长片段PCR技术心得分享
PCR技术自1983Mullis发明以来，给生命科学带来了历史性的变化，现已成为分子遗传学、基因组测序和作图、法医学、系统动物学等各领域内不可缺少的工具。但是，普通的PCR最长只能扩展2-3kb左右的短片段基因，对于5kb以上的长片段基因很难有效的扩增，这使PCR受到了很大限制。故人们一直以来都在尝试利用PCR扩展出更长片段的PCR。“LongPCR”这个名词和技术最早由美国华盛顿大学医学院的Barnes WM提出。其设想来自于他1992年一次实验错误。最初他想用常规PCR方法扩增来自Bacillus thuringiensis(Bt，苏云金杆菌)的一种2kb的蛋白质基因。在实验过程中使用的引物末端出现了差错,模板链上是A的位点，其对应的引物位点也是A，这一位点不匹配导致了PCR扩增反应终止,未得到预期产物。Barnes用的聚合酶是Klentaq1，是TaqDNA聚合酶N端缺失突变体，无外切酶和内切酶活性。为解决模板--引物不匹......阅读全文
PCR技术概述
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术是基因扩增技术的一次重大革新，是分子生物学发展史中的一个重要里程碑。使用PCR扩增技术，可以将极微量的靶DNA片段特异地扩增上百万倍，大大提高了对DNA分子的分析和检测能力。PCR技术具有敏感度高、特异性强、快速简便等优
定量PCR技术
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型：（1）外参法+终产物分析。所谓“外参法”
免疫PCR技术
（一）材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备免疫球蛋白（如IgG、IgM）的Fc片段上有糖基存在，因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。（1） 将纯化的抗体（IgM或IgG， 0.1~1.0ml）在标记缓冲液（0.1Mol/L NaAc，pH值5.5， 0.1Mol
PCR技术盘点
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性，模板DNA与引物的退火(复性)，引物的延伸。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能
PCR技术总结
PCR技术简史 PCR的最早设想 核酸研究已有100多年的历史，本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。 PCR的实现 1
PCR技术原理
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些zui好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。一.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂
原位PCR技术
除了经典的原位杂交外。原位杂交可与其他组织化学技术相结合，或与其他分子生物学技术相结合，使其应用范围扩大，成为更有应用价值的技术。PCR技术是根据生物体内DNA复制的特点而建立的在体外经酶促反应将特定DNA序列进行高效和快速扩增的技术，它可将单一拷贝或低拷贝的待测核酸以指数形式扩增而达到用常规方法可
PCR技术概论
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一
免疫PCR技术
（一）材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备 免疫球蛋白（如IgG、IgM）的Fc片段上有糖基存在，因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。（1） 将纯化的抗体（IgM或IgG， 0.1~1.0ml）在标记缓冲液（0.1Mol/L NaAc，pH值5.5， 0.1M
PCR技术原理
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。一.假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有T
PCR技术盘点
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性，模板DNA与引物的退火(复性)，引物的延伸。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小
长片段PCR扩增中几个常见问题的解决办法!
1.当PCR结果不满意时,考虑以下几个方面:(1)将PCR反应的试管与反应板紧贴,(2)使用50ul或更少反应体系时,勿使用AmpliWax,两个反应混合液=的操作方式在大多数情况下很有效,(3)当酶反应混合物以70度"热启动"开始循环时,切记在加入酶后稍微振荡一下,因为在0.2ml的PCR管不能均
PCR仪一般每分钟扩增多长的片段
每分钟可延伸1Kb 的长度，常规PCR一般为25—40 个循环，若循环加长，则由于酶...各类PCR扩增仪程序设定各不相同，编程过程视扩增的DNA 片段的要求及仪器而定
PCR仪一般每分钟扩增多长的片段
每分钟可延伸1Kb 的长度，常规PCR一般为25—40 个循环，若循环加长，则由于酶...各类PCR扩增仪程序设定各不相同，编程过程视扩增的DNA 片段的要求及仪器而定
PCR仪一般每分钟扩增多长的片段
每分钟可延伸1Kb 的长度，常规PCR一般为25—40 个循环，若循环加长，则由于酶...各类PCR扩增仪程序设定各不相同，编程过程视扩增的DNA 片段的要求及仪器而定
普通PCR技术和数字PCR技术，什么区别？
PCR技术自问世以来，在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。按照PCR技术的演进，人们习惯性将PCR技术划分为三代：普通PCR技术、实时荧光定量PCR技术（qPCR）以及数字PCR（dPCR）技术。以前也介绍了很多关于qPCR相关知识，这期给大家分享另外两种PCR技术
显微镜最佳使用技术分享
一、 显微镜的转换盘的精度考量，是以定位精度和齐焦精度为标准 1.定位精度：是指物镜镜头处于工作状态时，转化器(转化盘)必需明白与稳定，它的视野中心关于其他物镜，处于同样工作状态时，视野中心的偏移量而言，一定是分歧的。换句话说，就是转换哪一个镜头，都应该在一个相同的位置，不能够有偏移。
绝对干货分享：《疟原虫检测技术》
绝对干货分享：《疟原虫检测技术》
分享热解吸技术的应用范围
热解吸技术将固体，液体，气体样品或吸附有待测物质的吸附管置于热解吸 装置中，当装置升温时，挥发性或半挥发性组分从被解吸物中释放出来，通过惰性载气带着待测物进入GC，GC-MS以及其他分析仪器的一种分析预处理技术。热解吸技术室一种无溶剂，干净，通用，高灵敏度的样品前处理技术。 应用范围
知识分享：光遗传学技术
光遗传学（optogenetics）又称光刺激基因工程（optical stimulation plus genetic engineering），是一种通过光学和遗传学技术在活体动物脑内精准控制细胞行为的技术。由于其高度的时空特异性，光遗传技术广泛应用于神经科学领域的研究。 2010
PCR技术（十）：PCR产物克隆方法
平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为 3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR
PCR技术（四）：PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污 染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.一、污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由
定量PCR实验技术－QPCR
Quantitative PCRJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwes
【锐赛小课堂】荧光原位杂交技术实验心得
锐赛小课堂1221-157 荧光原位杂交技术（ fluorescence in situ Hybridization,FISH）是一种非放射性原位杂交方法，用特殊的荧光素标记核酸探针，在细胞或组织切片标本上进行杂交，以检测细胞内 DNA 或 RNA 特定序列存在与否。 FISH 实验
高灵敏度化学发光技术应用心得
一．概述 化学发光 (ChemiLuminescence ，简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光与其它发光
【分享】降落PCR的原理及常见问题解答
提问：降落PCR（Touchdown PCR）的原理？回答：Touchdown PCR是指每隔一个循环降低1°C反应退火温度，直至达到“Touchdown”退火温度，然后以此退火温度进行10个左右的循环。该方法最初出现是为了避开确定最佳退火温度而进行的复杂的反应优化过程。正确和非正确退火温度之间的任
激光测长仪的技术特点
1、能同时测量两个方向的速度、长度；2、能觉察被测体是否停止；3、能觉察被测体的运动方向；4、重复性为0.2%；5、允许在被测体轻微抖动的情况下进行测量；6、非接触LED光测速测长；7、可通过RS232接口进行参数配置。
酶切反应心得
一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常，一个50μl的反应体系中，1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间；如果减少酶的用
核酸抽提心得
最糟糕的心态 - 实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？最糟糕的知识 - RNase A 的作用。RNase A 是内切酶，内切
ChIP－新手心得
最近有不少战友在做ChIP实验，希望我的一点经验对大家有帮助（本贴不谈实验步骤，最后我会附件一份说明书，有详细步骤，另外建议像我一样的新手用试剂盒，避免不必要的麻烦）一、原理转录从基因的启动子区开始，由一系列的转录因子结合到基因的启动子区，通用转录因子结合在基本启动子区起始转录，而这个过程对基因的转