做HPLC的“鬼峰”知识
鬼峰，顾名思义，就是指在相同的色谱条件下，有时候出现，有时候消失的杂峰。鬼峰产生的原因是多种多样的，查询了相关文献，结合本人以往的经验，来谈谈鬼峰的成因及应对策略，主要体现在以下几个方面：1、流动相、样品及仪器中存在杂质。运行梯度洗脱时，由于开始时有机相比例不高，洗脱能力不强，部分杂质在便富集在色谱柱头处。随着流动相中有机相比例的提高，洗脱能力不断增强，一开始富集的杂质被洗脱下来，流出色谱柱而进入检测器，从而形成鬼峰。2、流动相脱气不完全。当水和有机相在混合器中混合时，产生了气泡。3、操作问题。针对以上原因，给出的对策如下：原因1，主要有几种情况：1、试剂问题：a）有机试剂：甲醇制备工艺相对乙腈来说较为简单，杂质含量也较少。但是由于甲醇紫外吸收范围比乙腈广，所以当使用紫外检测器时，尤其是波长较低时，尽量使用乙腈作为有机相，用甲醇的话漂移太大。而用作梯度色谱的乙腈质量要求较高，一般用进口梯度色谱专用乙腈能够很好的减少鬼峰的出现。b......阅读全文
HPLC基础知识教程(十二)
二、化学键合固定相 将有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶表面的游离羟基上而形成的固定相称为化学键合相。这类固定相的突出特点是耐溶剂冲洗，并且可以通过改变键合相有机官能团的类型来改变分离的选择性。 1．键合相的性质 目前，化学键合相广泛采用微粒多孔硅胶为基体，用烷烃二甲基氯硅烷或烷氧基硅烷
HPLC基础知识教程（十四）
V．HPLC应用 一、样品测定 1．流动相比例调整：由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度，因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相（按经验，主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜）。所以建议第一次检验时请少配流动相，以免浪费。弱电解质的流动相其重现性更不容易达到，请注意充分平衡柱
HPLC基础知识教程（十）
一、基质（担体） HPLC填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。无机物基质主要是硅胶和氧化铝。无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀。有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少
HPLC基础知识教程(十三)
3．流动相的pH值 采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分
HPLC基础知识教程（四）
III．HPLC系统 HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代HPLC仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。制备型HPLC仪还
HPLC基础知识教程(三)
4．相平衡参数 分配系数(distributioncoefficient，K)——在一定温度下，化合物在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中的浓度之比。K＝。 分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中，K有不同的概念：吸附色谱法为吸附系数
HPLC基础知识教程（九）
5）、池体积：除制备色谱外，大多数HPLC检测器的池体积都小于10µ；l。在使用细管径柱时，池体积应减少到1~2µ；l甚至更低，不然检测系统带来的峰扩张问题就会很严重。而且这时池体、检测器与色谱柱的连接、接头等都要精心设计，否则会严重影响柱效和灵敏度。 3．紫外检测器(ul
HPLC基础知识教程（一）
I．概论 一、液相色谱理论发展简况 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法
HPLC基础知识教程（五）
2．泵的使用和维护注意事项 为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作： ①、防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Mi
HPLC基础知识教程(二)
II．基本概念和理论 一、基本概念和术语 1．色谱图和峰参数 色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elutionprofile)。 基线(baseline)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出
HPLC基础知识教程（六）
1．柱的构造 色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛
HPLC造成峰拖尾的原因分析
a.筛板阻塞；反冲色谱柱、更换进口筛板b.色谱柱塌陷；填充色谱柱c.有干扰物质的存在；使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱e.流动相PH值不合适；调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰f.样品与填料表面的溶化点发生反应；加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱
做HPLC或者紫外用DMSO做溶剂可以吗
做紫外的时候没有问题，拿dmso做参比就是了。做hplc的时候有点问题就是，dmso与流动相的相溶性问题，相容性不好，出的峰肯定很丑。
HPLC出峰太早怎么办
液相色谱出峰时间有死时间和保留时间..一般来讲死时间是指溶剂从通入到被检测到的时间，而死时间是被检测物质的特征时间，用来判断物质是什么，所以无所谓好不好。
HPLC故障排除：峰形问题（一）
1. 峰形1.1.在RP-HPLC应用之初，峰拖尾就是最常见的峰形问题（拖尾峰是RP-HPLC自出现以来最普遍的峰形问题）。大多数峰拖尾是由于柱内硅胶颗粒表面上的酸性或离子化硅烷醇基团之间相互作用而导致的。低纯度硅胶（通常称为“A型”或酸性硅胶）具有高含量的酸性硅烷醇（-Si-OH）基团，其富含的金
HPLC故障排除：峰形问题（二）
1.3.色谱图中所有峰拖尾或峰变形通常是由物理作用导致的，而非化学作用。如果色谱图中的峰形均表现相同类型的变形（图3），则问题最早应出现在分析物通过色谱柱迁移之前（主要问题发生在分析物在色谱柱中迁移之前）。这种峰形变形最常见的致因是：玻璃料或柱头的空隙部分堵塞（此类峰变形最常见的原因是筛板部分堵塞或
液相色谱C18柱基线不平，出现鬼峰
先检查下你使用的波长是不是到达紫外极限，比如200 205nm，然后检查泵压力是不是不稳，可以拆下单通阀进行超声清洗试试，然后是柱子了，换个柱子和预柱，再试试，最后是流动相要现配呀比例，混匀，
如何解决液相色谱仪进样阀引起的鬼峰
一般进样阀上的鬼峰都是因为没有洗干净导致的。最简单的办法就是换一个定量环。然后其他的地方全部拆开，清洗部件。不过如果没有拆过六通的经验，就不要拆了。因为内部的构造有点儿复杂，万一装不上就比较麻烦了。不会拆的话，你只能用5ml或者10ml的大号进样针大量地推注清洗，而且每次推一管就要上下搬进样阀一两次
标准物质HPLC保留时间与峰宽
正常的，证明第二种流动相的柱效更好，计算一下分离度，也就是R可以知道分离度更好。是否有利于谱图的观察可以通过计算分离度得到，分离度越大越好，一般超过1.5就认为完全分离。柱效通过理论踏板数表示，表明你的柱子的对这个样品的分离能力。分离度R表明你的柱子对这两种样品的分离能力。
HPLC流速和出峰时间问题
出峰时间可能会后延，但没有个确定的比例，峰面积可能会变宽，峰高变小，拖尾，峰前申
手性HPLC峰面积怎么计算ee值
手性HPLC峰面积计算ee值：测定ee值不需要标准品的啊，只需要手性柱把两个异构体分开，然后两个峰面积之差除以两者峰面积之和即可。首先用手性柱测试外消旋标准品，测试两个对映异构体的峰面积比例（一般1：1，也有不成1：1的）。根据这个比例测定样品ee值。没有标准品，做手性柱，出现两个峰的峰面积之比就是
手性HPLC峰面积怎么计算ee值
手性HPLC峰面积计算ee值：测定ee值不需要标准品的啊，只需要手性柱把两个异构体分开，然后两个峰面积之差除以两者峰面积之和即可。首先用手性柱测试外消旋标准品，测试两个对映异构体的峰面积比例（一般1：1，也有不成1：1的）。根据这个比例测定样品ee值。没有标准品，做手性柱，出现两个峰的峰面积之比就是
HPLC时出来峰不尖可能造成的原因
首先是浓度，浓度过大造成平头峰，稀释浓度，第二个是流速，流速过慢了出风慢，不尖锐，第三个是预柱问题，这个不好说，最好换一个，不太贵，第四个是流动相洗脱效果不好，洗脱不下来，建议换配比或者换流动相还有温度、湿度等，这些如果差异太大也会影响峰型变化。
hplc的各种物质出峰时间有什么决定
HPLC出峰时间和很多因素有关，比如流动相的配比、流速、温度还有色谱柱的吸附能力等等。
HPLC分析一物质，如何消除梯度峰
如果是紫外检测器，是无法完全消除的，信号的产生不仅仅是吸收，还有反射等，梯度洗脱时流动相的变化肯定会引起响应的变化。如果用ELSD就没有。所谓的梯度峰，是在进行空白梯度是能够重现的色谱曲线变化，如果不能重复，则有两种可能：1. 有杂质洗脱出来2. 色谱系统不一致（在进行梯度洗脱时，完全一致的条件，第
在HPLC中，如何用峰面积求浓度
有标品的话，把标品配成已知浓度a1，进样一定体积b1，得到一定的液相峰面积c1；再把样品进样一定体积b2，得到一个峰面积c2．则你的样品浓度是a2 的话，a2=a1b1c2/b2c1.因为a1，b1，c2，b2，c1均已知，故能得到浓度．
色谱仪测试过程中出现鬼峰如何解决
鬼峰产生的缘由是多种多样的，根据本人的阅历以及文献报道，将缘由归结为以下几个方面： 1、活动相、样品稀释液、仪器或是容器中存在杂质，当梯度开端时由于有机相比例不高，洗脱才干不强，杂质在色谱柱柱头富集，随着活动相比例变化，洗脱才干增强，富集的杂质被洗脱，从而构成鬼峰。 2、活动相脱气不
做XRD实验，如何导出准确的峰位置
首先对得到的XRD进行必要的矫正，比如测试原因引起的峰位整体移动。然后通过拟合得到峰位，可以使用Jade进行操作。
HPLC分析时峰面积差别很大的原因及解决
液相色谱分析中进样基线很好，保留时间能锁定，压力也稳定，但是峰面积差别很大，大概有2倍的差别，这种情况出现的原因可能是多方面的，建议采用以下方法解决： 1 调换一根新色谱柱，如果情况一样，则排除柱子的原因。 2 将在线过滤器拆下，用超声波清洗，如果结果一样，说明与在线过滤器无关。 3 考虑是不