液相色谱柱使用中常见问题解析
1、对于一根常用的C18柱,拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做? 答:新柱活化,实际上是一个平衡的过程,除了用流动相平衡外,有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡,特别是测定分子量比较高的多肽,尤其重要。因为分子量高的物质分子,扩散速度慢,平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单,多进几次样品,直到峰面积和保留时间稳定,再进行正式进样测定。 如果要加快平衡时间,把前面用来平衡的进样样品浓度加大,或者不等洗脱完成,连续进样多针。用待测物对新柱平衡,目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。 2、测定多肽,一般采用什么柱子?流动相是乙腈和水,还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽,应该怎么选择柱子? 答:分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定,也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。 3、氨基柱在进酸性样品时,很伤柱子,如使用一段时间后,柱效降低,峰......阅读全文
液相色谱柱影响因素
A:物理因素1.硅胶纯度--填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度2.色谱柱尺寸--填料床的长度和内径3.颗粒形状--球型或不规则型4. 粒径--平均颗粒直径, 通常3-10µm5.表面积--颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示6.孔径--颗粒的孔或腔的平均尺寸, 范围80-3
液相色谱柱性能因素
液相色谱柱的性能关系很多因素,基质(matrix)或者说担体、载体的化学性质、键合相(固定液)的化学性质、填料形状大小粒度分布、碳量和键合度等。 色谱柱填料可以由基质直接构成,如硅胶、氧化铝、高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或者甲基丙烯酸酯等;也可以在这些基质的基础上涂布或化学键合固定液来构成,如:zui
液相色谱柱相关推荐
在选择色谱柱之前,先多了解自己的样品和杂质,他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等, 1.样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测,即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱 2. 如果样品极性太强,或酸性太强;可以选择CN,NH2,或硅胶柱,HILI
液相色谱柱性能因素
液相色谱柱的性能关系很多因素,基质(matrix)或者说担体、载体的化学性质、键合相(固定液)的化学性质、填料形状大小粒度分布、碳量和键合度等。 色谱柱填料可以由基质直接构成,如硅胶、氧化铝、高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或者甲基丙烯酸酯等;也可以在这些基质的基础上涂布或化学键合固定液来构成,如:最经典
液相色谱柱的保存
1.反相色谱柱每天实验后的保养: 使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。2.长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于
液相色谱柱使用误区
色谱柱在色谱仪分析系统中起着分离作用,是色谱分析的核心部件。正确使用和维护色谱柱尤为重要,使用不当就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。以下从几个方面简答介绍液相色谱柱在使用过程中应当着重注意的问题。一、避免压力和温度的急剧变化 温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;
液相色谱柱如何选择
基材色谱柱的基质分为硅胶基质填料,聚合物基质填料,其他无机填料。硅胶基材填料:1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有较强极性的官能团,如氨基基团和氰基基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(Si-OH)或其他基团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大
液相色谱柱怎么换
先用95%乙腈+5%水冲洗旧柱子(冲去柱子中残留的缓冲盐和之前难以洗脱的组分),关掉流速,待流速降至0后,把柱子两边的PEAK头拧下来,用配套的塞子将换下的柱子两头堵上,密封保存更换新的色谱柱时,应先将需换上的柱子两边的塞子旋开。确定好柱子标示的方向后,先接柱子入口端,并使柱子出口端略高于入口端,这
液相色谱柱的选择
1.HPLC色谱分离模式的选择在建立化合物的HPLC方法时,可以首先根据化合物的分子量大小,极性大小及PKa,选择合适的分离模式,在适当的分离模式下去再去优化同类的色谱柱及流动相。化合物分子量2000Da的分离模式2.反相键合相色谱柱性能影响因素对于大部分小分子化合物来说都可以选择键合相的反相色谱,
液相色谱柱的保养
液相色谱柱的保养:色谱柱在使用前,进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是zui佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。
液相色谱柱使用误区
色谱柱在色谱仪分析系统中起着分离作用,是色谱分析的核心部件。正确使用和维护色谱柱尤为重要,使用不当就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。以下从几个方面简答介绍液相色谱柱在使用过程中应当着重注意的问题。 一、避免压力和温度的急剧变化 温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况
液相色谱柱的使用
色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。1、样品的前处理a、最好
怎样选择液相色谱柱?
现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。一.硅胶基质填料1.正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其它具有极性官能团,如,胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。由
液相色谱柱影响因素
液相色谱柱影响因素A:物理因素1.硅胶纯度--填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度2.色谱柱尺寸--填料床的长度和内径3.颗粒形状--球型或不规则型4. 粒径--平均颗粒直径, 通常3-10µm5.表面积--颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示6.孔径--颗粒的孔或腔的平均尺寸, 范围8
液相色谱柱的保护
液相色谱柱的保护 在液相色谱仪的使用中,保持液相色谱柱的柱效、容量和渗透特性,延长柱子的使用寿命非常重要。色谱柱用久后常出现柱压升高,柱效降低,峰形畸变, 保留时间改变等变化,如不采取适当措施,色谱柱将无法再使用,缩短色谱柱的使用寿命,本文从影响色谱柱的外界因素出发,并考虑色谱柱
液相色谱柱的保存
1.反向色谱柱实验后的保养: 使用缓冲液或含盐的流动相,实验完后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。 2.长期保存色谱柱: 如,色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下,对于反相柱
液相色谱柱的再生
因为,色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的增加,会出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰的现象,一般来说是柱效的下降。 1.反向柱的再生: 依次采用20~30倍的色谱柱体积的甲醇:水=10:90(V/V),乙腈,异丙醇作为流动相冲洗色谱柱,完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。 2.正相柱的再生
液相色谱柱的性能
与液相色谱柱的性能相关的因素很多,基质(matrix)或者说担体、载体的化学性质、键合相(固定液)的化学性质、填料形状大小粒度分布、碳量和键合度等等。色谱柱填料可以由基质直接构成,如硅胶、氧化铝、高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或者甲基丙烯酸酯等等;也可以在这些基质的基础上涂布或化学键合固定液来构成,如:
液相色谱柱怎么换
先用95%乙腈+5%水冲洗旧柱子(冲去柱子中残留的缓冲盐和之前难以洗脱的组分),关掉流速,待流速降至0后,把柱子两边的PEAK头拧下来,用配套的塞子将换下的柱子两头堵上,密封保存更换新的色谱柱时,应先将需换上的柱子两边的塞子旋开。确定好柱子标示的方向后,先接柱子入口端,并使柱子出口端略高于入口端,这
如何选择液相色谱柱
由于篇幅的原因色谱柱相关能查阅到的基础理论本文就不予介绍,本文阐述的内容主要是本人在分析实际工作中选择液相色谱柱的心得体会,个人之见,难免偏颇,如有不足,敬请指正。一、色谱柱参数及其意义选择色谱柱时应考虑不同色谱柱参数的影响,以下内容对色谱柱的参数进行分析。1、色谱柱尺寸较长的色谱柱组分保留较强,运
液相色谱柱的性能
与液相色谱柱的性能相关的因素很多,基质(matrix)或者说担体、载体的化学性质、键合相(固定液)的化学性质、填料形状大小粒度分布、碳量和键合度等等。色谱柱填料可以由基质直接构成,如硅胶、氧化铝、高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或者甲基丙烯酸酯等等;也可以在这些基质的基础上涂布或化学键合固定液来构成,如:
液相色谱柱的填装
液相色谱柱、特别是高效液相色谱柱的填装,需要有较高的技巧和熟练的技能。因此,有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。但是,只要掌握了一些基本的规律和方法,任何实验室都可以填装出具有较高柱性能的色谱柱。当然,目前大多数实验室多是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。但是在一些有特殊需要的情况
液相色谱柱的分类
一、色谱柱基本知识 色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料好多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,1
液相色谱柱相关推荐
液相色谱柱相关推荐在选择色谱柱之前,先多了解自己的样品和杂质,他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等, 1.样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测,即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱 2. 如果样品极性太强,或酸性太强;可以选择CN,NH2,
液相色谱柱的保存
1.反相色谱柱每天实验后的保养: 使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。 2.长期保存色谱柱: 如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的
液相色谱柱的选择
液相色谱柱决定最终分离效果,所以在选择色谱柱时候有必要考虑清楚自己的需求。 首先液相色谱柱目前来说分为正反相色谱柱,成都摩尔科学仪器有限公司提供的正相色谱柱有(HP-Amino,HP-Cyano,HP-Diol,HP-Silica)4款为大家选择。,反相有C18反相色谱柱.C4
液相色谱柱怎么选择
一、液相色谱柱选择的简单思路 1.确定分离目的确定你的应用是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命,低的操纵本钱等等。 2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质..诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。 3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。 二、液相色谱柱选择的条件 A填料基质
液相色谱柱相关推荐
液相色谱柱相关推荐在选择色谱柱之前,先多了解自己的样品和杂质,他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等, 1.样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测,即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱 2. 如果样品极性太强,或酸性太强;可以选择CN,NH2,
如何安装液相色谱柱
对,一般是这个样子安装的。不过平放也可以。出口高的意思是这样:液相仪器特别害怕气泡,气泡进入仪器之后,可能会堵住柱子。那么气泡也是比较轻的,一般来说会往上浮。所以色谱柱的出口在高处。一旦气泡进入色谱柱,还有可能被流动相推出来。不过现在的低压四元泵都带有在线脱气的装置,所以色谱柱平放也没什么关系。
液相色谱柱使用误区
色谱柱在色谱仪分析系统中起着分离作用,是色谱分析的核心部件。正确使用和维护色谱柱尤为重要,使用不当就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。以下从几个方面简答介绍液相色谱柱在使用过程中应当着重注意的问题。 一、避免压力和温度的急剧变化 温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况