噬菌体制备及定量的一般实验方案
大部分噬菌体展示方案都涉及这样一个基本步骤:从被感染的细菌中制备噬菌体或噬菌粒颗粒的储液(增殖),并滴定这些储液以测定有感染力的颗粒的浓度。对于噬菌体载体(以及辅助噬菌体),对于噬菌体载体(以及辅助噬菌体),要通过计数宿主菌菌苔上的噬菌体斑来测定这些可变颗粒的浓度。为了确保能得到一个能繁殖的噬菌体的纯培养物,任何时候增殖噬菌体载体或辅助噬菌体,按照这个步骤来进行噬菌斑的分离都是可取的。对于噬菌粒载体,噬菌粒的滴定涉及对细菌的感染,以及对得到的抗生素耐受性的克隆的计数。测定噬菌体或噬菌粒制备产物感染力的一个简便的替代方案是通过吸光度评估浓度。消光系数(extinctioncoefficient)取决于噬菌体颗粒的大小,而噬菌体颗粒的大小又取决于基因组的大小。一般而言,对于一个辅助噬菌体如VCSMl3,lOD270=1.1X1013个颗粒/m1。但基于吸光度的计算可能对能繁殖的、有感染力的颗粒的浓度评估过高。 ......阅读全文
胸腺肽的制备及检测实验
实验概要本实验从动物的胸腺中提取了胸腺肽,并进行了pH值、热原、超敏反应、急性毒性试验、无菌检查、多肽含量测定等相关检测。实验原理胸腺肽是存在于人及多种动物胸腺内的一组具有免疫调节活性的热稳定性多肽。分子量多在8 000~13 000之间,等电点在35~95之间。胸腺肽的主要功能为诱导T细胞
干扰素的制备及检测实验
实验原理干抗素是干扰素诱生剂作用于有关生物细胞所产生的一类高活性、多功能蛋白质。它从细胞产生和释放出来以后,又作用于相应的其它同种细胞,使其获得抗病毒及抗肿瘤等多方面的免疫力。所谓干扰素诱生剂,是指能诱导有关生物细胞产生干扰素的一类物质。能诱导有关生物细胞产生α和β干扰素者称甲类干扰素诱生剂,如各种
干扰素的制备及检测实验
实验原理干抗素是干扰素诱生剂作用于有关生物细胞所产生的一类高活性、多功能蛋白质。它从细胞产生和释放出来以后,又作用于相应的其它同种细胞,使其获得抗病毒及抗肿瘤等多方面的免疫力。所谓干扰素诱生剂,是指能诱导有关生物细胞产生干扰素的一类物质。能诱导有关生物细胞产生α和β干扰素者称甲类干扰素诱生剂,如各种
转移因子的制备及检测实验
实验概要本实验采用透析法制备了转移因子(TF),并进行了检测。实验原理TF是一种可溶性不耐热的小分子多核苷酸肽,分子量约3 500~5 000。56℃30min可灭活,低温保存数年活性不消失。由于转移因子能将供体某种特定的细胞免疫功能,特异地传递给受体,即具有传递特异性细胞免疫的作用,所以称
λ噬菌体的载体表达实验
实验材料 表达载体试剂、试剂盒 SDSLB仪器、耗材 培养箱分光光度计离心机实验步骤 1. 将表达载体转化携有温度敏感突变的抑制基因的大肠杆菌溶源菌。转化物涂布于LB/抗生素平皿上,32℃下温育。2. 于抗生素培养基中,32℃培养转化菌。 3. 以≥1:20的比例将过夜培养物稀释往新鲜的LB/
λ噬菌体的铺平板培养实验
实验方法原理 噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌,后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基(如含琼脂糖或琼脂)上,这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。实验材料 λ 噬菌体原种大肠杆菌菌株试剂、试剂盒 MgSO4SM 和 SM+
噬菌体侵染实验的详细过程
(感染阶段)噬菌体侵染寄主细胞的第一步是“吸附”,即噬菌体的尾部附着在细菌的细胞壁上,然后进行“侵入。先通过溶菌酶的作用在细菌的细胞壁上打开一个缺口,尾鞘像肌动蛋白和肌球蛋白的作用一样收缩,露出尾轴,伸入细胞壁内,如同注射器的注射动作,噬菌体只把头部的DNA注入细菌的细胞内,其蛋白质外壳留在壁外,不
λ噬菌体的铺平板培养实验
噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌,后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基(如含琼脂糖或琼脂)上,这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个
λ噬菌体的载体表达实验
基本方案1 基本方案2 实验材料 表达载体 试剂、试剂盒
λ噬菌体的铺平板培养实验
实验方法原理 噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌,后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基(如含琼脂糖或琼脂)上,这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。
噬菌体效价的测定实验
实验方法原理噬菌体的效价就是 1 ml 培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法,一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上,噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑,因此,能进行噬菌体的计数,但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近 100%(—般偏低,因为有少数活噬菌体可能未引起感染),所以为了
概述一般制备负极材料的方法
1)在一定高温下加热软碳得到高度石墨化的碳;嵌锂石墨离子型化合物分子式为LiC6,其中的锂离子在石墨中嵌入和脱嵌过程动态变化,石墨结构与电化学性能的关系,不可逆电容量损失原因和提高方法等问题,都得到众多研究者的探讨。2)将具有特殊结构的交联树脂在高温下分解得到的硬碳,可逆电容量比石墨碳高,其结构
快速检测样本制备的一般方法
粮食、烟叶、茶叶等干燥产品:将样本全部磨碎,也可以四分法缩分,取部分样本磨碎全部通过20目筛,四分法再缩分。 肉食品类:切细,绞肉机反复绞三次,混合均匀后缩分。 水产、禽类:将样本各取半只,去除非食用部分,食用部分切细,绞肉机反复绞三次,混合均匀后缩分。 罐头食品:开
噬菌体侵染细菌实验步骤
有四个步骤,分别是:1、培养用p32和s35 标记的大肠杆菌,再用此大肠杆菌培养噬菌体。p32用于标记噬菌体蛋白质,s35 用于标记噬菌体DNA。2、用培养后的p32和s35噬菌体侵染未被标记的的大肠杆菌。3、培养物离心,分离。4 、分别对上清液和沉淀物的放射性进行检测。上清液中有S35,而沉淀中几
噬菌体侵染细菌实验步骤
有四个步骤,分别是:1、培养用p32和s35 标记的大肠杆菌,再用此大肠杆菌培养噬菌体。p32用于标记噬菌体蛋白质,s35 用于标记噬菌体DNA。2、用培养后的p32和s35噬菌体侵染未被标记的的大肠杆菌。3、培养物离心,分离。4 、分别对上清液和沉淀物的放射性进行检测。上清液中有S35,而沉淀中几
噬菌体侵染细菌实验步骤
有四个步骤,分别是:1、培养用p32和s35 标记的大肠杆菌,再用此大肠杆菌培养噬菌体。p32用于标记噬菌体蛋白质,s35 用于标记噬菌体DNA。2、用培养后的p32和s35噬菌体侵染未被标记的的大肠杆菌。3、培养物离心,分离。4 、分别对上清液和沉淀物的放射性进行检测。上清液中有S35,而沉淀中几
噬菌体侵染细菌实验步骤
有四个步骤,分别是:1、培养用p32和s35 标记的大肠杆菌,再用此大肠杆菌培养噬菌体。p32用于标记噬菌体蛋白质,s35 用于标记噬菌体DNA。2、用培养后的p32和s35噬菌体侵染未被标记的的大肠杆菌。3、培养物离心,分离。4 、分别对上清液和沉淀物的放射性进行检测。上清液中有S35,而沉淀中几
噬菌体侵染细菌实验步骤
有四个步骤,分别是:1、培养用p32和s35 标记的大肠杆菌,再用此大肠杆菌培养噬菌体。p32用于标记噬菌体蛋白质,s35 用于标记噬菌体DNA。2、用培养后的p32和s35噬菌体侵染未被标记的的大肠杆菌。3、培养物离心,分离。4 、分别对上清液和沉淀物的放射性进行检测。上清液中有S35,而沉淀中几
噬菌体侵染细菌实验步骤
大致分为四步。1、培养用p32和s35 标记的大肠杆菌,再用此大肠杆菌培养噬菌体。p32用于标记噬菌体蛋白质,s35 用于标记噬菌体DNA。2、用培养后的p32和s35噬菌体侵染未被标记的的大肠杆菌。3、培养物离心,分离。4 、分别对上清液和沉淀物的放射性进行检测。上清液中有S35,而沉淀中几乎没有
噬菌体侵染细菌实验步骤
有四个步骤,分别是:1、培养用p32和s35 标记的大肠杆菌,再用此大肠杆菌培养噬菌体。p32用于标记噬菌体蛋白质,s35 用于标记噬菌体DNA。2、用培养后的p32和s35噬菌体侵染未被标记的的大肠杆菌。3、培养物离心,分离。4 、分别对上清液和沉淀物的放射性进行检测。上清液中有S35,而沉淀中几
噬菌体侵染细菌实验步骤
有四个步骤,分别是:1、培养用p32和s35 标记的大肠杆菌,再用此大肠杆菌培养噬菌体。p32用于标记噬菌体蛋白质,s35 用于标记噬菌体DNA。2、用培养后的p32和s35噬菌体侵染未被标记的的大肠杆菌。3、培养物离心,分离。4 、分别对上清液和沉淀物的放射性进行检测。上清液中有S35,而沉淀中几
实时定量PCR应用中的优化方案
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具[1]。随着分子生物学技术研究的不断进展,定量PCR技术取得了突飞猛进的发展,不仅建立了一系列的方法,
样品制备影响XRF定量精度的介绍
XRF样品制备简单,但并非无需样品处理,XRF对样品中元素分布均匀性、样品颗粒度、样品表面光滑度、表面粉尘、矿物效应等有要求,这些方面都会不同程度影响分析精度,使用者可以通过相关的样品制备方法消除或者改善这些影响,譬如:研磨、压片、抛光、熔片等方法是XRF通常采用的样品制备方法。
定量PCR实验
实验材料 限制性内切核酸酶反转录酶热稳定 DNA 聚合酶dCTP靶核酸试剂、试剂盒 扩增缓冲液dNTP 贮存液胎盘 RNase 抑制剂仪器、耗材 琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR 仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液4 种 dNTP 贮存液(20
实验室纯水的质量要求及制备
实验室纯水的质量要求 ⑪ 外观与等级 实验室纯水应为无色透明的液体,其中不得有肉眼可辨的颜色及纤絮杂质。通常将实验室纯水分三个等级。 ① 一级水 不含有溶解杂质或胶态质有机物,用于制备标准水样或超痕量物质的分析。 可通过将二级水经过再蒸馏、离子交换混合床、0.2μm滤膜过滤等方法处理,或用石英蒸馏装
免疫核糖核酸的制备及鉴定实验
实验概要本实验通过免疫动物,制备了免疫核糖核酸(iRNA),并进行了鉴定。实验原理iRNA是用某种抗原免疫动物后,从免疫动物的免疫活性细胞中提取出来的RNA。它具有传递相应抗原特异性免疫信息的能力,因而注入体内后,可发挥对该抗原的免疫清除作用。iRNA的免疫学作用机理目前尚无定论,一般认为iRNA具
流浸膏、浸膏及煎膏的制备实验
实验材料 甘草试剂、试剂盒 氨溶液乙醇蒸馏水仪器、耗材 天平烧杯玻璃棒量筒漏斗滤纸筒实验步骤 1. 50 g甘草粗粉中加1:200氨水50 ml,湿润15分钟,装筒,排气,浸渍24小时。2. 快速渗漉(3-5ml/分钟)。3. 滤液(为药材4-8倍或至无甜味)煮沸5分钟,倾泻过滤,水浴浓缩至约
免疫核糖核酸的制备及鉴定实验
实验概要本实验通过免疫动物,制备了免疫核糖核酸(iRNA),并进行了鉴定。实验原理iRNA是用某种抗原免疫动物后,从免疫动物的免疫活性细胞中提取出来的RNA。它具有传递相应抗原特异性免疫信息的能力,因而注入体内后,可发挥对该抗原的免疫清除作用。iRNA的免疫学作用机理目前尚无定论,一般认为iRNA具
流浸膏、浸膏及煎膏的制备实验
渗漉法 实验材料 甘草 试剂、试剂盒 氨
自动样品制备解决方案
食品样品有机氯农药(OCPs)会积累在某些动物产品中,如肉类,牛奶和黄油。传统方法检测OCPs需大量的有机溶剂,而ASE由于快速、减少溶剂消耗等特点,备受大家使用。 药物样品草药产品由于萃取物极其复杂、萃取样品彻底净化而导致目标物的损失。本应用利用快速溶剂萃取(ASE)和凝胶渗透色谱法(GPC)进