植物原生质体的制备
原生质体是指植物细胞去掉细胞壁的裸露部分。它在培养条件下，①具有再生细胞壁，进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力；②具有摄取外源大分子、细胞器，以及细菌，病毒的能力，因此是进行遗传操作，基因转移的好材料；③通过同种和异种植物的原生质体融合，可产生异核体，实现体细胞杂交，培育出新品种。 实验原理 去掉植物细胞壁的方法可以是机械的人工操作，也可以利用酶解法。较早利用机械法制备原生质体的首推Klercker（1892），直到1960 年英国科学家Cocking 才第一次用酶法大量制备原生质体。本实验以植物的叶肉组织为材料，利用纤维素酶和果胶酶来消化细胞壁，分离细胞。 实验用品 器具：显微镜、离心机、离心管、剪刀（2）、镊子（2）、吸管、小培养皿、载片、盖片。 试剂：0.16mol/L CaCI.2.H2O、20%蔗糖液、酶解液 材料：油菜或菠菜或烟草 实验方法步骤 1、取材 根据实验目的和条件选取不同的材料 2、分离原生质体......阅读全文
电穿孔转染真核细胞实验——植物原生质体细胞
电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导人细胞，是一种目前大受好评的方法。它适用于多数类型的细胞，既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基因表达，并且由于其所需步骤甚少，因而比其他技术更为容易实验材料原生质体细胞试剂、试剂盒电穿孔缓冲液原生质溶液仪器、耗材尼龙筛网锥形管实验步骤1. 将小心切成
原生质体制备的渗透压稳定剂的介绍
原生质体对溶液和培养基的渗透压很敏感，在低渗透压溶液中，原生质体将会破裂而死亡，必须在高渗透压或等渗环境中才能维持其生存。渗透压稳定剂的种类有无机盐和有机物，无机盐包括NaCl、KC1、MgSO4、CaCl2等。有机物包括蔗糖、甘露糖、山梨醇等。不同微生物采用的渗透压稳定剂也不同，对于细菌和放线
什么叫原生质体融合
原生质体是去掉细胞壁的植物细胞，原生质体融合就是植物细胞的融合。常用的方法有振动，电击，离心，聚乙二醇（PEG）处理等。先用纤维素酶和果胶酶处理原植物细胞，得到原生质体再在培养液中使用上述方法进行融合。这种方法的原理是细胞的流动性。当细胞核完成融合，并且重组细胞重生出细胞壁后，就表明杂种细胞已成功得
原生质体分离的分离方法
（1）机械法分离：缺点：产量极低；应用的材料受限制；操作极费力（2）酶法分离：Cocking最早开展这方面研究，克服了机械法分离的缺陷，可分为直接法和顺序法两种。酶法可在短时间内获得大量原生质体，缺点是：不纯的酶制剂所含杂质对原生质体可能有不同程度的毒害作用。
原生质体融合的基本介绍
植物体细胞杂交（plant somatic hybridization）,又称原生质体融合（Protoplast fusion ）是指将植物不同种、属，甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。植物细胞具有细胞壁，未脱壁的两个细胞是很难融合的，植物细胞只有
原生质体培养技术的概念
原生质体（protoplast）：脱去全部细胞壁的细胞叫原生质体，是一生物工程学概念。原生质体是由质膜所包围的具有生活力的”裸露细胞“。原生质体培养：对离体植物的原生质体进行培养，形成完整植株的培养技术。
原生质体培养的方法介绍
主要有液体浅层培养法、液体悬滴培养、固体平板法、固液双层培养法（应用最广泛）、琼脂糖珠培养法。
原生质体融合的技术分类
根据融合时细胞的完整程度，原生质体融合可分为两大类：对称融合（symmetric fusion）－即两个完整的细胞原生质体融合。非对称融合（asymmetric fusion）－利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合，它可以分为几种：用于细胞核或细胞质失活的方法分为物理和化学两大
关于原生质体的基本介绍
原生质体是细胞壁以内各种结构的总称,也是组成细胞的一个形态结构单位，活细胞中各种代谢活动均在此进行。原生质体包括细胞膜（cell membrane）、细胞质（cytoplasm）、细胞核（nucleus）和细胞器（organelle）等。原生质体化学成分十分复杂,其组分也随着细胞不断的新陈代谢活
原生质体发生融合的介绍
由于在自然条件下，原生质体发生融合的频率非常低，因此在实际育种过程中要采用一定方法进行人为诱导融合。两株出发菌株制备好的原生质体可以通过化学因子或电场诱导的方法进行融合。 [3] 化学因子诱导是把两个亲株的原生质体混合在一起，加入融合剂聚乙二醇（ polyethylene glycol，PEG
简述原生质体融合的原理
植物体细胞杂交（plant somatic hybridization）,又称原生质体融合（Protoplast fusion ）是指将植物不同种、属，甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。植物细胞具有细胞壁，未脱壁的两个细胞是很难融合的，植物细胞只有
原生质体的分离方法介绍
机械分离法 ：常用于分离藻类原生质体，采用渗透方法使细胞发生质壁分离，用刀把细胞壁切破，使原生质体流出。（手工操作难度大，得率低，费时费力）酶解分离法：用酶（琼脂酶，果胶酶，纤维素酶等）将细胞壁分解。（条件温和，原生质体完整性好，活力高，得率高） 因此原生质体制备多采用酶解法，此法操作过程分为：取材
简述原生质体融合的过程
将植物细胞A与植物细胞B用纤维素酶和果胶酶处理，得到不含细胞壁的原生质体A和原生质体B，运用物理方法或是化学方法诱导融合，形成杂种细胞，再利用植物细胞培养技术将杂种细胞培养成杂种植物体。 杂交时间：植物细胞杂交是从细胞融合开始，到培育成的新植物体结束。 a.原生质体制备：用酶解法去除细胞壁（
诱导原生质体融合的方法
诱导原生质体融合的过程中可用的方法有三种：物理法、化学法、生物法。将不同植物体细胞放在一起培养，必须通过一定的技术手段进行人工诱导。诱导方法有物理法和化学法两大类。物理法就是利用离心、振动、电刺激等促使原生质体融合；化学法是用聚乙二醇等试剂作为诱导剂诱导细胞的原生质体融合，聚乙二醇简称为PEG；诱导
PEG介导的原生质体转化
PEG介导的原生质体转化法是通过PEG的介导作用将遗传因子转入受体细胞原生质体中的一种方法，原生质体的制备与再生是转化的关键，此外CaCl2也是不可或缺的成分。目前，多数丝状真菌的转化以原生质体作为感受态细胞，在一定浓度的CaCl2和PEG等条件下和需转化的外源DNA混合完成的。因此，PEG介导的原
原生质体的鉴定方法介绍
即检验所获得的原生质体是否是真正的原生质体（1）低渗胀破法：把原生质体放入低渗透溶液中，在显微镜下观察原生质体从低渗溶液中吸水胀破的过程。如果是真正的原生质体，因为没有细胞壁，这样在胀破后留下的残迹应该是无形的。如果原生质体还带有部分细胞壁，则原生质体从无壁部分吸水向外膨胀直至胀破，破碎后留下的残迹
两个不同种类的植物细胞的原生质体怎样融合
首先因为它们是植物细胞，具有细胞壁，要发生原生质体融合就必须除去细胞壁。而细胞壁的成分是纤维素和果胶，所以要用纤维素酶和果胶酶。即我们生物学上的酶解法。形成3种细胞团：1两个番茄原生质体融合2两个马铃薯原生质体融合3一个番茄的一个马铃薯原生质体。
什么是原生质体融合技术
原生质体融合(protoplast fusion)指通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体进行融合，借以获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的过程。意义：打破了微生物的种界界限，可实现远缘菌株的基因重组。可使遗传物质传递更为完整、获得更多基因重组的机会。可与其他育种方法相结合，如把常规诱变和
酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养过夜（如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养）。2. 转化前一天晚上，从5 ml 过夜培养
关于玉米原生质体的提取方法
一、酶解液的组成：1 纤维素酶0.7% 果胶酶0.5% 山梨醇14% 氯化钙5mmol•L-1, pH5.8二、漂洗液的组成：山梨醇14%，硝酸钾 1mmol•L-1, 磷酸二氢钾0.2 mmol•L-1, 氯化钙0.5 mmol•L-1,硫酸铜0.01 µmol•L-1三、材料预处理： 取黄化叶片
关于原生质体黏菌的简介
原生质体黏菌的特色是没有单一细胞，而形成一整团的原生质。其生活史可分为二倍体时期与单倍体时期。 二倍体时期从两个单倍体细胞经由配子生殖形成合子开始，之后合子进行有丝分裂之后，会形成拥有许多细胞核，但是只有一团原生质的原生质团，称为变形体（plasmodium）。变形体发展成熟之后，会形成网状型
原生质体融合的发展与研究
1960年，Cocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功；1970年，Power首次用硝酸钠进行为诱导剂进行了较大规模的原生质体诱导融合；1971年，Nagata和Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株；1972年，Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种，这也是
原生质体融合的融合过程介绍
将植物细胞A与植物细胞B用纤维素酶和果胶酶处理，得到不含细胞壁的原生质体A和原生质体B，运用物理方法或是化学方法诱导融合，形成杂种细胞，再利用植物细胞培养技术将杂种细胞培养成杂种植物体。①杂交时间：植物细胞杂交是从细胞融合开始，到培育成的新植物体结束。a.原生质体制备：用酶解法去除细胞壁（纤维素酶和
影响原生质体融合技术的因素
首先，原生质体质量对细胞的融合起着至关重要的作用，高质量的原生质体是细胞融合的首要条件。其次，融合方法其三是融合参数，包括各种融合液都应选择适当。c.方法：物理方法（离心、振动、电激）、化学方法（聚乙二醇）。d.杂种细胞的筛选和培养：机械法、生理法、遗传法。e.杂种细胞的再生和鉴定：由愈伤组织再培养
原生质体融合的发展趋势
1、 诱导融合及杂种细胞的各种生理、生化、遗传机理的研 究2、电融合的程序化控制研究3、 各种类型原生质体（胞质体、核质体、细胞器）的制备技术研究4、 杂种细胞培养技术的程序化研究
原生质体的其他结构相关分布
高尔基体（golgi apparatus）主要分布在细胞核的周围或上方，是由两层膜所构成的平行排列的扁平囊泡、小泡和大泡（分泌泡）组成。植物细胞中，高尔基体的功能是合成和运输多糖，并且能够合成果胶、半纤维素和木质素，参与细胞壁的形成，还与溶酶体的形成有关，初级溶酶体的形成过程与分泌颗粒的形成类似
原生质体的再生有哪些过程
原生质体再生过程是指分离、纯化的原生质体在适当的培养方法和良好的培养条件下，很快恢复细胞壁，再生细胞持续分裂形成细胞团，最后或通过愈伤组织或通过胚状体分化出完整植株的过程。
原生质体分离常用的酶制剂
常用的酶制剂有：纤维素酶有Cellulase Onozuka R-10，Cellulase Onozuka RS，Cellulase。果胶酶有Pectolyase Y23，Macerozyme，Pectinase等。半纤维素酶有Rhozyme Hp-150，大多数植物分离原生质体时，纤维素酶浓度在1
原生质体融合的原理是什么？
原生质体融合即植物体细胞杂交，是指将植物不同种、属，甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。植物细胞具有细胞壁，未脱壁的两个细胞是很难融合的，植物细胞只有在脱去细胞壁成为原生质体后才能融合，所以植物的细胞融合也称为原生质体融合。 根据融合时细胞的完整程
原生质体的细胞核的介绍
除细菌和蓝藻外，所有的植物细胞都含有细胞核，通常一个细胞只具有一个细胞核。细胞核位于细胞中央，一般呈圆形、卵圆形，或稍伸长，也有其他形状的，如某些植物花粉的营养核为不规则裂瓣。细胞核大小相差很大，直径般为10~20um，在光学显微镜下可以观察到，经过固定和染色后可以看到其内部构造，有核膜、核仁、