共聚焦显微镜使用技巧与心得（一）之荧光原理篇
工欲善其事必先利其器，想用好共聚焦显微镜光会用操作可不行，那永远不可能成为“共聚焦达人”，要想成为“达人“必先懂得原理，好吧，开始啦。什么是荧光？荧光：荧光现象是物质在光的照射下所产生的发光现象。首先荧光是一种光致发光现象，荧光物质必须是在光的照射下才能发光。否则就是其他的发光现象而不是荧光。例如夜光物质，夜光表，虽然也需要先用光照射，但离开光照射后它还能继续发光，就不是荧光。这叫磷光。另外一个例子是作western blot时用化学发光，也是发光，但不是荧光。其次，荧光物质发出的荧光与照射光的色彩不同。准确地说，是荧光物质发光的波长与照射光的波长是不同的。典型的荧光物质是在紫外线照射下能发出黄绿色的荧光。例如钱上的的荧光防伪标记，用紫外线照射后能发黄绿色的光。所以在使用荧光显微镜的照片，观察绿色荧光样品时，你会看到物镜下照射到样品的光是蓝色的光。观察红色荧光样品时，照射样品的却是绿色的光。但在目镜里却能分别看到绿色与红色的荧光......阅读全文
叶绿素荧光参数
叶绿素荧光参数是用来评估植物光合作用效率和生理状态的重要指标。通过测量叶片的荧光辐射，可以获取多个参数，如最大光化学效率(Fv/Fm)、有效光化学效率(Fv'/Fm')、非光化学淬灭系数(qN)等。Fv/Fm反映光合机构的整体健康状况，Fv'/Fm'则考察光合反应中光
荧光的产生
物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光单重态和三重态。分子中的电子运动包括分子轨道运动和分子自旋运动，分子中的电子自旋状态，可以用多重态2S+1描述，S为总自旋量子数。若分子中没有未配对的电子，即S=0，则2S+1＝1，称为单重态；若分子中有两个自旋方向平行的未配对电子，即S=1，则2S+1＝
荧光成像系统
用荧光显微镜进行3D球状体荧光成像时，需要进行仪器设置优化和使用高级功能才能得到更好的成像结果。对球状体进行Z轴层扫时，需要选择合适的物镜并进行合适地聚焦才能拍出更清晰的图片。EVOS细胞成像系统和配套的CellesteTM成像分析软件可以完美地对球状体的大小、结构和蛋白表达水平进行定性和定量分析。
免疫荧光技术的合适荧光素的选择
1）具有与蛋白质形成共价键的化学基团。荧光素-N=C +NH-蛋白质 荧光素-N-C-N-蛋白质‖ ︱ ︱‖ ︱S H H SH2）荧光效率高，标记后下降不明显。3）荧光色泽与背景色泽对比鲜明。4）标记后能保持生物学活性和免疫活性5）标记方法简单、快速。6）安全无毒
荧光免疫技术常用荧光色素有哪些？
①异硫氰酸荧光素，呈现明亮的黄绿色荧光。②四乙基罗丹明，呈橘红色荧光。③四甲基异硫氰酸罗丹明，呈橙红色荧光。④藻红蛋白，呈明亮的橙色荧光。
关于荧光分析法的荧光的产生介绍
根据波兹曼 （Boltzmann）分布，分子在室温时基本上处于 电子能级的基态。当吸收了紫外-可见光后，基态分子中的电子只能跃迁到激发单重态的各个不同振动-转动能级，根据自旋禁阻选律, 不能直接跃迁到激发三重态的各个振动-转动能级。 处于激发态的分子是不稳定的，通常以辐射跃迁和无辐射跃迁等方式
荧光western－Blot－：选择可见荧光检测还是红外检测？
荧光western Blot：选择可见荧光检测还是红外检测？荧光检测的主要优势之一是可以进行多重检测（2种甚至更多种蛋白）。当前的实验技术允许使用近红外检测两种蛋白也可以使用三色RGB可见荧光检测三种蛋白。近红外检测的优势同时检测三种蛋白要比两种好，为什么我们还要选择红外成像呢？红外荧光检测印迹膜上
双重荧光定量PCR探针荧光基团该怎么选择
有干扰的话，在仪器上面就可以看出来，比如说，FAM和VIC，FAM有信号，单独看VIC也肯定有信号，只是低点而已
荧光倍频峰会随荧光信号减弱而减弱吗
一般来说,扫描荧光光谱应该从波长大于激发光的波长约 5 nm 处作为扫描起点,原因有两点：1) 避免激发光的干扰；2) 从能级上来看,荧光光谱不可能在小于激发波长的位置采集到信号.因为激发光的能量决定了将分子中的电子激发至能跃迁到的最高能级,因此,从这个能级向下跃迁而发出的荧光波长不可能小于激发光的
实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】
【FT-PCR】实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】_风途厂家_Kgaoletšo ya dikarolo tše bopago seswantšho tša kgole ya PCR 具体来讲扑杀无害化处理染疫动物，禁止泔水饲喂生猪，加强生猪养殖运输屠宰等各个环节的清洗和消毒，包括养
X荧光分析仪的光源是“荧光”吗？
强调“荧光”，许多用户误认为只有用X光管作为激发源的管激发仪器才是X荧光仪，一味地强调所谓“荧光”。事实上，如前所述，无论是采用X光管还是采用放射性同位素源作为激发源，只要是由X射线激发、通过测定被测样品发出的荧光X射线得出其化学成分及含量的仪器，都是X荧光分析仪。
什么是荧光寿命？什么是荧光的淬灭
荧光寿命是由电子在与基态自旋多重度相同的稳定激发态的寿命决定的。有很多机理可以改变这个寿命－－－系统间穿跃(intersystem crossing), 淬灭(quench)，热驰豫(thermal relaxation), 等。
原子荧光光度计的荧光类型
a）共振荧光----原子吸收的逆过程， 吸收的能量和释放的能量相等。E=hv=hc/λ b）非共振荧光----能量不相等，非共振荧光线 荧光猝灭，使用氩气做载气和屏蔽气，氩气作用： a）载气（内气：包括产生的氢化物蒸汽、氢气） b）屏蔽气（防止氢化物被氧化、抑制荧光猝灭、稳定原子化环境）
荧光免疫技术常用荧光色素有哪些？
①异硫氰酸荧光素，呈现明亮的黄绿色荧光。②四乙基罗丹明，呈橘红色荧光。③四甲基异硫氰酸罗丹明，呈橙红色荧光。④藻红蛋白，呈明亮的橙色荧光。
探针法荧光定量pcr－荧光值要达到多少
定量PCR有绝对定量跟相对定量，绝对定量就是先用已知浓度的质粒浓度梯度(1.00E+07、1.00E+06、1.00E+05、1.00E+04、1.00E+03)制作标准曲线，然后通过做Real-timePCR的CT值计算出其表达量;相对定量是比较管家基因(GAPDH)与目的基因的CT值，得出各标本
荧光定量PCR技术的荧光定量PCR的方法
接下来我们就来了解一下荧光定量的主要方法，我们如何选择合适的方法？荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类，特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物；而非特异性检测方法是在在PCR反
X射线荧光光谱和荧光光谱－区别
一、理论上。荧光光谱是比较宽的概念，包括了X射线荧光光谱。二、从仪器分析上，荧光光谱分析可以分为：X射线荧光光谱分析、原子荧光光谱分析，1）X射线荧光光谱分析——发射源是Rh靶X光管2）原子荧光光谱分析——可用连续光源或锐线光源。常用的连续光源是氙弧灯，常用的锐线光源是高强度空心阴极灯、无极放电灯、
荧光测硫仪紫外荧光法测定原理
荧光测硫仪紫外荧光法测定原理荧光测硫仪（硫含量测定仪）可广泛用于石油、化工、电力、煤炭、食品、环境保护及其它领域，是国内外较为先进的硫分析仪器。是采用物理分析方法， 快速测定水泥中SO3的百分含量，能让水泥企业即时调整水泥中石膏的掺入量并预知用该种水泥生产的混凝土的凝固时间，还可以应用于需要分析SO
荧光原位杂交实验——荧光原位杂交技术
荧光原位杂交可应用于：（1）动植物基因组结构研究；（2）染色体精细结构变异分析；（3）病毒感染分析；（4）肿瘤遗传学和基因组进化研究。实验方法原理用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵
荧光分析法的荧光是如何产生的？
根据波兹曼 （Boltzmann）分布，分子在室温时基本上处于 电子能级的基态。当吸收了紫外-可见光后，基态分子中的电子只能跃迁到激发单重态的各个不同振动-转动能级，根据自旋禁阻选律, 不能直接跃迁到激发三重态的各个振动-转动能级。处于激发态的分子是不稳定的，通常以辐射跃迁和无辐射跃迁等方式释放多余
关于免疫荧光技术的常见荧光的介绍
荧光素 1)FITC 2)RB200 3)TRITC 4）镧系：Eu、Tb 5)PE 6）其它 常见荧光素的特性 1)FITC：黄色结晶粉末，吸收光：490~495nm，发射光：520~530nm，明亮的黄绿色荧光。 2)RB200：橘红色粉末，吸收光570nm，发射光595~
荧光探针和荧光染料对于PCR技术的区别
1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭
FITC荧光二抗？——EarthOx新型DyLight－488绿色荧光
FITC（Fluorescein Isothiocyanate，异硫*酸荧光素）是一种绿色荧光团，在免疫学实验里，经常被用于荧光团标记到相应的检测分子，如抗体上。FITC的纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为 490～495nm，最大发射光波长
荧光western－Blot：选择可见荧光检测还是红外检测？
荧光western Blot：选择可见荧光检测还是红外检测？ 荧光检测的主要优势之一是可以进行多重检测（2种甚至更多种蛋白）。当前的实验技术允许使用近红外检测两种蛋白也可以使用三色RGB可见荧光检测三种蛋白。 近红外检测的优势 同时检测三种蛋白要比两种好，为什么我们还要选择红外
荧光显微镜记录荧光图像的方法
荧光显微镜所观察到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察，作为一般定性观察基本上是可靠的。随着技术科学的发展，采用细胞分光光度计、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜和图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果
荧光显微镜记录荧光图像的方法
荧光显微镜所观察到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察，作为一般定性观察基本上是可靠的。随着技术科学的发展，采用细胞分光光度计、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜和图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果
荧光计能替代荧光光度计吗
不考虑光源和检测器的优劣，就单色器条件的限制，荧光计相当于一个固定波长条件下的荧光分光光度计。 如果考虑光源和检测器的优劣，它还是一个性能不佳的光度计。现在，问题就好解释了。 荧光计只能测定某一特定波长条件下的荧光强度。当然，理论上可以换不同波长的滤光片来测定一系列的数据来绘制荧光光谱和激发光谱，不
免疫荧光技术的常见荧光剂有哪些？
1)FITC2)RB2003)TRITC4）镧系：Eu、Tb5)PE6）其它
实时荧光定量－PCR－所用荧光探针及功能介绍
应用于实时定量 PCR 检测体系中的荧光探针主要有两种:一种是 TaqMan 探针,一种是分子信标探针。Tyagi 和 Krammer(1996)首次建立了分子信标探针,在同一寡核苷酸探针的5'端标记荧光素、3'端标记淬灭剂(DABCYL)分子信标探针能形成发夹结构,探针的噜扑环(L
原子荧光原子荧光测定时荧光强度值最低和最高的问题
请教,在原子荧光测定时,有没有荧光强度值最低和最高的限制.就是说我的空白荧光值在什么范围最好,测定中荧光强度值超过多少,测定将不准确,如何判定呢? 答：建议用仪器公司提供的条件，标准系列浓度，一般不会出现很奇怪的值的 注：荧光测的都是净荧光值，空白高低并没有多大的关系。再者，荧光都是使用标准曲线