OverlapPCR(重叠PCR)的基本原理
Overlap PCR(重叠PCR)重叠PCR的应用是非常广泛的,他的原理其实很简单:比如说有两个基因或者说一个启动子和一个基因,你要将他们连接到一 起,我们首先想到的方法当然是借助于酶切的方法,但有时我们并不一定能构找到合适的酶切位点,或者说我们找到了酶切位点,但这种酶非常特殊或者又很贵,我 们可能只用一次,这样购买酶就变成了一种浪费,难道没有别的办法了吗?当然有,那就是重组PCR技术。举个例子可能更容易说明。比如两个基因,一个命名 为A,一个命名为B。A的序列为5- atgcatgctagctagaacgctacgctgactaccccctgatc-3B的序列为5- atgctagtagctagccccccccaggggataattttttaaaacg-3首先我们要设计引物,假设引物的序列为:A1:5-ATGCATGCTAGCTAGAACGCT-3A2:5-ggggggctagctactagcatgatcagggg......阅读全文
DNA测序技术的基本内容
(一) 测序模板制备 测序模板应为单一来源DNA,包含质粒DNA、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增产物回收的DNA等。测序模板制备过程中应防止外源DNA污染,避免外部因素对测序模板的破坏和降解。 1.质粒DNA的制备 样品经平板培养挑取用质
自身免疫性肝病(AILD)与自身抗体检测
自身免疫性肝病(AILD)是一组肝脏免疫耐受机制失衡引起的肝细胞或胆管上皮慢性损伤性炎症疾病,根据其临床表现、生化、免疫学、影像学和组织病理学特点,可分为以肝实质细胞进行性损伤为主的自身免疫性肝炎(AIH),以胆道系统受累为主的原发性胆汁性肝硬化(PBC)和原发性硬化型胆管炎(PSC)。自身免疫性肝
Ku抗体检测的临床意义
作者:李珩, 毕燕玲, 宁秋, 宾利 【摘要】 目的: 探讨Ku抗体检测的临床意义. 方法: 对32例采用间接免疫荧光法检测的Ku抗体阳性患者进行临床回顾性分析. 结果: 32例患者中, 系统性硬化症合并多发性肌炎1例(3.1%), 系统性红斑狼疮(SLE) 13例(40.6%), 类风湿性关节
FISH-protocols-for-Drosophila2
3. Methods3.1 RNA Probe Preparation1. Different strategies can be used to prepare template DNA for synthesizing antisense RNA probes by in vitro tr
PCR实验指导与常见问题分析5
MgCl2 concentrationRelationship between MgCl2 and dNTP concentrationdNTP concentrations of about 200µM each are usually recommended for the Taq polyme
测序简史(三)
什么是miRNA测序成熟的microRNA(miRNA)是17~24nt的单链非编码RNA分子,通过与mRNA相互作用影响目标mRNA的稳定性及翻译,最终诱导基因沉默,调控着基因表达、细胞生长、发育等生物学过程。基于第二代测序技术的microRNA测序,可以一次性获得数百万条microRNA序列,能
sothing-about-Genome-walking
Can anyone recommend a good kit for genome walking? I would like to find out the promoter sequence of a known gene. Is genome walking the way to do it
PCR实验指导与常见问题分析6
Non-denaturing PAA gelsTo separate PCR products differing in only a few bp in length (for example, microsatellite markers), 6-10% PAA gels need to be
Bruker推出新一代ultrafleXtreme-MALDITOF/TOF质谱仪
2009年4月27日,布鲁克道尔顿公司推出新一代ultrafleXtreme MALDI-TOF/TOF质谱仪,这是市场上唯一的,在TOF和TOF/TOF模式下都能获得真正的1 kHz采样速度的仪器,可用于广泛的研究、临床、和应用蛋白质组学。 布鲁克的新型ultrafleXtreme质
漏引被判定抄袭“太冤”?不当引用需警惕
最近,国内某知名大学教授章栋(化名)发表在地学领域某期刊的一项研究因涉嫌抄袭产生争议。 《中国科学报》记者就此联系章栋时,他连连喊冤:“我们这项研究的性质最多是引用不当,怎么能说是恶意抄袭与剽窃呢?” 章栋表示,该问题的根源是文献漏引。“原作者的思路是在别人的基础上形成的,我的学生以为
2015CNHUPO生物质谱高级研讨会成功举办
2015年1月22日,“2015CNHUPO生物质谱高级研讨会”在北京文津国际酒店隆重召开。此次活动以“蛋白定量”为主题,旨在积极促进我国生物质谱技术的发展和应用,加强国内外相关研究领域的专家学者之间的交流与合作。特邀Dr. Mike MacCo
张卓勇:七彩光谱信息的解码者(上)
“七彩光谱 万象更新”主题系列访首都师范大学张卓勇教授 光谱技术已迈过百年历史长河,中国的光谱分析技术亦可追溯到上个世纪50年代,今日中国的光谱技术已从国际上“跟跑”跃升到部分领域领跑的地位。在这背后,老中青科学家,克服了严峻的挑战、付出了辛勤的汗水。伴随着将在成都召开的第21届全国分子光谱学学术
带您了解第四代测序技术
纳米孔测序技术(又称第四代测序技术)是最近几年兴起的新一代测序技术。目前测序长度可以达到150kb。这项技术开始于90年代,经历了三个主要的技术革新:一、单分子DNA从纳米孔通过;二、纳米孔上的酶对于测序分子在单核苷酸精度的控制;三、单核苷酸的测序精度控制。目前市场上广泛接受的纳米孔测序平台是O
全面解读第四代测序技术
纳米孔测序技术(又称第四代测序技术)是最近几年兴起的新一代测序技术。目前测序长度可以达到150kb。这项技术开始于90年代,经历了三个主要的技术革新:一、单分子DNA从纳米孔通过;二、纳米孔上的酶对于测序分子在单核苷酸精度的控制;三、单核苷酸的测序精度控制。目前市场上广泛接受的纳米孔测序平台是Oxf
Preparing-Lambda-DNA
Preparing Lambda DNA1- Coliphage lambda DNA is a widely used vector for recombinant DNA. The middle third of its 48,000 bp contains no genes required
测序简史(四)
三、三代全长转录本分析工具三代全长转录本在辅助基因注释,可变剪接分析,融合基因检测方面可以说大显身手,下面小编列了几个工具及对应的下载地址,供大家参考。大家有好的最新的工具欢迎留言补充!1. 可变剪接鉴定(3个工具)1)网址:https://github.com/liuxiaoxian/IsoSeq
全国分析测试中心主任相聚“塞上江南”-共议发展新机遇
分析测试百科网讯 2019年7月4日,第二十三次全国分析测试中心主任及地方协会负责人会议在宁夏银川市召开。本次会议由中国分析测试协会主办,北方民族大学、宁夏材料研究学会承办,宁夏化学分析测试协会协办,大会邀请了中国工程院院士、中国钢研集团研究员王海舟,中国农业科学院信息研究所所长、农业大数据重点
23次全国分析测试中心主任、地方协会负责人会议成功召开
分析测试百科网讯 2019年7月4日,第二十三次全国分析测试中心主任及地方协会负责人会议在宁夏银川市召开。本次会议由中国分析测试协会主办,北方民族大学、宁夏材料研究学会承办,宁夏化学分析测试协会协办,大会邀请了中国工程院院士、中国钢研集团研究员王海舟,中国农业科学院信息研究所所长、农业大数据
偶然找到流式细胞术常见问题问答,经典!
1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫
流式细胞术常见问题问答
1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免
流式细胞术常见问题问答
1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的? FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。 2、流式同型对照怎样选择? 同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同