DAPI染DNA的原理及使用方法
DAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),分子式为C16 H15 N5 ·2C3 H6 O3 ,分子量457.48。DAPI 是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处,一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍,常用与荧光显微镜观测,根据荧光的强度可以确定DNA的量。另外,因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下,DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。单独DAPI的最大吸收波长为340nm,最大发射波长为488nm;当DAPI与双链DNA结合时,最大吸收波长为364nm,最大发射波长为454nm(10 mM Tris pH7.0,100 mM NaCl,10 mM EDTA),其发散光的波长范围含盖了......阅读全文
DNA-序列分析技术
实验方法原理 本节描述运用Perkin-Elmer 公司的373 和377 型全自动DNA 测序仪进行双链DNA 测序的方法。热循环测序反应使用 Applied Biosystems Inc.的DyeDeoy TM Terminator
DNA测序仪原理
abi prism 310型基因分析仪(即dna测序仪),采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司ZL的四色荧光染料标记的ddntp(标记终止物法),因此通过单引物pcr测序反应,生成的pcr产物则是相差1个碱基的3''''末端为4种不同荧光染料的单
什么是自在DNA?
中文名称自在DNA英文名称selfish DNA定 义除能复制自身外,不具有其他功能的DNA片段。泛指间隔DNA及卫星DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
DNA错插的定义
中文名称错插英文名称misinsertion定 义特指DNA复制过程中插入错误的、不与模板匹配的碱基。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),基因表达与调控(二级学科)
卫星DNA的定义
卫星DNA(satelliteDNA)是一类高度重复序列DNA。在介质氯化铯中作密度梯度离心(离心速度可以高达每分钟几万转)时,DNA分子将按其大小分布在离心管内不同密度的氯化铯介质中,小的分子处于上层,大的分子处于下层。从离心管外看,不同层面的DNA形成了不同的条带。根据荧光强度的分析,可以看到在
Preparation-of-Sonicated-Human-DNA
Purpose:To break up high molecular weight human placental DNA into fragment sizes of 500 bp or less which can be used as competitor DNA in Southern an
DNA-Fragmentation-Assays-for-Apoptosis
Protocol I: Triton X-100 Lysis BufferIn 96 flat-wells plate, incubate 4x10 6 target cells (40 wells of 105 per well) with desired concentration of eff
间隔DNA的定义
中文名称间隔DNA英文名称spacer DNA定 义基因组内基因间存在的一种功能未知的非编码DNA序列。存在于真核细胞及某些病毒基因组中,通常含有高度重复的DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
核心DNA的定义
中文名称核心DNA英文名称core DNA定 义缠绕在核小体核心颗粒上的DNA。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)
DNA发卡结构介绍
发卡结构(hairpin structure):这些结构是由于DNA单链分子通过自身回折使得互补的碱基对相遇,形成氢键结合而成的,称为发卡结构。又译:发夹结构。
DNA杂交的基础
具有互补碱基序列的DNA分子,可以通过碱基对之间形成氢键等,形成稳定的双链区。在进行DNA分子杂交前,先要将两种生物的DNA分子从细胞中提取出来,通过超声或者其他物理方法,将DNA剪切成片段,再通过加热或提高pH的方法,将双链DNA分子分离成为单链,这个过程称为变性。然后,将两种生物的DNA单链
CDK-Regulation-of-DNA-Replication
Initiation of DNA replication in eukaryotes is a highly conserved, multi-step process (replication licensing) designed to restrict initiation events t
dna提取实验步骤
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液。在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M。加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出。分别用66%,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品。此法提取的DNA中
DNA序列测定技术
DNA序列测定技术序列测定的技术和策略Sanger双脱氧链终止法Maxam-Gilbert DNA化学降解法测序策略目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭,但这两种方法都是同样生成互相独立的若干
75%DNA是垃圾
你距离“上帝的完美作品”还很远。近日,一项新研究显示,人体内75%的DNA是“垃圾”。 数十年来,生物学家一直认为人类大多数基因都有某些作用。但该研究却驳斥了这一观点,指出人类大部分DNA毫无用处。实际上,早在2012年该研究组就猜测人类基因大多无用。 早在上世纪50年代,研究人员发现了DN
CT扫描损伤DNA?
CT扫描,即电子计算机断层扫描,通过横断面X射线对多种疾病进行诊断,包括胸痛、骨折和消化系统问题等等。 《美国心脏病学会杂志》一篇学术论文报道:CT扫描存在副作用——损伤DNA! 斯坦福大学的研究人员以67例需要接受CT扫描的病患作为试验对象:患者接受全身且最低辐射量扫描后,研究人员检测她们
DNA复制的特点
半保留复制:DNA在复制时,以亲代DNA的每一个单链作模板,合成完全相同的两个双链子代DNA,每个子代DNA中都含有一个亲代DNA链,这种现象称为DNA的半保留复制。DNA以半保留方式进行复制,是在1958年由M. Meselson 和 F. Stahl 所完成的实验所证明。有一定的复制起始点:DN
细菌DNA=未来光盘?
英国《自然》杂志11日发表了一项生物技术重要成果:科学家利用CRISPR手段,成功将图片和视频短片编码进了细菌的DNA中,通过测序DNA再重新提取出来后仍相当准确。其证明了活细胞作为一种可靠媒介,存储一定数量的数据完全有可能。 CRISPR被称为“生物科学领域的游戏规则改变者”。最近的一些研
卫星DNA的分类
卫星DNA按其浮力密度的大小可以分成I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四类,其浮力密度分别是1.687,1.693,1.697和1.700g/cm3。各类卫星DNA都是由各种不同的重复序列家族所组成。卫星DNA通常是串联重复序列。卫星DNA按其重复单元的核苷酸的多少,可以分为两类。一类是小卫星DNA(minisatel
DNA技术的概念
DNA(Deoxyribonucleic acid),中文译名为脱氧核糖核酸,是染色体的主要化学成分,同时也是基因组成的,有时被称为“遗传微粒”。DNA是一种分子,可组成遗传指令,以引导生物发育与生命机能运作。主要功能是长期性的资讯储存,可比喻为“蓝图”或“食谱”。其中包含的指令,是建构细胞内其
DNA分子杂交原理
DNA分子杂交的原理是,具有互补碱基序列的DNA分子,可以通过碱基对之间形成氢键等,形成稳定的双链区.如果两DNA有一段相同碱基的话,就能形成氢键,且形成稳定的双链区
外周血DNA提取技术
方法一:1. 标本预处理:将1ml EDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中,加入1ml磷酸缓冲盐溶液(PBS),混匀,3500g离心15min,倾去含裂解红细胞上清。重复一次。用0.7ml DNA提取液混悬白细胞沉淀,37℃水浴温育1h。2. 消化:上述DNA提取液混悬白细胞,37℃水浴
Southern-Blotting:-DNA-Transfer
Southern Blotting: DNA Transfer1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels), 7' (large gels)2. Denaturation: Wash
沉淀DNA的实验
乙醇沉淀法 实验方法原理 DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体
DNA的转化实验
体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒,选用转化和筛选技术, 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中,DNA可在生物体系中大量扩增,繁殖, 保存以及表达目的基因的产物,这是PCR体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术,所获得的,不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研,医药生产和生物
什么是DNA解链?
解旋也叫解链,指在一定的物理条件或相关酶类的催化作用下,维系DNA双链结构的氢键发生断裂使DNA双螺旋结构局部解体的现象。或者说,DNA分子复制时,在解旋酶的作用下,解开扭成螺旋的两条长链,然后断开双螺旋上的碱基对的氢键,使DNA分子成为单链的过程叫解旋.
DNA酶切反应
一、 DNA 酶切反应1、将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶液集中在管
质粒DNA提取实验
实验方法原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。 提取质粒的基本步骤分为三步:①细菌的培养和质粒的扩增②细菌菌体的裂解③质粒DNA的纯化实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒
闭环DNA的结构
由于具有螺旋结构的双链各自闭合,结果使整个DNA分子进一步旋曲而形成三级结构。自然界中主要是负超螺旋.另外如果一条或二条链的不同部位上产生一个断口,就会成为无旋曲的开环DNA分子。从细胞中提取出来的质粒或病毒DNA都含有闭环和开环这二种分子。可根据两者与色素结合能力的不同,而将两者分离开来。
质体DNA的定义
中文名称质体DNA英文名称plastid DNA定 义真核生物细胞器质体中存在的DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)