酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养过夜（如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养）。2. 转化前一天晚上，从5 ml 过夜培养液中取适量的菌液，接种于盛有50 ml YPD培养基的250 ml 无菌烧瓶中，再过夜培养，使细胞密度达到1~2×107细胞/ml（OD600=0.5~1.0，依据菌株的不同有一定的差别）。 3. 室温下，1 100 g 离心5 min 沉淀细胞，细胞用10 ml 1mol/l 山梨醇溶液重悬，重复离心一次，细胞沉淀用5 ml 1 mol/l 山梨醇重悬。取适量的悬液用无菌超纯水作10-6稀释后取其中的0.1 ml 涂YPD平板，于30℃培养2天。 4. 将细胞悬液转移到......阅读全文
酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养过夜（如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养）。2. 转化前一天晚上，从5 ml 过夜培养
PEG介导的原生质体转化
PEG介导的原生质体转化法是通过PEG的介导作用将遗传因子转入受体细胞原生质体中的一种方法，原生质体的制备与再生是转化的关键，此外CaCl2也是不可或缺的成分。目前，多数丝状真菌的转化以原生质体作为感受态细胞，在一定浓度的CaCl2和PEG等条件下和需转化的外源DNA混合完成的。因此，PEG介导的原
酵母转化实验
实验材料酵母菌株质粒仪器、耗材YPD 平板SC-ura平板产孢子平板实验步骤展开
酵母转化实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD
拟南芥原生质体制备转化方法
实验概要本实验介绍了拟南芥原生质体制备转化操作流程。主要试剂1. 纤维素酶解液：试剂15ml酶液体系11-1.5﹪ Cellulase R10 (YaKult Honsha)0.225g干粉20.2-0.4﹪ Mecerozyme R10 (YaKult Honsha)0.045g干粉30.4M m
酵母转化实验_乙酸锂转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基，然后
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上，在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过
酵母原生质体制备实验
原生质体由原生质分化形成，具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器。植物和动物的如细胞核、线粒体和高尔基体等，而细菌如核糖体、拟核等。实验材料酵母试剂、试剂盒YPD酵母消解缓冲液山梨醇抽提缓冲液贮存缓冲液液氮仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 将酵母菌接种于YPD培养基（
原生质体融合和溶原性转化的区别
溶原性转换：是噬菌体的DNA与细菌染色体重组，使宿主菌遗传结构发生改变而引起的遗传型变异。溶原性细菌因此而获得新的特性。原生质体融合：两种经过处理失去细胞壁的原生质体混和可发生融合，融合后的双倍体细胞可发生细菌染色体间的重组。简单地区别就是溶原性转换需要噬菌体，而原生质体融合不需要。
酵母转化
· Yeast Transformation (Gietz Lab)LiAc/SS-DNA/PEG Transformation· Yeast Transformation (Breeden Lab)LiAc method· Large-Scale Y
酵母原生质体制备
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD酵母消解缓冲液山梨醇抽提缓冲液贮存缓冲液液氮仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 将酵母菌接种于YPD培养基（100 ml 到20 L），剧烈摇动或强制通气条件下培养至对数中期（OD600≈1~5）。培养物在预称重的离心瓶中于4℃， 1 500 g 离
转化、转导、接合、溶原性转换、原生质体融合的概念
（1）转化转化是指受体菌直接摄取供体菌游离DNA片段，而获得新的遗传性状。如活的无毒力的肺炎球菌可摄取死的有毒力的肺炎球菌DNA片段，从而转化为有毒株。 （2）转导转导是指温和噬菌体介导的遗传物质从供体菌向受体菌的转移，使受体菌获得新的性状。无性菌毛菌获得非结合性耐药因子就是通过
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_LiAc转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒腺嘌呤亮氨酸LiAc仪器、耗材YEA 平板实验步骤1. 在 YEA 平板上培养细胞直到长成可见单菌落。2. 接种单菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等营养缺陷互补物的 YEA 或 PM 培养基中，于允许温度以 200 r/min 振荡培养防止酵母菌沉积
原生质体转化中peg8000可以高压灭菌吗吗
拟南芥作为模式植物在生物学研究中有着十分重要的作用和极大的优势。本文以Columbia野生型拟南芥为材料,用酶解法对拟南芥叶肉进行原生质体分离,用PEG介导的转化法将外源基因转化到原生质体中进行瞬时表达。文章着重分析了影响拟南芥叶肉原生质
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG3350仪器、耗材YPAD 液体培养基涡旋振荡器实验步骤1. 将菌株接种 100 ml 的 YPAD 液体培养基，30℃ 振荡培养过夜，使细胞滴度达到每毫升 1X108 到 2X108 个细胞。2. 3000 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 100 ml 灭菌水洗两遍，
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒三梨糖醇仪器、耗材PM 或 YE 培养基实验步骤1. 用 PM 或 YE 培养基培养细胞，至滴度到每毫升 1X107 个细胞。2. 用冰冷的过滤除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗细胞 3 遍，以降低细胞的导电性。3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重悬细胞，使滴度
转化毕赤酵母
实验概要本实验介绍了毕赤酵母的转化方法。主要试剂1. 转化当天，配制下列试剂：存于4度5% SDS溶液RD(Regeneration Dextrose) 融化琼脂100ml2. 溶液：转化试剂40%PEG：用水配制40%(w/v)PEG3350(试剂纯)CaT：20mMTris pH7.5，20mM
酵母的高效转化
酵母的高效转化1．接种5ml液体YPAD或10ml SC，30℃下振荡培养过夜。2．计数过夜培养物细胞密度，以最终5×106个/ml的细胞密度接种50ml YPAD培养液。3．置30℃，200r/min振荡培养至2×107个细胞/ml，通常需要3～5小时，该培养物的细胞足够供十次转化用。4．用50m
植物原生质体制备及转化试剂盒使用说明
植物原生质体是指脱去全部细胞壁由质膜包被的具有生命活力的裸露细胞。它具有细胞生命特征和全能型，是细胞无性系变异和突变体筛选的重要来源，同时也是植物遗传工程的理想受体和遗传改良的理想材料。酶解法分离原生质体是一个常用的技术，其原理是植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成，因而使用纤维素酶、半纤维
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_高效转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒LiAc仪器、耗材YPAD 平板YPAD 液体培养基实验步骤1. 取 10 μl 细胞在 YPAD 平板上涂布 2 cm2，培养过夜；或者接种 5 ml 的 YPAD 液体培养基，于 30℃ 震荡培养过夜。2. 将一瓶 YPAD 培养基于 30℃ 平衡过夜。3. 去 50 m
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 腺嘌呤亮氨酸LiAc仪器、耗材 YEA 平板实验步骤 1. 在 YEA 平板上培养细胞直到长成可见单菌落。2. 接种单菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等营养缺陷互补物的 YEA 或 PM 培养基中，于允许温度以 200 r/min 振荡培养防止酵
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验
非洲粟酒裂殖酵母的LiAc转化法非洲粟酒裂殖酵母的电穿孔转化法实验材料细胞 试剂、试剂盒腺嘌呤
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验
非洲粟酒裂殖酵母的LiAc转化法 非洲粟酒裂殖酵母的电穿孔转化法 实验材料 细胞
酿酒酵母的电穿孔转化法实验
材料的准备 电穿孔转化法 实验材料 高分子量 DNA 试剂、试剂
毕赤酵母高效转化实验方案
毕赤酵母高效转化实验方案1.收集菌体取1mlGS115过夜培养物(OD约6-10) 分装到1.5ml EP管中，4℃、10000g 离心1min，弃上清，沉淀用无菌水(4℃)洗涤，同样条件下离心，弃上清。2.菌体处理加入1ml处理液，室温下放置20min。处理液：10mM LiAc10mM DTT0
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_转化材料的制备
实验材料DNA试剂、试剂盒TE 缓冲液双蒸水仪器、耗材磁力搅拌器玻璃烧杯实验步骤一、单链载体 DNA 的制备1. 在 100 ml 灭菌 TE 缓冲液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力搅拌器上剧烈搅拌 2~3 个小时以混匀。2. 将载体 DNA 溶液分装成 9 个 10 ml 和 10
酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_转化含有质粒菌株
实验材料细胞试剂、试剂盒YPAD仪器、耗材培养瓶SC 减样选择培养基实验步骤1. 在一个 250 ml 的培养瓶中，接种该菌株到 25 ml 相应的 SC 减样选择培养基中，200 r/min 培养过夜。2. 检测每毫升细胞数，按 2.5X108 个细胞计算所需培养物体积。3. 将该体积的培养物加到
质粒的酵母直接转化
实验方法原理将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；再将文库质粒转化到酵母中实验材料单菌落试剂、试剂盒PLATE溶液载体DNA转化质粒DNA仪器、耗材离心管离心机实验步骤1、 用牙签从平板中挑取单菌
质粒的酵母直接转化
1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。3．加0.5ml PLATE溶液，振荡。PL