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实验方法原理 以高浓度接种细胞和微珠，然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。 实验材料 起始培养物 仪器、耗材 生长培养基 微载体 搅拌培养瓶 磁力搅拌器 实验步骤 1. 按照所需最终培养液量的 1/3，以 2~3 g/L 混悬微珠。2. 用胰蛋白酶消化和计数细胞，以正常接种浓度的 3~5 倍将细胞接种到微珠悬液中。3. 以 10~25 rpm 将培养物搅拌 8 h。4. 加入......阅读全文
微载体细胞培养技术是细胞培养过程中常见的一种细胞培养技术。关于微载体细胞培养技术，以动物细胞为例，具体介绍如下： 一、微载体培养技术的应用 微载体培养技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术目前已渐日趋完善和成熟，并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。
微载体细胞培养技术是细胞培养过程中常见的一种细胞培养技术。关于微载体细胞培养技术，以动物细胞为例，具体介绍如下： 一、微载体培养技术的应用微载体培养技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术目前已渐日趋完善和成熟，并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认的
一、微载体培养应用此技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术目前已渐日趋完善和成熟，并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，放大容易。目前微载体培养广泛用于培养各种类型细胞，生产
B2B #5 采用第二种方式进行高倍率放大。用 3g/L 的微载体密度培养 Vero 细胞至细胞密度 3.07x106/毫升,培养体积为 3 升。用胰酶把 Vero 细胞从微载体上消化下来。取十分之一的细胞/微载体悬浮液接种到新的 1.5 升的培养体积中，微载体浓度为 6g/L。待细胞密
实验方法原理微载体细胞培养开始于60年代末期，最早使用离子交换凝胶作为载体，轻微搅动即可悬液在培养基中，因而可增加细胞附着的面积，达到大量培养细胞的目的。后来，根据细胞附着生长的特点，对微载体进行了改良，使其带有电荷或其它介质，更利于细胞附着和生长。这一方法亦可用于常规量的培养，也可用于大规模的培养
用于细胞培养的微载体 微载体培养（microcarrier culture）是一种用于高产量培养贴壁细胞的实用技术。CytodexTM专用于培养各类动物细胞，其培养体积可以从数毫升到6000升以上。应用Cytodex微载体技术，可以实现简单的贴壁细胞悬浮化培养，每毫升培养液可得到数百万细胞。微载
相比搅拌罐而言，WAVE 反应器在同一个培养袋中可以有更宽的培养范围（10-100%工作体积），对于种子扩增和细胞消化的不同反应体积，都可以提供均匀有效的混合，从而实现微载体的原位消化，而无需特定的消化反应器。避免了消化前后微载体的转移，操作简单，均匀有效的混合有利于精密控制消化反应的条件，最大
图 3 和图 4 显示的是球转球前后 Vero 细胞在微载体上的生长情况，分别有接种前第一、第三和第五天细胞的形态。图 4 的上面三张小图显示了球转球实验 B2B #3 之前来自细胞工厂种子培养的细胞生长形态。这是典型的 Vero 细胞种子培养的生长情况。通常 90%以上的 Vero细胞会在
一、前言动物细胞培养开始于本世纪初1962年，动物细胞培养规模开始扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，动物细胞培养已成为医药生物高技术产业的重要部分。利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占世界生物高技术产品市
细胞培养容器 有关培养容器的详细内容，请参阅《微载体细胞培养：原理与方法》手册。 简而言之，微载体培养液可置于各类细胞培养容器中。但是，应用一些在轻微搅动即可使微载体均匀悬浮的容器所获得的效果最佳，如WAVE生物反应器。那些在应用了能有效的混合悬液但不产生高剪切力的装置能够形成一个均匀的培养环境
Vero 细胞在 WAVE 反应器中的微载体球转球放大 陆丽芳，Christain Kaisermayer, 姚钰舜，隋礼丽通用电气医疗集团生命科学部，Fast Trak研发中心，上海 概要 Vero 细胞能被广泛应用于疫苗的生
特殊培养法1）二倍体细胞培养法二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为：1. 吸除旧培养液注入另瓶中。2. 用温BSS冲洗1次。3.
（1）微载体选择：先用利用三种小量微载体做培养实验，观察细胞在一定时间内细胞的吸着率和计算细胞数，以得到最大量细胞为佳。（2）水化：称一定量的微载体放入容器中，按每克微载体加50～100ml的比例，加入无Ca2＋和Mg2＋的磷酸缓冲液（PBS），室温下放置应不少于3小时，并不时轻微搅动，然后再用新鲜
5. 微载体培养操作要点 ●培养初期：保证培养基与微球体处于稳定的PH与温度水平，接种细胞（对数生长期，而非稳定期）至终体积1/3的培养液中，以增加细胞与微载体接触的机会。不同的微载体所用浓度及接种细胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微载体含量，更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。 ●
5.微载体培养操作要点• 培养初期：保证培养基与微球体处于稳定的PH与温度水平，接种细胞（对数生长期，而非稳定期）至终体积1/3的培养液中，以增加细胞与微载体接触的机会。不同的微载体所用浓度及接种细胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微载体含量，更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。• 贴壁阶
摘要 WAVE Bioreactor 系统多用于悬浮细胞的培养。然而，用于细胞治疗和疫苗生产的多种细胞为贴壁依赖型的，需要一个可贴附的生长表面。在本研究中，Cytodex 微载体被应用在 CellbagTM 生物反应器中以扩增 Madine-
用于MDCK和 Vero细胞的生物反应器 WAVE Bioreactor 系统由一个带有一次性塑料细胞培养袋的摇动平台组成，配备CO2 气体混合器 (CO2MIX20) 或WAVEPOD™控制塔用于控制pH、温度、氧气和混合。MDCK细胞在Cellbag-10 L和C
细胞悬浮培养是利用生物反应器大规模培养动物细胞生产生物制品的核心技术，是当前国际上生物制品生产的主流模式，其最大优势是通过更为精确有效的工艺控制手段，在获得最大产量的同时能稳步提高产品的质量。但该技术目前在国内尚未得到广泛应用，生物制品生产仍主要采用病毒产率低、生产成本高、劳动强度大的转瓶细胞培养方
微载体培养技术（micro-carrierculturetechnique）于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术日趋完善和成熟，广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。 微载体是指直径60-250μm，能适用于贴壁
在瓶子内进行球转球实验 在 WAVETM 反应器内细胞密度达到需要的水平时，Vero 细胞微载体培养悬浮液即被转移到另外一个透明的瓶子中并移到生物安全柜中。后面的清洗和胰酶消化过程等均在生物安全柜内进行。在微载体沉降下来之后，去除上清。剩下的微载体被转移到
结果和讨论 微载体培养的最佳工作体积和混合速度的确定当我们使用 20%到 80%的Cellbag最大工作体积时，微载体培养可以产生均匀的微载体混合分布（图 2）。图 2. 微载体培养的最佳工作体积 在工作体积小于
实验材料细胞试剂、试剂盒CB仪器、耗材微型离心机临床台式离心机超离心机吊桶式转头离心管振荡器尼龙单丝网探头超声仪实验步骤1. 准备下列仪器：微型离心机临床台式离心机超离心机吊桶式转头和合适的离心管振荡器尼龙单丝网，孔径约 50 μm探头超声仪2. 将微载体培养物转移到 50 ml 的锥形离心管中。3
细胞和病毒生产的放大培养面临挑战。当需要生产量增加千倍时，细胞培养瓶对于工业规模生产是不可行的。微载体为生物反应器中贴壁细胞的生长提供了方便， 微载体充当贴壁细胞可附着的支架，允许它们增殖，而生物反应器使细胞-微载体复合体自由悬浮在培养基中。因此，贴壁细胞也可以像悬浮细胞那样生长，从而简化了放大培养
Vero细胞在转瓶 （Spinner Flask)中无血清条件下的微载体培养 Vero细胞也可以在转瓶中进行微载体培养。如图 14 所示，在无血清条件下，WAVE 和转瓶这两种培养系统中可以获得基本相同的最大细胞密度。相比 Cytodex3，Cy
微载体用量为3 g/l的 Cytodex3，接种细胞密度为0.3×106细胞/ml。培养条件为37℃，pH 7.3，5% CO2，采用光纤溶氧电极监测溶氧水平。培养基含有 2% FBS。每小时取样并用结晶紫染色测定总细胞密度，上清中的悬浮细胞和死细胞用台盼蓝染色。MDCK细胞在接
293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因，治疗恶性肿瘤、心血管疾病或一些遗传疾病已取得可喜进展；利用腺病毒载体在包装细胞293中表达分泌性蛋白质，如蛋白酪氨酸激酶1C等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善293细胞的
293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因，治疗恶性肿瘤，心血管疾病或一些遗传疾病已取得可喜进展；利用腺病毒载体在包装细胞 293中表达分泌性蛋白质，如蛋白酪氨酸激酶 1C等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善 293
获得稳定的杂交瘤细胞系后，即可根据需要大量生产单抗，以用于不同目的。 一、单抗的大规模制备 目前大量制备单抗的方法主要有两大系统，一是动物体内生产法，这是国内外实验室所广泛采用；另一是体外培养法。 1、动物体内生产单抗的方法 迄今为止，通常情况下均采用动物体内
现代免疫检测的工作原理 免疫检测是目前医疗卫生和生物科学研究领域常用的诊断方法。免疫检测的核心步骤为抗原-抗体间特异性的复合反应，通过复合反应产生检测信号，实现对溶液中抗体或抗原性的定量。由于抗体分子能够识别非常有限的分子种类，因此免疫检
在血液净化领域：微球可以替代肾脏用来去除血液有毒物质，治疗和延长病人寿命。微球是制造人工肾的关键材料。 在计量领域：粒径高度均一的微球可以作为标准颗粒用于精确测量常规尺子无法计量的纳米尺寸的物质，标准颗粒作为计量工具也可用于矫正精密计量仪器。 在医疗诊断领域：功能化微球如磁性微球，多色荧光编码微球可