转座子及转座子标签法克隆基因的改进
1 转座子及转座子标签法克隆基因基因标签法克隆植物组织中的基因是较为常用的一种方法，T-DNA和转座子均可作为基因标签。转座子最早由美国的细胞遗传学家Mc-clintock在玉米中发现，它是指基因组中一段特定DNA片段，能在转位酶的作用下从基因组的一个位点转移到另一个位点。转座子不仅能在本基因组中转座，也能转入其它植物的基因组中。转座的结果是使被转入的基因失活，从而有效地诱导产生表型突变株。然后构建一个对应于突变株的基因库，用作标签的转座子作为探针从基因库中筛选相对应的克隆，分离得到相对应于变异的基因，这就是转座子标签克隆基因。玉米的Ac/Ds转座子家族是研究较为深入的植物转座子。2 Ac、Ds转座子作基因标签时遇到的问题2．1 Ac属于自主性转座子，自己能编码转位酶，因此可直接用于基因标签。但是由于Ac能自由地在基因组中转座，结果使转座产生的变异不稳定，给确定和分析突变基因带来困难。2．2 Ds属非自主性转座子，本身不能编码转......阅读全文
转座子及转座子标签法克隆基因的改进
1 转座子及转座子标签法克隆基因基因标签法克隆植物组织中的基因是较为常用的一种方法，T-DNA和转座子均可作为基因标签。转座子最早由美国的细胞遗传学家Mc-clintock在玉米中发现，它是指基因组中一段特定DNA片段，能在转位酶的作用下从基因组的一个位点转移到另一个位点。转座子不仅能在本基因组中转
转座子标签法（transposon－tagging）克隆基因的改进
1 转座子及转座子标签法克隆基因基因标签法克隆植物组织中的基因是较为常用的一种方法，T-DNA和转座子均可作为基因标签。转座子最早由美国的细胞遗传学家Mc- clintock在玉米中发现，它是指基因组中一段特定DNA片段，能在转位酶的作用下从基因组的一个位点转移到另一个位点。转座子不仅能在本基因
基因工程操作技术及原理之基因克隆
1．克隆已知序列的基因根据已知基因的序列设计引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同种属之间，基因编码区序列的同源性高于非编码区的序列。在某种植物的同源基因被克隆的条件下，可先构建eDNA文库或基因组文库，然后以该基因(或部分序列)为探针来筛选目的基因的克隆。2．功能克隆根据基因的产物
基因工程操作技术及原理之基因克隆
1．克隆已知序列的基因 根据已知基因的序列设计引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同种属之间，基因编码区序列的同源性高于非编码区的序列。在某种植物的同源基因被克隆的条件下，可先构建eDNA文库或基因组文库，然后以该基因(或部分序列)为探针来筛选目的基因的克隆。 2．功能克隆 根据基
概述转座因子在分子生物学研究中的应用
随着人们对转座因子的转位机制和作用研究的逐步深入，转座因子的应用也越来越广泛，其中主要有以下三个方面的应用。 （1）遗传育种上的应用。一方面，转座子的转位会在靶位点引起其邻近基因序列和功能的变化而引起突变。因此，可根据转座子转座的遗传学效应来筛选突变体，培育新品种。另一方面，某些转座子可能是调
酵母菌基因克隆实验——互补法
实验材料酵母菌实验步骤1. 用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2. 影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过夜培养之
基因克隆
外源DNA和质粒载体的连接反应 外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交
GFP抗体—绿色荧光蛋白的单克隆和多克隆标签抗体
GFP（Green Fluorescent Protein，绿色萤光蛋白）是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。GFP标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛 应用于各种细胞
靶向克隆法
靶向克隆法是一种新的基因克隆方法，该克隆方法的特点是：在基因克隆过程中不使用已有的DNA Ligase，而是使用新开发的靶向克隆酶。靶向克隆酶能够使末端序列相同的双链DNA(14bp-18bp)同源重组，从而达到克隆基因的目的。LP Recco酶，中文名：靶向克隆酶，无需传统基因克隆所需要的限制性内
转座子插入引起的基因突变
一、原理转座子（Tn）是能在不同复制子之间转移位置的核苷酸顺序。它一般来自抗药性质粒，由一个或几个抗药性基因加上两端两个顺序相同（但是方向不一定相同）的核苷酸片段（称为插入顺序IS）构成。当一个转座子转移位置而插入某一基因时，能使这一基因失活，即发生突变。各个转座子的抗药性基因、转移频率、插入位置、
关于单克隆抗体有限稀释法克隆法介绍
1．材料 （1）微量培养盘，盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞（即饲养细胞）每孔2万～4万。 （2）HT培养基 2．操作方法 （1）取出抗体阳性孔细胞，用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色，计数。 （2）用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和
稀释法克隆培养
实验方法原理 低密度接种细胞，培养至集落形成，细胞染色（用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。 实验材料 CHO细胞
稀释法克隆培养
实验方法原理低密度接种细胞，培养至集落形成，细胞染色（用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。实验材料CHO细胞胰蛋白酶仪器、耗材培养基吸管培养皿血细胞计数器实验步骤1. 细胞用胰蛋白酶（胰蛋白酶，0.25 %，1 : 250或相当活性）消化制备单细胞悬液。消化不充分会
稀释法克隆培养
实验方法原理低密度接种细胞，培养至集落形成，细胞染色（用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。实验材料CHO细胞 胰蛋白酶
由转座子插入引起的基因突变
实验概要本实验介绍了由转座子插入引起基因突变的原理和实验方法。实验原理转座子（Tn）是能在不同复制子之间转移位置的核苷酸顺序。它一般来自抗药性质粒，由一个或几个抗药性基因加上两端两个顺序相同（但是方向不一定相同）的核苷酸片段（称为插入顺序IS）构成。当一个转座子转移位置而插入某一基因时，能使这一基因
基因克隆技术
一、目的基因的获得目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-多聚酶链式
基因克隆技术
一、目的基因的获得 目的基因是指所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种，如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等，其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应（PCR）或逆转录-
基因的图位克隆
图位克隆(Ｍａｐ-ｂａｓｅｄｃｌｏｎｉｎｇ)又称定位克隆(ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｃｌｏｎｉｎｇ),1986年首先由剑桥大学的Ａｌａｎｃｏｕｌｓｏｎ提出,用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行的,无需预先知道基因的ＤＮＡ顺序,也无需预先知道其表达产物的有关信息,但应有以下两方面的基本情况:
PCR扩增产物的克隆——TA克隆法
实验方法原理TA克隆 系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3'末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3'T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位
PNAS：应用图位克隆法分离得到首例水稻抗虫基因
武汉大学生命科学学院何光存教授实验室与国内同行合作，经过14年的研究，近日在水稻抗褐飞虱基因克隆和抗虫分子机理方面取得重大突破，成功分离了抗褐飞虱基因Bph14，研究结果发表在最新一期美国《国家科学院院刊》(Proceedings of the National Academy of Scien
基因分离克隆的方法
1 基因芯片技术分离目的基因生物芯片是高密度固定在固相支持介质上的生物信息分子的微列阵。列阵中每个分子的序列及位置都是已知的，并按预先设定好的顺序点阵。基因芯片是生物芯片的一种，其上固定的是核算类物质，主要用于DNA、RNA分析。分为DNA芯片和微点阵两种。分离目的基因是是指从基因组中发现或找出某个
鸟枪克隆法的定义
中文名称鸟枪克隆法英文名称shotgun cloning method定 义用限制性酶或超声波将基因组DNA切成随机性片段，克隆入DNA载体，转化宿主细胞，构建基因组文库，再从基因组文库中筛选得所需要的序列或基因克隆。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
Myc抗体推荐—高品质Myc标签单克隆抗体
随着蛋白质组学的迅猛发展，重组蛋白质的使用在近年来大大增加。重组杂合体含有一个亲和标签如GST、Myc、His等，可用于辅助目标蛋白的纯化，这已经被广泛使用。利用融合蛋白有助于重组蛋白纯化和检测的这个有点被广泛认可。Myc标签相当于人的c-Myc 410-419位肽段（序列为：EQKLISEED
我国创建世界上最大转座子插入资源库
不知你有没有注意到，从菜市场买回来的玉米，有的是黄灿灿的，有的却像个大花脸，中间夹杂着紫色、白色的玉米粒？ 其实，这是玉米的天性使然。玉米基因中有很多非常活跃的转座子，它们就像一支“小画笔”，跳到哪个基因上，就会抹去那里本来的“颜色”。因此导致籽粒颜色变化有一部分是转座子运动产生的。 转座
三种植物基因克隆的策略与方法
基因的克隆就是利用体外重组 技术，将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列，确定染色体定位，阐明基因的生化功能，明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展，使人们掌握了大量
三种植物基因克隆的策略与方法
基因的克隆就是利用体外重组技术，将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列，确定染色体定位，阐明基因的生化功能，明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物 发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展，使人们掌握了大量
著名分子遗传学家洪孟民逝世－享年82岁
著名分子遗传学家，中国科学院院士，中国共产党优秀党员，全国先进工作者，中国科学院第六、七届生物学部副主任，中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所研究员洪孟民因病医治无效，于2012年11月13日16时25分在上海市第六人民医院逝世，享年82岁。 洪孟民，1931年1
单克隆抗体技术：克隆化(有限稀释法、软琼脂克隆化、...
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交瘤细胞，经
目的基因的亚克隆
实验材料 E.coli JM109试剂、试剂盒 牛肉膏胰蛋白胨NaCl微量细菌基因组抽提试剂盒BamH IXho1 核酸内切酶凝胶电泳回收试剂盒仪器、耗材 高速台式冷冻离心机水平电泳仪漩涡混合仪紫外检测仪凝胶成像分析系统微量移液器及吸头
目的基因的亚克隆
实验题目 ：目的基因的亚克隆一、实验目的1、掌握细菌基因组提取的方法和原理。2、掌握限制性核酸内切酶处理基因组及其结果分析。3、掌握基因片段回收的方法。二、实验原理细菌基因组的提取：通过碱法或者酶法裂解细菌之后，可以将胞内的核酸和蛋白质全释放出来。DNA溶于1mol/L的NaCl中，不溶于 0.