。在盘中加入新鲜溶液之前须用高质量的水洗涤盘子。 1. 电泳完毕后用一个塑料片子小心地分开两板，凝胶应该牢固地附着在短玻璃板上。 2. 固定凝胶：将凝胶（连玻璃板）放入塑料盘，用固定/停止溶液浸没，充分振荡20分钟或直至样品
DNA序列和大规模DNA测序策略的探讨（图）
人类基因组计划的核心内容之一是基因组测序。随着人类基因组图谱趋于完成，人类基因的 定位克隆、鉴定分析直至全基因组测序取得了突破性进展，测序策略的成熟、测序方法的改进、自动测序仪的广泛应用、计算机数据分析系统的扩展以及测序分析能力的提高， 大大推进了大规模DNA测序的进程。第一节 DNA测序的基本方法
测序技术及DNA序列测定结果分析
实验概要 在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的
DNA测序的凝胶的制备介绍
（1）玻璃板经粘合硅胶和Sigmacote处理后，即可固定玻璃板。该方法是用0.2 mm或0.4 mm厚的边条置于玻璃板左右两侧，将另一块玻璃板压于其上。在长玻璃板的一侧插入鲨鱼齿梳平的一面边缘，用夹子固定住。 （2）根据所需要的凝胶浓度，按下表制备测序凝胶，一般6%～8%的胶浓度可获得较好的
DNA测序测序凝胶的银染的影响因素
测序产物的银染是显现序列信息的一种新方法，本系统的成败受几个因素的影响 ① 水的质量对于染色的成功极其重要。超纯水（NANOpureR或Milli-QR的水）或双蒸水可获得较好的效果，如果水中有杂质，则低分子量条带可能无法出现。 ② 碳酸钠也非常重要。使用新鲜的，美国化学学会级碳酸钠较好，如
关于DNA测序技术的测序凝胶板的制备
一、玻璃板的处理 银染测序的玻璃板一定要非常清洁，一般先用温水和去污剂洗涤，再用去离子水冲洗玻璃板，除去残留的去污剂，最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高(棕色)。短玻璃板经粘合溶液处理可将凝胶化学交联于玻璃板上。这一步对于在银染操作过程中防止凝胶撕裂至关重
关于DNA测序技术的测序凝胶的银染介绍
染色过程要求凝胶浸在塑料盘中。因而至少使用两个盘子，大小与玻璃板类似。在盘中加入新鲜溶液之前须用高质量的水洗涤盘子。 1.电泳完毕后用一个塑料片子小心地分开两板，凝胶应该牢固地附着在短玻璃板上。 2. 固定凝胶：将凝胶(连玻璃板)放入塑料盘，用固定/停止溶液浸没,充分振荡20分钟或直至样品中
关于DNA测序技术的凝胶的制备
（1）玻璃板经粘合硅胶和Sigmacote处理后，即可固定玻璃板。该方法是用0.2mm或0.4mm厚的边条置于玻璃板左右两侧，将另一块玻璃板压于其上。在长玻璃板的一侧插入鲨鱼齿梳平的一面边缘，用夹子固定住。 （2）根据所需要的凝胶浓度，按下表制备测序凝胶，一般6%-8%的胶浓度可获得较好的结果
DNA测序新突破：新纳米孔通过电流变化检测DNA序列
在个体化医疗前景的诱惑下，研究人员将研发出更有效的基因测序新方法视为首要任务。如今，宾夕法尼亚大学物理学家利用固态的纳米孔区分单链DNA分子，这一有前景的技术，在DNA穿过纳米孔时，通过检测电流变化进而读取DNA序列。相关研究发表在《ACS Nano》期刊上。 领导这项研究的是艺术与科学学院物
DNA微序列技术
· Protocols for Making Drosophila Arrays (Stanford U.)Detailed protocol for making arrays including PCR Amplification of cDNAs for Printing,
DNA－序列分析技术
试剂、试剂盒 琼脂糖TE 水饱和酚无水乙醇70％乙醇TEMED测序酶溴化乙锭仪器、耗材 电泳仪离心管离心机冰浴箱恒温板DNA 测序仪
DNA－序列分析技术
DNA序列分析技术可用于：（1）分析物种的遗传多样性；（2）鉴定新的物种；（3）用于比较基因组学。实验方法原理本节描述运用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自动DNA 测序仪进行双链DNA 测序的方法。热循环测序反应使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDe
DNA序列测定技术
DNA序列测定技术序列测定的技术和策略Sanger双脱氧链终止法Maxam－Gilbert DNA化学降解法测序策略目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干
DNA－序列分析技术
实验方法原理 本节描述运用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自动DNA 测序仪进行双链DNA 测序的方法。热循环测序反应使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDeoy TM Terminator
DNA序列测定技术
DNA序列测定技术序列测定的技术和策略Sanger双脱氧链终止法Maxam－Gilbert DNA化学降解法测序策略 目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的
DNA测序
自动测序法 双脱氧链末端终止法 非同位素银染 鸟枪法 Maxam-Gilbert化学修饰法 实验方法
DNA测序
实验方法原理 ABI PRISM 310型基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司ZL的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DN
DNA测序
DNA测序（主要内容如下）· Sequencing Gel Preparation· Preparation of Templates · DNA Sequencing by the Dideoxy Method· DNA Sequen
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定2
目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法（双脱氧链终止法）和Maxam（1977）提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都同样生成相互独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组核苷酸都有共同的起点，却随机终止于一种（或多种）特定的残基，形成一系列以某一特定核苷酸
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定3
2．利用末端转移酶和α-32P-ddNTP标记DNA的3ˊ-末端 在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羟基末端，如果作为底物的核苷酸经过修饰（如ddNTP），则可以在DNA的3ˊ-OH上仅加入一个核苷酸。对于双链DNA片段，亦存在DNA的两侧均被标记问题，可通过上述同
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定1
㈣ DNA聚合酶 如前所述，选用合适的DNA聚合酶进行测序反应也是保证测序质量的重要因素之一。常用于双脱氧末端终止法测序的有几种不同的酶： 1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow片段） 此酶是最早用于建立Sanger测序的酶。但通常会有两个问题：①Klenow片段的持续合成能力较
DNA测序PCR测序反应
1. 取0.2 ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂： 所加试剂 测定模板管 标准对照管 BigDye Mix 1 μl 1 μl 待测的质粒DNA 1 μl － pGEM-3Zf (+) 双链DNA － 1 μl 待测DNA的正向引物 1 μl － M13(
DNA测序的测序原理
DNA测序的测序原理是：利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸
DNA测序的测序技术
高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（Next-generation sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以
DNA序列分析技术2
3)电泳电极缓冲液 1 倍TBE（pH 值8.0）预电泳 30 分钟至1 小时恒温方式 测序胶板上夹盖铝恒温板电泳温度 50℃左右电泳条件 恒功率 90～110W电泳时间 2.5 小时至5 小时4)干胶制备和压片电泳结束后取下胶板，用工具撬开玻璃板，使胶留在其中一块板上。将裁剪好的新华3 号滤纸在胶
端粒DNA－序列的概念
端粒DNA 序列(telomere DNA sequence,TEL)端粒的功能是与端粒酶结合，完成染色体末端复制。端粒酶以其自身的RNA 为模板，在染色体端部添加上端粒的重复序列。作为模板的RNA 比较短，含有1.5 个端粒重复单元。端粒结构还能防止染色体融合及降解。端粒是保护DNA分子中的基因的
DNA序列家族的概念
中文名称DNA序列家族英文名称DNA sequence family;sequence family定 义DNA分子变性后可复性形成稳定的碱基配对双链分子的一组序列。序列之间有很高的同源性。应用学科遗传学（一级学科），基因组学（二级学科）