微载体培养技术（microcarrierculturetechnique）原理操作2
5. 微载体培养操作要点 ●培养初期：保证培养基与微球体处于稳定的PH与温度水平，接种细胞（对数生长期，而非稳定期）至终体积1/3的培养液中，以增加细胞与微载体接触的机会。不同的微载体所用浓度及接种细胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微载体含量，更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。 ●贴壁阶段（3-8d）后，缓慢加入培养液至工作体积，并且增加搅拌速度保证完全均质混合。 ●培养维持期：进行细胞计数（胞核计数）、葡萄糖测定及细胞形态镜检。随意细胞增殖，微球变得越来越重，需增加搅拌速率。经过3d左右，培养液开始呈酸性，需换液：停止搅拌，让微珠沉淀5min，弃掉适宜体积的培养液，缓慢加入新鲜培养液（37℃），重新开始搅拌。 ●收获细胞：首先排干培养液，至少用缓冲液漂洗1遍，然后加入相应的酶，快速搅拌（75-125r/min）20-30min。然后解离收集细胞及其产品。 ● 微载体培养的放大：可以通过增加微载体的......阅读全文
微载体培养技术（microcarrier－culture－technique）原理操作2
5. 微载体培养操作要点 ●培养初期：保证培养基与微球体处于稳定的PH与温度水平，接种细胞（对数生长期，而非稳定期）至终体积1/3的培养液中，以增加细胞与微载体接触的机会。不同的微载体所用浓度及接种细胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微载体含量，更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。 ●
微载体培养技术（microcarrier－culture－technique）原理操作1
一、微载体培养应用此技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术目前已渐日趋完善和成熟，并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，放大容易。目前微载体培养广泛用于培养各种类型细胞，生产
微载体培养操作要点
●培养初期：保证培养基与微球体处于稳定的PH与温度水平，接种细胞（对数生长期，而非稳定期）至终体积1/3的培养液中，以增加细胞与微载体接触的机会。不同的微载体所用浓度及接种细胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微载体含量，更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。●贴壁阶段（3-8d）后，缓慢加入培养
微载体培养的原理
微载体培养技术（micro-carrierculturetechnique）于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术日趋完善和成熟，广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。 微载体是指直径60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚
微载体培养的技术方法
微载体培养是指微载体以微小颗粒作为细胞贴附的载体，可提供相当大的贴附面积，由于载体体积很小，比重较轻，在轻度搅拌下即可使得细胞悬浮在培养液内，最终能够使细胞在载体表面繁殖成单层的一种细胞培养技术。
微载体培养的技术特点
●表面积/体积（S/V）大，因此单位体积培养液的细胞产率高； ●把悬浮培养和贴壁培养融合在一起，兼有两者的优点； ●可用简单的显微镜观察细胞在微珠表面的生长情况； ●简化了细胞生长各种环境因素的检测和控制，重现性好； ●培养基利用率较高； ●放大容易； ●细胞收获过程不复杂； ●劳动强
微载体技术的培养优点
●表面积/体积（S/V）大，因此单位体积培养液的细胞产率高；●把悬浮培养和贴壁培养融合在一起，兼有两者的优点；●可用简单的显微镜观察细胞在微珠表面的生长情况；●简化了细胞生长各种环境因素的检测和控制，重现性好；●培养基利用率较高；●放大容易；●细胞收获过程不复杂；●劳动强度小；●培养系统占地面积和空
Aseptic－Technique－and－Good－Cell－Culture－Practice
AimTo ensure all cell culture procedures are performed to a standard that will prevent contamination from bacteria, fungi and mycoplasma and cross con
微载体的原理与操作
1.原理：其原理是将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。贴壁依赖性细胞在微载体表面上的增殖，要经历黏附贴壁、生长和扩展成单层三个阶段。细胞只有贴附在固体基质表面才能增殖，故细胞在微载体表面的贴附是进一步铺展
微载体细胞培养技术及应用原理
微载体细胞培养技术是细胞培养过程中常见的一种细胞培养技术。关于微载体细胞培养技术，以动物细胞为例，具体介绍如下： 一、微载体培养技术的应用 微载体培养技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术目前已渐日趋完善和成熟，并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。
Cytodex－1,－Cytodex－3－球形微载体的使用（一）
用于细胞培养的微载体 微载体培养（microcarrier culture）是一种用于高产量培养贴壁细胞的实用技术。CytodexTM专用于培养各类动物细胞，其培养体积可以从数毫升到6000升以上。应用Cytodex微载体技术，可以实现简单的贴壁细胞悬浮化培养，每毫升培养液可得到数百万细胞。微载
微载体细胞培养技术及应用原理（二）
5.微载体培养操作要点• 培养初期：保证培养基与微球体处于稳定的PH与温度水平，接种细胞（对数生长期，而非稳定期）至终体积1/3的培养液中，以增加细胞与微载体接触的机会。不同的微载体所用浓度及接种细胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微载体含量，更高的微载体浓度需要控制环境或经常换液。• 贴壁阶
微载体细胞培养技术及应用原理（一）
微载体细胞培养技术是细胞培养过程中常见的一种细胞培养技术。关于微载体细胞培养技术，以动物细胞为例，具体介绍如下： 一、微载体培养技术的应用微载体培养技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术目前已渐日趋完善和成熟，并广泛应用于生产疫苗、基因工程产品等。微载体培养是目前公认的
显微操作技术（micromanipulation－technique）
显微操作技术（micromanipulation technique）是指在高倍复式显微镜下，利用显微操作器（micromanipulator）进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置。显微操作的基础平台--倒置研究级显微镜（例如OLYMPUS的I
沉淀反应技术(Precipitation－reaction－technique)（2）
2．取试管5支（5mm×50mm）置于试管架上，编号。第1、2试管内加炭疽沉淀血清，第3、4试管内加正常血清，第5管内加待检抗原，分别用毛细滴管加至4mm～5mm。3．第1、4、5试管轻轻叠加等量缓冲液，第2、3试管轻轻叠加等量待检抗原。为防止上下两界面破坏，可将小试管从试管架取出，微倾斜，沿试管壁
免疫荧光技术(immunofluorescence－technique)2
实验材料 1. 40 孔酶标板 2. 1:300 乙肝表面抗原溶液 3. 1:10 待测血清 4. 健康人血清 5. HBsAg 诊断血清 6. 辣根过氧化物酶标记羊抗人 IgG 抗体（酶标二抗） 7. 抗原稀释液（ pH9
层析技术(Layeranalise－technique)(2)
离子交换纤维素的优点为：①离子交换纤维素为开放性长链，具有较大的表面积，吸附容量最大；②离子基团少，排列稀疏，与蛋白质结合不太牢固，易于洗脱；③具有良好的稳定性，洗脱剂的选择范围广。 2．离子交换交联葡聚糖 离子交换交联葡聚糖也是广泛使用的离子交换剂，它与离子交换纤维素不同点是载体不同，常用交联葡聚
Vero－细胞在－WAVE－反应器中的微载体球转球放大（五）
相比搅拌罐而言，WAVE 反应器在同一个培养袋中可以有更宽的培养范围（10-100%工作体积），对于种子扩增和细胞消化的不同反应体积，都可以提供均匀有效的混合，从而实现微载体的原位消化，而无需特定的消化反应器。避免了消化前后微载体的转移，操作简单，均匀有效的混合有利于精密控制消化反应的条件，最大
293细胞培养(cell－culture)技术
1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，
New－Brunswick－S41i－CO2－恒温摇床进行间充质干细胞扩增（一）
A Novel Method for the Expansion of Mesenchymal Stem Cells using an Eppendorf New Brunswick™ S41i CO2 Incubator ShakerKhandaker Siddiquee and Ma Sha,
微载体的应用原理
1.原理：其原理是将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。 贴壁依赖性细胞在微载体表面上的增殖，要经历黏附贴壁、生长和扩展成单层三个阶段。细胞只有贴附在固体基质表面才能增殖，故细胞在微载体表面的贴附是进一步
Principles－of－Aseptic－Technique——2
Personnel Aseptic technique requires careful attention to a series of steps which begins with patient and instrument preparation and ends at final w
贴壁细胞培养方法（平面2D培养、搅拌式培养、微载体培...
贴壁细胞培养方法（平面2D培养、搅拌式培养、微载体培养）优缺点比较贴壁细胞-----真正的贴壁、线性的放大（潮汐式反应器）细胞反应器是某种细胞的培养生长代谢过程的反应器，这个过程需要控制的条件比较多，比较复杂。细胞反应器根据工作方式和功能的分类：一、平面２Ｄ培养（培养皿、方瓶、滚瓶）：优点：成本低，
微载体细胞培养法介绍
（1）微载体选择：先用利用三种小量微载体做培养实验，观察细胞在一定时间内细胞的吸着率和计算细胞数，以得到最大量细胞为佳。（2）水化：称一定量的微载体放入容器中，按每克微载体加50～100ml的比例，加入无Ca2＋和Mg2＋的磷酸缓冲液（PBS），室温下放置应不少于3小时，并不时轻微搅动，然后再用新鲜
离心技术（centrifugation－technique）与离心机类型(2)
离心机类型通常所使用的离心机根据转子转速大小的不同可分为普通离心机、高速离心机和超速离心机三类。(1)普通离心机一般来说，最大转速不超过6000r/min 者属普通离心机；如国产的80—1型，LXJ—Ⅱ型等。离心机转速与相对离心力的测算，如图2—37。普通离心机转子在室温下运转，转子室内的温度一般无
免疫球蛋白提取技术(Immunoglobulin－isolation－technique)2
九、蛋白定量技术 （一）双缩脲测定法 1．原理 蛋白质中的肽键有双缩脲反应，在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物，在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。此法特异性强，游离的氨基酸、小肽和核酸均不产生这种反应，但此法不够敏感，仅能测出毫克水平。 2．试剂配制 硫酸铜（CuSO4·
微载体
实验方法原理以高浓度接种细胞和微珠，然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。实验材料起始培养物仪器、耗材生长培养基微载体搅拌培养瓶磁力搅拌器实验步骤1. 按照所需最终培养液量的 1/3，以 2~3 g/L 混悬微珠。2. 用胰蛋白酶消化和计数细胞，以正常接种浓度的 3~5 倍将细胞接种到微珠悬液中。3.
微载体
实验方法原理 以高浓度接种细胞和微珠，然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。 实验材料 起始培养物
微载体
实验方法原理 以高浓度接种细胞和微珠，然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。 实验材料 起始培养物
植物细胞培养（plant－cell－culture）技术概述
植物细胞培养技术就是为了某种目的而在细胞水平上对离体植物细胞或原生质体进行的一系列生物工艺学操作。它包括分离、培养、再生以及一系列相关的操作。就有用化合物的生产来说，它主要是指在无菌条件下通过悬浮培养植物细胞生产有用化合物的过程。理论与技术基础：植物细胞全能性、微生物液体深层发酵系统、遗传工程