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标签酶消化释放标签实验

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE 仪器、耗材 Eppendorf 试管 实验步骤 实验方案 A 1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质: 2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。 3.时收集上清液(含有释放的 cDNA 标签) 4.用 LoTE 扩容到 200mL。 5.等体积的 PCI 抽提,乙醇沉淀(实验方案 A,第 2 步)。 6.将冲洗和风干后的沉淀重新悬浮于 10 ul LoTE 中。 实验方案 B 1.......阅读全文

双标签的分离实验

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤 一、用 NlaIII 消化双标签,释放接头1.向 480ul 已纯化的 PCR 产物中加入下列成分:2.在 37℃ 下消化 Ih(不要热失活酶,否则将致使 22~26bp 的小双标签变性)。3.消化产物可以在 4℃ 下

双标签的分离实验

试剂、试剂盒溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤一、用 NlaIII 消化双标签,释放接头1.向 480ul 已纯化的 PCR 产物中加入下列成分:2.在 37℃ 下消化 Ih(不要热失活酶,否则将致使 22~26bp 的小双标签变性)。3.消化产物可以在 4℃ 下过夜保存,或者用 Dyn

双标签的分离实验

            试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 BSA LoTE cDNA标签 实验步骤

ELISA试剂盒的储存

一切试剂均按试剂瓶标签上所示保留。请注意,收到试剂盒后请尽快将规范品、检查溶液A、检查溶液B以及96孔板保留于-20℃。 运用后的试剂盒:剩下试剂仍需依照试剂瓶标签所示的温度保留,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保留于-20℃,防止湿润。试剂盒内酶标条可拆卸,按试验需要可分屡次运用。运用后的剩下试剂盒

BIORAD 采用 Profinity eXactTM融合标签表达系统纯化无标签...

BIORAD 采用 Profinity eXactTM融合标签表达系统纯化无标签的重组蛋白亲和标签已成为后基因组学时代纯化重组蛋白常用手段。此方法无需了解蛋白质的生化特性或生理活性,就可通过带标签的重组融合蛋白选择性地与层析基质上的配体结合,从而得以纯化任何蛋白质。此方法与常规的层析方法不同之处在于

Nature子刊:实现同时编辑几十个基因!

  每个人都在谈论CRISPR-Cas。这种生物技术提供了一种相对快速和简单的方法来操纵细胞中的单个基因,这意味着它们可以被精确地删除、替换或修改。此外,近年来,研究人员也一直在使用基于CRISPR-Cas的技术系统地增加或减少单个基因的活性。无论是在基础生物学研究领域,还是在植物育种等应用领域,相

如何阅读基因载体图谱

  基因载体是基因工程的核心,也是基因治疗中强有力的生物工具,我们先来认识和阅读载体图谱吧。   一、载体分类及载体组成元件   载体分类   1、按属性分类:病毒载体和非病毒载体   病毒载体是一种常见的分子生物学工具,可将遗传物质带入细胞,原理是利用病毒具有传送其基因组进入目

如何阅读基因载体图谱

  基因载体是基因工程的核心,也是基因治疗中强有力的生物工具,我们先来认识和阅读载体图谱吧。   一、载体分类及载体组成元件   载体分类   1、按属性分类:病毒载体和非病毒载体   病毒载体是一种常见的分子生物学工具,可将遗传物质带入细胞,原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细

如何阅读基因载体图谱?(二)

二、选择和准备载体选择载体主要依据构建的目的,同时还要考虑载体中应有合适的限制酶切位点等。如果构建的目的是要表达一个特定的基因,则要选择合适的表达载体。选用哪种载体,还是要结合目的基因及载体特点以实验目的为准绳。 载体选择主要考虑下述3点: 1、构建DNA重组体的目的,克隆扩增/表达表达,选择合适的

《细胞》《科学》两篇文章发表酶学研究新突破

酶是生物体活细胞产生的具有特殊催化活性和特定空间构象的生物大分子,包括蛋白质及核酸,又称为生物催化剂。这种重要的生物分子一直以来都是科学家们研究的重点之一,近期在《Science》和《Cell》杂志上分别报道了两项重要的成果。 原文检索:Science 27 July 2007:Vol. 317

2019年8月CRISPR/Cas最新研究进展

  基因组编辑技术CRISPR/Cas9被《科学》杂志列为2013年年度十大科技进展之一,受到人们的高度重视。CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列的简称,Cas是CRISPR相关蛋白的简称。CRISPR/Cas最初是在细菌体内发现的,是细菌用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。图片

用新一代测序寻找罕见变异 需谨慎

  新一代测序引入的误差,使得我们很难检测到罕见变异,而这些罕见变异在癌症等疾病中发挥着重要的作用。在Biotechniques最近的一篇新闻中,Janelle Weaver报道了科学家们在描绘这些误差以及开发策略提高精度方面所取得的进步。  美国国家心脏、肺和血液研究所外显子组测序项目的研究人员,

Biotechniques:如何降低下一代测序1%的碱基错误识别?

  为什么复杂疾病的全基因组关联研究都是失败的?  下一代测序带来的误差,使得我们很难检测到罕见变异,而这些罕见变异在癌症等疾病中发挥着重要的作用。  在Biotechniques最近的一篇新闻中,Janelle Weaver报道了科学家们在描绘这些误差以及开发策略提高精度方面所取得的进步。  美国

GST标签蛋白纯化介质使用介绍

GST标签蛋白纯化介质 Affinity Resin for GST-tag Protein一、GST标签蛋白纯化介质简介:     GST标签蛋白纯化介质专为GST(谷胱甘肽硫转移酶)标签融合蛋白的纯化而设计,采用该产品可快速从细胞发酵液中提取含有GST标签的目标蛋白

基因组测序方法和技术研发取得多项新进展

  包括东京大学在内的多家日本机构合作开发出一种可与新一代测序技术(NGS)联合使用检测蛋白互作组的技术,即无细胞展示技术。NGS通过与无细胞展示技术联合检测蛋白间互作,具有高通量、广覆盖率且无须利用克隆等特点,尤其能提高数据的可靠度。   美国哥伦比亚大学的一个研究小组开发出一种能显著提高碱基识

科学家研究利用精子为纳米机器人供能

北京时间12月5日消息,据《科学日报》杂志4日报道,根据一项最新研究显示,纳米仪器将采用一种为精子长距离游动提供能量的生物途径,用来释放药物,或者在人体内执行机械功能。 科内尔贝克动物健康研究所的研究人员进行的这种研究,可能是首次证明了如何能将多级生物学途经在人造设备中组装起来,并发挥功能。特拉维

蛋白纯化的三种新工具

  蛋白亲和标签是蛋白质组研究中的一个关键性工具,迄今为止人们已经开发出了许多久经考验的蛋白标签系统,例如六聚组氨酸、HA、Myc和FLAG等等。尽管这些标签系统各具特色,但它们也分别存在着一些缺陷,还不能完全满足研究者们的需要。   为此,Biotechniques杂志盘点了近期出现的三种新蛋白

泰国官方最新公布《食品生产用酶》

  泰国公共卫生部14日最新消息:该部发布最新法规《食品生产用酶》,该法规规定食品生产用酶是特殊控制食品,必须先在泰国食品药品监督管理局注册。该法规规定产品定义、其质量标准、进口或制造酶的要求和其标签标识要求等,并以附表的形式规定了食品生产用酶的安全评估报告准则等。   泰国官方明确规定生产食品加工

转座子标签法(transposon tagging)克隆基因的改进

1 转座子及转座子标签法克隆基因基因标签法克隆植物组织中的基因是较为常用的一种方法,T-DNA和转座子均可作为基因标签。转座子最早由美国的细胞遗传学家Mc- clintock在玉米中发现,它是指基因组中一段特定DNA片段,能在转位酶的作用下从基因组的一个位点转移到另一个位点。转座子不仅能在本基因

转座子及转座子标签法克隆基因的改进

1 转座子及转座子标签法克隆基因基因标签法克隆植物组织中的基因是较为常用的一种方法,T-DNA和转座子均可作为基因标签。转座子最早由美国的细胞遗传学家Mc-clintock在玉米中发现,它是指基因组中一段特定DNA片段,能在转位酶的作用下从基因组的一个位点转移到另一个位点。转座子不仅能在本基因组中转

GST-pulldown操作流程

利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合,已广泛应用于分子生物学(1)证实两种蛋白可能有相互作用(2)寻找能与已知蛋白发生相互作用的未知蛋白。实验方法原理利用重组技术将探针蛋

关于前列腺癌最新研究成果一览

  【1】eLife:前列腺癌标志物PSA会激活血管和淋巴管生成因子,促进癌症转移  DOI: 10.7554/eLife.44478  一项新的研究表明,前列腺特异性抗原(PSA)是一种前列腺癌标志物,是激活血管内皮细胞和淋巴管生成生长因子的催化剂之一,而这些因子有助于癌症的扩散。赫尔辛基大学(U

前列腺癌研究进展一览!

  【1】eLife:前列腺癌标志物PSA会激活血管和淋巴管生成因子,促进癌症转移  DOI: 10.7554/eLife.44478  一项新的研究表明,前列腺特异性抗原(PSA)是一种前列腺癌标志物,是激活血管内皮细胞和淋巴管生成生长因子的催化剂之一,而这些因子有助于癌症的扩散。赫尔辛基大学(U

基因置换实验——构建融合蛋白

实验材料菌株BY4741质粒PDB118试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液仪器、耗材YPD 平板YPD 液体培养基血球计数板SC-his平板实验步骤YPD 平板 第 1 天将菌株 7-3 在 YPD 平板上划单克隆,30°C 下培养两天。第 3 天挑取单克隆,在 5 mlYPD 液体培养基中培养,30°C 过

增强蛋白偶联:Abcam收购Expedeon蛋白质组学和免疫学业务

   • 包括领先的蛋白质偶联技术和行业品牌 Lightning-Link® 和 CaptSureTM  • 有机会通过整合 Expedeon 和 Abcam 的技术开发新产品,为研究和诊断开发提供支持  英国剑桥 – 2020 年 1 月 6 日:生命科学试剂和工具领域的全球创新者 Abcam p

ELISA开发方法

一、前言ELISA在生物药物研发的各个环节均有广泛的应用:如以生物大分子检测为目的,在药效药代评估时,对动物实验和临床实验中的血液样品的药物浓度和生物大分子标志物进行定量检测;以亲和力测定为目的,在质量分析过程中,对抗体相对于靶点抗原的亲和力检测;以亲和力筛选为目的,在抗体发现过程中,对杂交瘤细胞克

多肽融合标签的移除策略

谢浩 杨程 陈丽娥(武汉理工大学生物科学与技术系,武汉430070)摘要:多肽融合标签能够赋予目标蛋白新的特性,便于目标蛋白的定位、追踪、纯化以及结构和相互作用研究.但在很多情况下,尤其是研究蛋白质结构或分离纯化药用蛋白时,需要将多肽融合标签从融合蛋白上切除,以降低和消除多肽融合标签对目标蛋白结构和

质谱检测法与蛋白质分析(三)

  Protein(s):待测蛋白质样品;Enz. Digestion:酶解;Pep. Mixture:裂解产物混合物;   MS Analysis:质谱检测分析;DB Search:数据库比对搜索;Identities:鉴定;   Prot.DB :蛋白质数据库;Proteom

质谱检测法如何进行蛋白质分析?

  MS/MS操作模式  串联质谱仪通常使用的都是离子模式来鉴定蛋白质的氨基酸序列。目前所有的MS/MS质谱仪都具有该功能。不过其它特殊的质谱仪也具有MS/MS功能。如果要发现蛋白质中的某个功能基团则需要用到母离子扫描功能或者中性丢失扫描功能,而这就必须用到三重四级杆质谱仪,如Q-Q-Q质谱仪,或四

到底致不致癌?草甘膦又出幺蛾子

  日前,有媒体报道:继3月10日美国加利福尼亚州法官裁决在加州销售的草甘膦除草剂要贴上致癌标签后,近日美国俄勒冈州也在考虑通过一项法案来严控未经许可的转基因作物。该消息一出,“草甘膦致癌”的说法又盛行网络。  这种说法是否属实?科技日报记者从美国孟山都公司得到独家消息,该提案目前仍处于计划阶段,草