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RNA干扰(转录后基因沉默)实验

RNA干扰 实验方法原理 1. 病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应。其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA(大约21-23 bp),即siRNA。siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链,继之由反义siRNA再与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。RISC与外源性基因表达的mRNA的同源区进行特异性结合,RISC......阅读全文

RNA干扰载体的构建的实验流程

RNA干扰载体主要用来研究基因表达调控,RNA干扰技术已已被广泛用于基因结构功能研究和传染性疾病及基因治疗领域,进行RNA干扰实验首先是构建RNA干扰载体,本文以pRI系列载体为例论述了干扰载体的构建的实验流程。产品技术背景pRI系列载体是基于III类rna聚合酶启动子:人类H1启动子的专用于哺乳动

shRNA干扰载体构建

产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子:人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号,H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA,shRNA经过RISC剪切后形

基因技术专题-2

RNAi技术RNA干扰(RNA interference, RNAi)是近年来发现的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术,它利用了由小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默(silencing)现象,其本质是siRNA与对应

shRNA干扰载体构建

产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子:人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号,H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA,shRNA经过RISC剪切后形

RNA干扰(RNA interference,RNAi)基础知识(1)

Rnai最近由于RNA 干扰(RNA interference,RNA i)的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的(1),是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在 RNA i领域取得的进步,已经有许多这方面的综述发表(2-4)。RNA 干扰是

RNA足迹和修饰干扰分析实验

RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA 足迹试验的理论基础,它们都是建立在变性、半变性或自然条件下采用碱基特异性

两篇Cell文章:发布CRISPR研究重大突破

  发表于10月9日《细胞》(Cell)杂志上的两篇研究论文中,来自加州大学旧金山分校的科学家报告称他们应用一种新型的、精确的方法开启和关闭了细胞内的基因。这一成果有可能促成更好地了解疾病以及开发出新的治疗方法。  这一研究进展的核心是一个叫做SunTag的新发明。SunTag实质上是一套分子挂钩,

癌症基因疗法亮点频现 用好基因修复坏基因

  当前,探索各种有效而实用的抗癌方法已成为研究人员和临床医生研究的重点,同时也成为患者关注的焦点。毫无疑问,2010年的癌症治疗在基因疗法方面出现了一些亮点,如果假以时日,基因疗法将成为癌症治疗的实用技术。   核糖核酸干扰显神威   癌症的基因疗法有很多,其中有一种更显示了独特的魅力,这就是

RNA足迹和修饰干扰分析实验

            实验方法原理 RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋

RNA足迹和修饰干扰分析实验

实验方法原理 RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA 足迹试验的理论基础,它们都是建立在变性、半变性或

miRNA、siRNA、dsRNA与shRNA 表示什么意思?

siRNA,shRNA,dsRNA,miRNA间的区别RNA干扰(RNAi),即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA(siRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默,已经迅速而广泛地应用到基因功能,基因表达调控机制研究等热门领域,并为基因治疗开辟了新的途径。近两年来,这方面的科学论文及报道爆炸性增长

倚天屠龙,谁与争锋——且看基因敲除与RNA干扰的关系

  研究历史   20世纪80年代初,胚胎干细胞分离和体外培养的成功为基因敲除奠定了技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组(homology recombination, HR)的存在为基因敲除奠定了理论基础[2]。为了编辑基因,传统的靶向特定等位基因的同源重组技术被使用,但是,这

基因敲除与RNA干扰的关系

20世纪80年代初,胚胎干细胞分离和体外培养的成功为基因敲除奠定了技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组(homology recombination, HR)的存在为基因敲除奠定了理论基础[2]。为了编辑基因,传统的靶向特定等位基因的同源重组技术被使用,但是,这个方法在当年来说,存

科学家研制基因避孕药 可避免以往副作用

基因新技术曾获诺贝尔奖  避孕一直是困扰全世界已婚女性的最大问题之一。服用避孕药是比较有效的避孕方式,但是会产生恶心、头痛、体重增加、情绪失调等副作用,长期来看,还会增加罹患中风、心脏病和癌症的风险。 如今,美国科学家找到了一种新的避孕方式,它利用基因研究中前沿的RNA干扰技术,

基因编辑器:编出新生命

          细菌也有敌人,其最大的敌人之一是噬菌体,因为后者可以进攻和吞食细菌。面对攻击,细菌最有效的还击是,“祭”出一种武器CRISPR,以保护自身。CRISPR有些拗口,称为规律成簇间隔短回文重复,实际上就是一种基因编

反义技术——RNA干扰(RNA interference,RNAi)

最近由于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的(1),是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNAi领域取得的进步,已经有许多这方面的综述发表(2-4)。RNA干扰是由长的双链 RNA

RNAi表达载体构建

近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi)。siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够

Biomaterials:食用生菜有助于治疗乙型肝炎

  据统计,中国的肝脏病患者约有4亿人,占全球肝脏病人的40%。这其中约有1.2亿人携带乙肝病毒。慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染已成为一个重大的公共卫生问题。虽然我国科学家成功建立起乙肝病毒感染模型,但距离成功治愈乙肝还有很长的路要走。如果能够找到一种廉价有效的乙肝治疗方式,将会有更多人受益于此。 

RNAi的机理与应用

  RNAi 技术的机理与应用   关于 RNAi 技术   RNA 干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链 RNA( double-stranded RNA,dsRNA) 诱发的、同源 mRNA 高效特异性降解的现象。   RNAi 受到追捧的

Cell头条:内源RNAi信号

  来自加拿大麦吉尔大学的Mathieu Flamand 和Thomas F. Duchaine在7月20日《细胞》(Cell)杂志上发表了一篇题为“SnapShot: Endogenous RNAi Pathways”的文章。文章以概略图加上主题内容简介并推荐了10篇文献,简明扼要地概述了

RNAi技术专有名词(1)

1.RNAi:(RNA interference)RNA干扰 一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi,也译作RNA干预或者干涉)。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机

染色质重塑因子PKL在RNA介导的DNA甲基化中的功能

  5月31日,《基因组生物学》(Genome Biology)杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物逆境生物学研究中心张蘅研究组题为The developmental regulator PKL is required to maintain correct DNA methylation

抗击癌症的五大“新武器”

  在所有折磨人类的疾病中,癌症无疑是最可怕的。即使今天,癌症仍是许多国家第一或第二位的杀手。目前,医生主要利用手术切除、射线灼烧或药物杀死快速分裂的癌细胞。公正地讲,这些针对肿瘤的治疗方法都显得非常简单粗暴。不可否认,它们具有一定的效果,但都不可避免地对人体造成间接伤害。  最新应用于临床的一种方

RNAi相关术语

1.RNAi :(RNA interference)RNA干扰一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi ,也译作RNA干预或者干涉)。它也是体内抵御外在感

Cell重要成果:基因表达沉默新技术

  来自加州大学旧金山分校的研究人员发现了一种更精确关闭基因的方法,这一成果将加速研究发现和生物技术进步,最终有可能应用于重编程细胞再生器官和组织。该策略借用了细菌的分子工具箱,利用了一种微生物用以抵抗病毒的蛋白质。研究人员在《细胞》(Cell)杂志上对这一技术进行了详细描述。   关闭基因是癌症

RNAi表达载体构建

近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够

Adv Sci:新型siRNA纳米颗粒有效地逆转了肝损伤

  RNA干扰(RNAi)作为后基因组时代的一种下调基因表达的工具已被广泛用于基因功能的研究以及疾病的治疗。近年来随着RNA干扰技术在生命领域的应用以及研究的深入,RNA干扰成为了生命科学领域的一个研究热点。小干扰RNA (siRNA)介导的RNA干扰正是通过下调致病基因从而对很多人类疾病实现治疗,

RNAi表达载体构建(一)

近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰(RNA interference,RNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分

RNA干涉杀虫剂需要特别的安全测试

  用于开发杀虫剂和抗虫害作物的一种新技术可能对有益物种产生影响,而当前的毒性测试可能测不出这种影响。   发表在8月号的《生物科学》(BioScience)杂志的一篇论坛文章说,标准的毒性测试不足以评估有潜力制造杀虫剂和基因修饰农作物的一种新技术的安全性。该文章的作者、美国农业部农业研究局的Jo

孟山都CTO谈基因编辑、RNA干扰与行业并购影响

  Fraley对两公司的合并持乐观态度,并认为这是一次积极健康的合并。通过合并,两者可扩大规模,同时得到更多研发资金,继续保持育种优势。  记者:关于基因编辑的问题。之前有报道说孟山都已经在谈基因编辑的专利问题,很多人猜测孟山都很可能已经有基因编辑的产品在研发,或者是将要推出来,能不能介绍一下基因