共聚焦显微镜使用技巧与心得（一）之荧光原理篇
工欲善其事必先利其器，想用好共聚焦显微镜光会用操作可不行，那永远不可能成为“共聚焦达人”，要想成为“达人“必先懂得原理，好吧，开始啦。什么是荧光？荧光：荧光现象是物质在光的照射下所产生的发光现象。首先荧光是一种光致发光现象，荧光物质必须是在光的照射下才能发光。否则就是其他的发光现象而不是荧光。例如夜光物质，夜光表，虽然也需要先用光照射，但离开光照射后它还能继续发光，就不是荧光。这叫磷光。另外一个例子是作western blot时用化学发光，也是发光，但不是荧光。其次，荧光物质发出的荧光与照射光的色彩不同。准确地说，是荧光物质发光的波长与照射光的波长是不同的。典型的荧光物质是在紫外线照射下能发出黄绿色的荧光。例如钱上的的荧光防伪标记，用紫外线照射后能发黄绿色的光。所以在使用荧光显微镜的照片，观察绿色荧光样品时，你会看到物镜下照射到样品的光是蓝色的光。观察红色荧光样品时，照射样品的却是绿色的光。但在目镜里却能分别看到绿色与红色的荧光......阅读全文
荧光蘑菇助专家合成人工荧光素
在巴西分布的一种荧光蘑菇在黑暗中会发出绿色荧光，俄罗斯和巴西科研人员通过分析这种蘑菇的发光机制，人工合成荧光素分子，有望用于开展其他生物化学实验。 在巴西部分地区的棕榈树下长有一种当地人俗称“椰子花”的荧光蘑菇。在日光下这种蘑菇呈现黄白相间的颜色，但在夜里或黑暗的洞穴中它能发出绿色荧光，吸引昆
荧光镜检术荧光显微镜
荧光镜检术-荧光显微镜荧光镜检术是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体，使之受激发后而产生长波长的荧光，然后观察。荧光镜检术广泛应用于生物，医学等领域。1．荧光镜检术一般分为透射和落射式两种类型。（1）透射式：激发光来自被检物体的下方，聚光镜为暗视野聚光镜，使激发光不进入物镜，而使荧光进入物镜
病毒免疫荧光实验_荧光素标记抗体
实验材料荧光色素试剂、试剂盒抗体实验步骤荧光标记抗体方法有直接标记法和间接标记法两种。(1) 直接法：较为常用，具体步骤是：1) 抗体溶液的制备：用 0.01mol/L pH 7.1 PBS 将待标记抗体稀释至 20mg/ml;2) 荧光素：根据待标记抗体的总量，按 0.01mg 荧光素/mg 蛋白
蛋白质的内源荧光与荧光探针
利用荧光光谱法研究蛋白质一般有两种方法。一是测定蛋白质分子的自身荧光(内源荧光)，另一种是当蛋白质本身不能发射荧光时，通过非共价吸附或共价作用向蛋白质分子的特殊部位引入外源荧光(也称荧光探针)，然后测定外源荧光物质的荧光。 蛋白质的内源荧光 含有芳香族氨基酸(色氨酸(tryptophan ,Trp
稳态荧光测量和时间分辨荧光的区别
时间分辨荧光技术有基于时域和基于频域两种测量方法。由于时间分辨结果数据包含有比稳态荧光数据更多的信息,近年来,时间分辨荧光技术已成为生物化学与生物物理领域的主要研究工具之一。荧光寿命成像技术可以同时获得分子状态以及空间分布的信息,在生物学和医学领域也得到了越来越广泛的应用。以下将从原理、仪器及应用等
荧光测量配置
荧光测量常用配置光谱仪 AvaSpec- 2048光谱仪 (推荐-TEC型光谱仪)VA 光栅 (360-1100nm), 200µm 狭缝, DCL-UV, OSC软件 AvaSoft-Full 全功能软件光源 AvaLight-LED光源或 AvaLight-DH-S氘-卤钨灯光纤/探头 FCR-
免疫荧光
Immunofluorescence Technique (Spector Lab)protocol for immunofluorescence on cells Immunofluorescence Protocol (Walter Steffen)Methanol fixationForma
荧光PCR原理
1．荧光染料荧光基团通常各自拥有单一的光吸收峰。在光的刺激下，荧光基团吸收光的能量后通常以三种方式释放出能量：1) 光能 许多荧光基团吸收光能后仍旧以光能形式释放能量，并且发射光的峰值大于吸收峰。比如荧光染料Fam的光吸收峰为490nm，而发射峰为530nm。 2) 热能 某些荧光基团吸收光能后，能
荧光免疫分析
免疫分析是基于蛋白抗原和抗体之间、或者小分子半抗原与抗体之间的特异反应的分析方法，是生物分析化学的重要内容之一。其中，用荧光物质作为标记的免疫分析即为荧光免疫分析。作为荧光标记物，应具有高的荧光强度，其发射的荧光与背景荧光有明显区别；它与抗原或抗体的结合不破坏其免疫活性，标记过程要简单、快速；水溶性
荧光定量PCR
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结
叶绿素荧光参数
叶绿素荧光参数是用来评估植物光合作用效率和生理状态的重要指标。通过测量叶片的荧光辐射，可以获取多个参数，如最大光化学效率(Fv/Fm)、有效光化学效率(Fv'/Fm')、非光化学淬灭系数(qN)等。Fv/Fm反映光合机构的整体健康状况，Fv'/Fm'则考察光合反应中光
荧光检测方法
荧光检测是一种自然发光反应，通过荧光素酶与 ATP进行反应，可检测人体细胞、细菌、霉菌、食物残渣，在15秒钟内得到反应结果。光照度通过专用设备进行测量，并以数字形式予以表示，在1975年首先被应用到食品工业中，在1985年在化妆品制造业中得到应用。荧光定量：采用国际主流的荧光定量PCR技术，迅速提升
叶绿素荧光参数
叶绿素荧光参数是用来评估植物光合作用效率和生理状态的重要指标。通过测量叶片的荧光辐射，可以获取多个参数，如最大光化学效率(Fv/Fm)、有效光化学效率(Fv'/Fm')、非光化学淬灭系数(qN)等。Fv/Fm反映光合机构的整体健康状况，Fv'/Fm'则考察光合反应中光
低温荧光分析
通常荧光分析都在室温下进行，荧光光谱为带光谱，由于各种变宽因素，谱带往往较宽。自然界有许多有机化合物，其化学结构颇为接近，而且各存在着多种同分异构体和衍生物，它们的光谱往往相互重叠，难以鉴别表征以及定量测定。环境因素对分子荧光会产生显著的影响，温度是其中一个主要因素。随着温度的降低，介质黏度增大，荧
荧光成像系统
对完全校准好的荧光成像系统，当用不同的滤色镜组时，样品上一个点在检测器上精确成像为一个点，也就是像素对像素。然而，不同颜色的通道 merge 时，物镜的色差校正不够、滤镜光路没有完全对准都会使得荧光信号之间的记录有差错。对具有复杂图案的图像或明暗信号相混的图像，这个可能就检测不到。会得出这样的结论：
激光荧光分析
激光荧光分析采用发射光强度大，波长更纯的激光作光源，该光源大大提高了荧光分析方法的灵敏度和选择性。利用激光光源的相干性可以产生非常理想的辐射，以激光为光源可以使仪器仅仅使用一个单色器，加上利用可调谐激光器的可调功能获取激发光谱发射光谱。目前，激光诱导荧光分析法已经成为分析超低浓度物质的灵敏而有效的方
什么是荧光？
荧光是物质吸收电磁辐射后受到激发,受激发原子或分子在去激发过程中再发射波长与激发辐射波长相同或不同的辐射。当激发光源停止辐照试样以后,再发射过程立刻停止,这种再发射的光称为荧光。
荧光光谱
荧光光谱：荧光光谱包括激发谱和发射谱两种。激发谱是荧光物质在不同波长的激发光作用下测得的某一波长处的荧光强度的变化情况，也就是不同波长的激发光的相对效率；发射谱则是某一固定波长的激发光作用下荧光强度在不同波长处的分布情况，也就是荧光中不同波长的光成分的相对强度。 既然然激发谱是表示某种荧光物质在不同
荧光偏振简介
Perrin于1926年首先描述了荧光偏振理论，他观察到溶液中的荧光分子在受到偏振光激发时，如果在激发时分子保持静止，该分子将发出固定偏振平面的发射光（发射光仍保持偏振性）。然而，如果分子旋转或翻转那么发射光的偏振平面将不同于初始激发光的偏振平面。分子的偏振性与分子旋转驰豫时间成比例，分子旋转驰豫时
什么是荧光
荧光是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。
荧光分析特点
（1）分子荧光光谱分析的主要特点是灵敏度高、选择性好，荧光分析的灵敏度要比吸收光谱测量高2-3个数量级。分光光度法通常在 10-7 级 ，而荧光的灵敏度达10-9。（2）强选择性强，荧光物质具有两种特征光谱：激发光谱和吸收光谱，相对于分光光度法单一的吸收光谱来说，荧光光谱可根据激发光谱和发射光谱来鉴
荧光免疫技术
荧光免疫技术是标记免疫技术中发展最早的一种。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescentantibod
荧光造影分析
1．臂一视网膜循环时间（arm-retina circulation time ,A-Rct ）荧光素从肘前静脉注射后，经右心→左心→主动脉→颈总动脉→颈内动脉→眼动脉而到眼底，为时7～12秒（但亦有长达15～30秒者），两眼相差不能超过0.5～1秒。2．视网膜血循环的分期及荧光形态荧光素钠经眼动脉
荧光检测方法
荧光检测是一种自然发光反应，通过荧光素酶与 ATP进行反应，可检测人体细胞、细菌、霉菌、食物残渣，在15秒钟内得到反应结果。光照度通过专用设备进行测量，并以数字形式予以表示，在1975年首先被应用到食品工业中，在1985年在化妆品制造业中得到应用。荧光定量：采用国际主流的荧光定量PCR技术，迅速提升
荧光的产生
物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光单重态和三重态。分子中的电子运动包括分子轨道运动和分子自旋运动，分子中的电子自旋状态，可以用多重态2S+1描述，S为总自旋量子数。若分子中没有未配对的电子，即S=0，则2S+1＝1，称为单重态；若分子中有两个自旋方向平行的未配对电子，即S=1，则2S+1＝
流式荧光技术
流式荧光技术又称液态芯片技术(Luminex xMAP技术)，其整和了荧光编码微球、激光分析、应用流体学及高速数字信号处理等多项最新科技，是美国Luminex公司于上世纪末开发出的新一代高通量发光检测技术。目前该技术已被广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别等领域，并得到各权威机构和
偏振荧光分析
任何物质都处于不断运动中，液体环境中的荧光分子也不例外。因此当受到偏振光激发时，荧光分子的运动状态(如旋转或翻转)、荧光分子与其他因子相互作用(如相互结合或排斥)、其所处环境的性质(如溶液的黏度、温度_等因素都可能对荧光分子受激发后发出的偏振光的性质产生影响。对此进行分析比较，就可能揭开物质活动的内
什么是荧光
荧光是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。
荧光成像系统
用荧光显微镜进行3D球状体荧光成像时，需要进行仪器设置优化和使用高级功能才能得到更好的成像结果。对球状体进行Z轴层扫时，需要选择合适的物镜并进行合适地聚焦才能拍出更清晰的图片。EVOS细胞成像系统和配套的CellesteTM成像分析软件可以完美地对球状体的大小、结构和蛋白表达水平进行定性和定量分析。
同步荧光分析
同步荧光分析由Lloyd首先提出，它与常用荧光测定最大的区别是同时扫描激发和发射两个单色器波长，由测得的荧光强度信号与对应的激发波长(或发射波长)构成光谱图，即同步荧光光谱。按光谱扫描方式的不同，同步荧光分析可以分为恒(固定)波长法、恒能量法、可变角法和恒基体法。同步荧光分析具有光谱简单，谱带窄、分